芍药苷对抗炎反应因子TNF-a和IL6的作用研究

刘俊彤 李轶聪 董丽强 刘贺 张延旭

【摘要】目的 研究芍药苷对胶原诱导性关节炎导致炎症因子TNF-a和IL6的影响。方法 利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠关节炎动物模型，采用qRT-PCR和ELISA实验方法检测血液中炎症因子TNF-a和IL6的变化水平。结果 芍药苷对关节炎导致的炎症因子TNF-a和IL6上升具有抑制作用，其作用呈现剂量依赖性。结论 芍药苷对小鼠炎症反应具有一定的抑制作用，其作用的机制可能和免疫系统相关。

【关键词】芍药苷;TNF-a;IL6

【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.30..02

Study on the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6

LIU  Jun-tong1， LI  Yi-cong2*， DONG  Li-qiang1， ZHANG  Yan-xu1

（1.Jiamusi University，Heilongjiang Jiamusi 154000，China;

2.the 962 Hospital of joint logistics support force of PLA，Heilongjiang Harbin 150000，China）

【Abstract】Objective To study the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6 in collagen induced arthritis.Methods A mouse model of arthritis was established with type II collagen. The levels of TNF-a and IL-6 in blood were detected by QRT PCR and ELISA.Results Paeoniflorin inhibited the rise of TNF-a and IL-6 induced by arthritis in a dose-dependent manner.Conclusion Paeoniflorin can inhibit inflammatory response in mice， and its mechanism may be related to immune system.

【Key words】Paeoniflorin;TNF-a;IL6

关节炎是一种慢性的全身炎症反应，其中最为常见的病因多为风湿和类风湿导致。类风湿性关节炎的病变特点为慢性的、对称性的多关节以及滑膜病变[1]。目前临床治疗主要以激素为主。但是大量的应用激素会导致激素性股骨头坏死、高血压、全身水肿等激素相关并发症的发生，副作用较大。而我国传统中药在治疗类风湿性关节炎方面具有独特的见解和疗效。其中芍药苷为近年来报道的具备抗炎、抗氧化的作用，并且其不良反应以及相关毒副作用较少[2]。本文针对芍药苷在关节炎小鼠的动物模型中的作用进行研究，主要观察炎症相关因子的TNF-a和IL6在应用芍药苷后的变化，并对其中的作用机制做出初步的探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

芍药苷购自上海一基实业有限公司，生产包装时的纯度大于88%。小鼠关节炎诱导试剂为II型胶原（Sigma公司），RNA逆转录以及实时定量聚合酶链反应试剂盒购自北京Bioteck公司。ELISA检测试剂盒购自德国Bender公司。实验小鼠为DBA/1品种，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.2 方法

小鼠关节炎模型的构建[3]。将200 ug的II胶原溶于浓度为0.05 mol/L的100 mL醋酸中，并与相同体积的弗氏完全佐剂充分混合，注射入小鼠皮下。在14天后再次以同样的方式重复操作。

1.3 实验分组

将小鼠分为5组，正常组、关节炎组、芍药苷25 mg/kg组、芍药苷50 mg/kg组、芍药苷100 mg/kg组.给药途径为经口注射。于2周后应用摘眼球取血法获得血液。提取血液中的有核细胞，裂解液裂解细胞后获得血液中的RNA，其后按照RNA总量为1000 ng进行逆转录，将逆转录得到的cDNA行实时定量聚合酶链反应。所用引物为 TNF顺向CAGGCGGTGCCTATGTCTC，反向CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG。IL6顺向TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC，反向TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC， GAPDH：AGGTCGGTGTGAACGGATTTG，反向TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA。聚合酶链反应和ELISA检测过程严格按照说明书进行操作。

1.4 统计学方法

全部数据使用SPSS 18在计算机上完成操作，数据资料以均数±标准差表示，P<0.05有统计学差异。

2 结 果

2.1 芍药苷对炎症因子mRNA的检测

经实时定量聚合酶链反应检测，发现芍药苷组的炎症因子TNF-a和IL6较正常组（TNF-a：7.47±1.12，IL6：6.13±2.12）均表达升高。但是随着芍药苷剂量的增加，两种炎症因子的差异表达倍数明显下降，并且在药苷25 mg/kg组（TNF-a：1.51±0.11，IL6：0.98±0.07）、芍药苷50 mg/kg组（TNF-a：3.21±0.67，IL6：2.86±0.13）、芍药苷100 mg/kg（TNF-a：5.51±0.12，IL6：3.78±0.28）组表达量依次下降，差异有统计学意义（P<0.05）。说明芍药苷能够抑制机体内关节炎产生的炎症反应，并且抑制效果呈现剂量依从性。

2.2 芍药苷对炎症因子表达量的检测

经ELISA反应检测，发现芍药苷组的炎症因子TNF-a和IL6较正常组（TNF-a：2.9±0.2 pg/mL，IL6：3.3±0.2 pg/mL）均表达升高。但是随着芍药苷剂量的增加，两种炎症因子的表达量明显下降，并且在药苷25 mg/kg组（TNF-a：13.7±2.3 pg/mL，IL6：17.1±2.5 pg/mL）、芍药苷50 mg/kg组（TNF-a：9.8±2.1 pg/mL，IL6：13.4±2.8 pg/mL）、芍药苷100mg/kg组（TNF-a：5.3±1.9 pg/mL，IL6：7.9±2.1 pg/mL）表达量依次下降，差异有统计学意义（P<0.05）。说明芍药苷能够抑制机体内关节炎产生的炎症反应，并且抑制效果呈现剂量依从性。

3 讨 论

芍药苷是一种新型的具有抗炎、抗氧化功能的中草药制剂，在类风湿性关节炎的治疗方面，较传统的激素治疗有一定的优势。本研究通过实时定量聚合酶链反应以及ELISA反应证实，应用芍药苷对类風湿性关节炎小鼠模型的炎症因子的表达具有抑制作用。并且随着芍药苷给药剂量的逐渐增大，抗炎效果逐渐增强，表现为TNF-a和IL6的降低。而在应用芍药苷以及加大剂量的过程中，动物模型未出现因使用芍药苷而致死的情况，说明芍药苷在治疗类风湿性关节炎的过程中具有明显的疗效。

参考文献

[1] Chen M，Amerigos J C KD，Su Z，et al. Folate Receptor-Targeting and Reactive Oxygen Species-Responsive Liposomal Formulation of Methotrexate for Treatment of Rheumatoid Arthritis[J].Pharmaceutics.2019，11（11）.pii： E582.

[2] 郑世存，李晓宇，欧阳兵，等.芍药苷药理作用研究新进展[J].中国药物警戒，2012，9（2）：100-103.

[3] 刘芳兰，蒋 莹.芍药苷对小鼠胶原诱导性关节炎抑制作用[J].亚太传统医药，2015，17（11）：10-11.