罕见类孟买Bmh血型血清学鉴定分析

李 静，姚克文，张 彬，丑广程

(1.保定市中心血站，河北保定071000；2.保定市妇幼保健院，河北保定071000；3.河北大学附属医院，河北保定 071000)

类孟买血型，是极为罕见H缺失的ABO亚型，H抗原是一种含有岩藻糖的糖单位，是ABO血型系统中A、B抗原形成的前体物质，在人体中存在两种表达形式，一种是以脂溶性H抗原在红细胞和血管内皮等组织细胞膜上表达，另一种以水溶性H抗原在体液、分泌液(如唾液和胃液)中表达。类孟买血型人群因红细胞膜上完全或部分缺失ABH抗原，而分泌液中可表达或不表达ABH物质[1]。在日常血型鉴定中，红细胞上A、B抗原缺乏或弱表达时，容易分析为抗体减弱，而造成类孟买血型的漏检及鉴定错误，类孟买血型中含有特异性的抗-H或抗-HI抗体，呈现为多样性，容易被忽略而造成血液输注风险。ABO血型抗原性极强，当输入相应抗原血液或37 ℃有活性的抗体时，易激活补体造成严重的溶血性输血反应，因此，血型的正确鉴定是输血医学中的重要环节。鉴于类孟买血型的特殊性和罕见性，建立合适的血型筛查策略，对每一例个体的血清学定型分析方案，以及分子生物学的基因鉴定都具有重要意义，但多数输血科不具备分子生物学技术鉴定的条件，因此，血型血清学的正确诊断能及时有效减少误诊、漏诊及输血事故的发生，是临床输血安全的最直接保障。保定市中心血站实验室发现1例因正反定型不符而提示进行H 抗原检测，后经血清学鉴定为分泌型类孟买Bmh血型，同时也是本市首次发现的类孟买血型，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者，女，65岁，汉族，保定市人，因双膝骨性关节炎住院治疗，入院后常规血型鉴定及备血，血型检测时发现其ABO正反定型不符，正定型为O型，反定型为B型(患者无输血史)，医院将患者血样送至保定市中心血站血型研究室鉴定。

1.2仪器与试剂 标准血清抗-A、抗-B(批号20181020)、抗-H(批号20190114)、标准ABO红细胞(批号20195320)、Rh血型分型试剂、MN试剂(20190403)、抗人球蛋白试剂(批号20185001)及谱细胞(批号20190530)均为上海血液生物医药有限责任公司，抗-Lea(批号8000245780)、抗-Leb(批号8000249125)均为荷兰Sanquin公司，人源抗-A、抗-B和抗-AB(效价≥128，且不含不规则抗体)、新鲜新生儿细胞、新鲜成人细胞均为保定市中心血站实验室自制，所有试剂均在效期内使用。血清学专用离心机(日本久保田，KA2200)、电热恒温振荡箱、水浴箱。

1.3方法 以下试验方法按照文献[2]及厂家试剂说明书操作。

1.3.1血型鉴定 ABO正定型增加2份人源抗-AB(抗-AB1和抗-AB2)，H抗原的鉴定分别用Oc和Bc做强、弱阳性对照，反定型加自身c对照。

1.3.2直接抗人球蛋白试验及相关血型鉴定 检测患者红细胞直接抗人球蛋白试验、Rh分型、MN及Lewis血型。

1.3.3吸收放散试验 (1)取患者三洗红细胞1份，与等量人源抗B血清混合，4 ℃吸收1 h，冷盐水洗涤6次，56 ℃放散10 min，离心取放散液1与标准B细胞反应，取O型细胞同步阴性对照。(2)取与患者Rh分型同型的O型三洗红细胞对患者血清进行吸收放散(方法同上)，获得上清液2(吸收后上清液与O型红细胞反应为阴性)和细胞放散液2。

1.3.4不规则抗体及特异性的鉴定 (1)用谱细胞对上述上清液2和放散液2分别在室温盐水和抗人球介质中进行筛查试验。(2)选用B、O型新生儿红细胞和成人红细胞分别与患者血清进行试验。(3)取患者血清加等量O型(分泌型)唾液室温中和15 min后，加O型红细胞进行血型物质中和试验(同时做盐水对照)。

