山东地区新生儿地中海贫血筛查及基因检测结果分析

刘 瑞， 朱 娜， 雒 猛， 赵 丹， 楚中华

1.山东省脐带血造血干细胞库，济南 250102 2.山东大学齐鲁医院血液科，济南 250102

地中海贫血是一种遗传性、慢性、溶血性贫血，因最早在地中海沿岸国家发现而得名[1]。它是由遗传的基因缺陷致使血红蛋白(Hb)中1种或1种以上珠蛋白链合成缺失或不足所导致的病理状态[2]。该病在我国常见于南方省份，主要集中在广东、广西、云南、海南等，是一种对人体健康危害较大的遗传病[3]。随着经济的发展与交通工具的变革，流动人口的社会融合也越来越普遍，导致北方这种疾病的发生率也逐步提高。但目前对北方地区地中海贫血流行病学相关的大样本数据研究报道较少，本研究通过对16 098例脐带血样本进行地中海贫血检测，旨在为地中海贫血检测研究提供一定的数据支持，同时也可填补北方地区在这一方面的空白。

脐带血(umbilical cord blood，UCB)是胎儿分娩后残留在胎盘和脐静脉中的血液，通常是废弃的[4]。随着脐带血中的大量造血干细胞被发现，且有研究[5]证实自体造血干细胞移植可有效治疗恶性血液病，因此近几年临床对脐带血的使用越来越普遍。另一研究[6]表明，脐带血血红蛋白电泳在筛查新生儿地中海贫血中也起到了非常重要的作用，可作为新生儿地中海贫血及异常血红蛋白病有效的筛查方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年7月1日至2017年12月31日山东省脐带血造血干细胞库16 098例异体库新生儿脐带血样本，均来自足月产儿。

1.2 仪器与试剂 SPIFE-3000血红蛋白电泳仪(Helena，美国)；PCR扩增仪(ABI，美国)；血红蛋白电泳试剂盒(Helena，美国)；AFSA2质控品(Helena，美国)；生理盐水(威高，中国)；四氯化碳(富宇，中国)。

1.3 血红蛋白电泳检测 取100 μL脐带血，经生理盐水洗涤3次后，加入血红蛋白电泳试剂盒中的红细胞裂解液100 μL，振荡30 s，再加入300 μL四氯化碳振荡1 min后，离心5 min，制成血红蛋白悬液。然后将悬液在SPIFE-3000血红蛋白电泳仪上样电泳，同时电泳的还有AFSA2质控品。操作步骤严格按照仪器使用说明书操作，电泳完成后将琼脂糖凝胶片进行染色、脱色、烘干及数据分析等[7]。

1.4 基因分型测定 对电泳得到的有地中海贫血异常的脐带血血样，提取DNA后进行基因检测。采用荧光PCR熔解曲线法检测α和β-地中海贫血，所用试剂盒为成都博奥独立医学实验室提供；对异常血红蛋白样本采用DNA测序法检测。

1.5 判断标准 健康婴儿血红蛋白电泳结果显示：无异常Hb区带； Hb A组分占比约为30% 、Hb F组分占比约为70%；Hb A2组分占比为0.1%～1%。α-地中海贫血：有异常Hb Bart区带[8]、Hb CS区带；β-地中海贫血：Hb A低于12%且Hb F高于88%。异常血红蛋白：检出异常Hb区带[9]。

2 结 果

2.1 血红蛋白电泳检测结果分析 结果(图1)显示：在16 098例脐带血样本中，共检出血红蛋白异常样本105例，筛查阳性率为0.65%；其中疑似α-地中海贫血61例，疑似β-地中海贫血20例，疑似异常血红蛋白24例。

图1 各种血红蛋白电泳条带

2.2 血红蛋白电泳结合基因诊断结果分析 对105例血红蛋白电泳阳性的样本进一步进行基因检测，结果(表1)显示，α-地中海贫血为50例，筛查符合率为81.97%。所检出的类型均为我国常见α-地中海贫血突变，其中常见缺失突变48例，占比最高的是3.7基因缺失(-α3.7/αα)，为0.16%，其次东南亚缺失型(--SEA/αα)，占0.10%；常见点突变2例，分别是αCSα/αCSα和αQSα/αQSα各1例；β-地中海贫血为5例，筛查符合率为25%，基因型均为βCD26/βN。检出异常血红蛋白20例，筛查符合率为83.33%，其中Hb D 15例，Hb G 2例，Hb J 、Hb E和Hb H各1例。

表1 105例血红蛋白电泳阳性样本的基因检测结果

2.3 电泳异常样本父母户籍所在地分析 在105例阳性婴儿样本中，父母双方均为山东籍92例，父母有一方为省外户籍13例，无父母均为省外户籍样本。在13例省外样本中，其中南方户籍人数仅为3例，分别是四川、云南和福建各1例，其他均为北方地区人口，主要分布于东北三省及内蒙古、河南等地。

3 讨 论

地中海贫血是一种危害人类生命健康的遗传疾病，也是影响我国国民健康的几大遗传病之一，因其在南方的发病率较高，所以大多数的地中海贫血研究及文献都来源于我国南方地区，对北方地中海贫血的状况却鲜有报道。关于地中海贫血的检测方法，从最开始的血常规检测到现在的血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测，为地中海贫血的筛查与诊断提供了可靠依据，而后者也是目前各实验室主流的地中海贫血检测方法[10]。

本研究采用血红蛋白电泳法结合基因检测对山东地区新生儿脐带血进行地中海贫血检测，结果与南方地区相比，具有一定的差异性。首先，相比于南方地区地中海贫血的高检出率(10%～40%)[11]，山东地区地中海贫血检测率较低，约为0.65%，这说明北方地区的发生率远远低于南方地区；其次，在基因类型上也存在差异性：我国常见的α-地中海贫血类型主要是--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα 这3种，南方地区中--SEA/αα一般占比最高，而在本研究中最高为-α3.7/αα，共计26例，另检出泰国型基因缺失1例(--Thai/αα)。β-地中海贫血类型中，南方地区常见的类型主要是βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、βCD41-42/βN，但山东地区只检测到βCD26/βN，这可能是因为此基因型为山东地区主要的β-地中海贫血类型，另一原因可能为选取的检测样本主要出现异常条带而疑似为β-地中海贫血的样本，血红蛋白含量异常的样本选取较少。

在对某一地区的地中海贫血携带及发病情况进行调查时，还需考虑人群成分的多样性对调查结果的影响[12]。在户籍所在地数据统计中，仅有3例样本父母为南方户籍，占总样本的0.02%，其他样本均为北方样本。因此，本研究中所选取样本可以代表山东地区及北方地区地中海贫血基因型类型。

综上所述，相比于南方地区，山东地区地中海贫血发生率偏低。地中海贫血类型具有一定的地区特点。