1.3.5唾液血型物质检测 单克隆抗-H和人源抗-A、抗-B血清倍比稀释，取凝集强度(2+)作为最适稀释度。患者唾液经24 h冷冻后煮沸处理，离心上清液与抗血清做中和抑制试验(同时做盐水对照)。

1.3.6抗-H效价测定 生理盐水倍比稀释患者血清，加O型红细胞分别在4 ℃、室温、37 ℃条件下孵育10 min，离心后取凝集强度为“1+”稀释度的倒数为抗体效价。

2 结 果

2.1患者血型鉴定 患者正定型为O型，反定型与ABO各细胞发生不同程度的凝集，与自身细胞和抗-H不反应(对照Oc反应3+，Bc反应1+)，红细胞上检测不到A、B、H抗原，血清中存在不规则抗体，初步鉴定为孟买或类孟买血型。见表1。

表1 血型鉴定结果

2.2直接抗人球蛋白试验及相关血型鉴定 患者红细胞多抗(IgG+C3d)试验结果为阴性，Lewis血型为Le(a-b+)，其他血型为CCDee、MN型。

2.3吸收放散试验 患者红细胞的吸收放散液1与标准B细胞室温凝集，检出B抗原，鉴定为类孟买血型；血清吸收后上清液2反定型为B型，排除不规则抗体的存在，正反定型一致。见表2。

表2 吸收放散试验结果

2.4不规则抗体的鉴定 用谱细胞检测吸收后的上清液2，在盐水介质及抗人球蛋白试验反应中均为阴性，血清中没有ABO系统以外的抗体；谱细胞与放散液2在盐水介质反应格局为1、3、4、7、9号细胞为1+s凝集强度，2、5、8号细胞为2+凝集强度，6、10号细胞为2+s凝集强度，自身细胞为阴性，抗人球蛋白试验反应为阴性。患者血清与新生儿红细胞的凝集反应，无论是室温还是4 ℃都明显弱于成人红细胞，血型物质中和试验中抗体可被血型物质抑制,不再与O细胞凝集，总结上述试验确定血清中不规则抗体为抗-H抗体，而不是抗-HI抗体。见表3。

表3 不规则抗体特异性鉴定结果

2.5唾液血型物质 试验结果为加Ac的抗-A管未被抑制2+，加Bc的抗-B管完全抑制0，加Oc的抗-H管部分被抑制1+，检出患者唾液中存在B、H血型物质，未检测出A物质，鉴定患者为分泌型。

2.6抗体效价 抗-H抗体4 ℃效价为64，室温效价为16，37 ℃效价为<1。

3 讨 论

类孟买型是一种罕见的红细胞血型表型，其发生概率极低，据文献报道，在中国台湾和福建，类孟买型出现频率较高，为1/8 000～1/8 500，在北京低至1/1 020 000[3]，此类孟买血型为首次在本市发现，突显其稀有血型的医学价值。 孟买与类孟买血型都是H抗原的缺失型，主要区别在于红细胞和分泌液中是否能检测到ABH抗原物质[4]。类孟买型在分泌液和血浆中含有Ⅰ型ABH抗原，可用唾液血型物质检测，红细胞上无血清学方法检测的H抗原，但可以携带有少量的A和(或)B抗原，是因个体遗传差异性表现为类孟买血型的多样性，通常认为是红细胞上吸附了血浆中的糖脂类血型物质所导致[5]。本文患者血型正定型未检出红细胞上ABH抗原，但人源的抗-AB在4 ℃表现为弱反应性，分析是由于红细胞从血浆中吸附了微弱的A或B抗原，因数量极少而不能被标准血清检测出；通过红细胞吸收放散试验检测到抗-B抗体,说明红细胞上存在B抗原，唾液血型物质试验也检出相应的B 及H 物质，确定患者为类孟买Bmh分泌型。

Lewis抗原的合成依赖于Le基因和Se基因，分泌型个体产生可溶性ABH物质的能力也是由Se基因决定。在分泌型人体内具有Le和Se基因，Se基因产生Ⅰ型H抗原，作为Le基因编码的a1,4-岩藻糖转移酶转化成两次岩藻糖基化的Leb抗原，所以在他们的唾液中有Lea和Leb抗原，红细胞Lewis 血型表现为Le(a-b+)；而非分泌型人se不能将前体物质转化成Ⅰ型H抗原，形成单次岩藻糖基化的Lea抗原，因此，在他们的唾液中仅有Lea抗原，红细胞Lewis 血型表现为Le(a+b-)。文献报道类孟买血型个体Lewis血型表现为Le(a-b+)或Le(a-b-)，而不会表现为Le(a+b-)[6]，本文患者Lewis血型为Le(a-b+)，与唾液血型物质检测相互验证。在实际工作中，往往受标本来源限制、采集困难等影响，无法进行唾液血型物质试验，而不能确认患者的分泌状态，此时Lewis 血型鉴定更突显其优越性。

类孟买血型的血清中除ABO分型的抗-A或抗-B外，常含有抗-H、抗-HI抗体或两者皆有。H抗体的典型特征是能被分泌型唾液抑制，能与O型脐血反应(比成人O细胞的反应弱)，反之则称为抗-HI抗体[5-6]。本次试验中采用新生儿细胞来验证抗体的这一性质，正是因为新生儿红细胞是i表型且H抗原反应性弱，与成人红细胞对比佐证，将其他类型抗体与抗-H/抗-HI抗体区分，同时还可以解决基层实验室获取脐血细胞困难的问题。孟买型个体产生的抗-H/抗-HI抗体是特殊冷抗体，在4～37 ℃范围内活性较大，室温下也可影响血型的鉴定，而抗-HI抗体生物活性相对较弱，37 ℃有活性，溶血性强的抗-H抗体比抗-HI抗体更具有输血风险性，则更应被给予重视。

正确鉴定类孟买血清中抗体特性可辅助选择适合的血液输注。文献报道了类孟买血型输血策略有两类，即同型输注和配合型输注[7-8]， 考虑本文患者手术存在输血可能性，随机选取了10人份的B型去白悬浮和O型洗涤红细胞血做交叉配血试验，结果发现与O型血在37 ℃抗人球介质中显示较弱凝集，与B型血为阴性反应。考虑实验室结果与实际输血情况存在差异，交叉配血相合并不能表明输注血液就绝对安全有效，结合以往文献报道[9]，37 ℃有反应活性的抗-H抗体通常能够激活补体，引起溶血性输血反应发生，对检测结果的判断和临床输血安全产生影响。本实验室正确确定患者血型后，将这一血型特点和输血指导方案反馈给临床，临床重新规划了手术方案，为患者成功避免了输血风险。

目前，微柱凝胶血型卡的普及，易造成类孟买血型的漏检。类孟买血型由于个体遗传的差异性，存在血清学特性的差异，红细胞上无或弱表达的A、B抗原，抗体凝集的强弱影响，易被误定为O型[10-11]，而导致输血反应的发生[12]，所以建议在卡式定血型时，大部分凝胶卡上没有O细胞反应孔，需谨慎对待血型定型不符的标本，尤其是鉴定为O型血时反定型中Ac和Bc凝集相差大于“2+”以上反应，加做O细胞或抗筛细胞和自身对照，必要时结合抗-H抗体血清的应用，不仅有利于ABO 亚型鉴定，更能避免罕见的孟买与类孟买血型的漏检。

综上所述，随着血型血清学检测方法和试剂的完善，类孟买血型即使在基层输血实验室也可得到快速准确的鉴定，这可帮助研究者及时有效地分析稀有血型，从而避免输血风险。而将来进一步结合分子生物学做基因检测和测序，更有助于阐明此类罕见血型的遗传特性和基因多态性[13]。血型的正确鉴定固然重要，而输血不良反应的应变对策，也是为此类患者提供优质安全输血的有力保障[14-15]。