日喀则脱毒马铃薯试管苗的扩繁技术

次旦卓玛

（日喀则市农业科学研究所，西藏 日喀则 857000）

马铃薯是一种外来茄科植物，在西藏有着庞大的种植区，种植历史悠久。马铃薯富含淀粉，是一种既可以作为主食，又可以作为蔬菜的农作物，有一定的抗衰老作用。

这些年，马铃薯的种植面积越来越大，但由于西藏地域范围广，马铃薯种植一般是农户自种自用，每一年全区的播种面积都不同，且生产分散无法形成规模化，效益较低。

为了进一步扩大马铃薯种植规模，藏区开始大量开展马铃薯的种植工作。在扩张繁殖中，试管苗常遇到环境污染、马铃薯病害等问题。细菌及真菌引发的病害可以采用化学方法防治，但病毒类的病害却无法使用化学药剂防治。植株在感染病毒之后，病毒会在马铃薯的体内快速增殖、积累，造成品种退化，导致马铃薯品质与产量频频下降，严重的还可能出现绝收的情况。因此藏区开始尝试进行脱毒马铃薯的种植试验，采用生物技术，根据马铃薯茎尖病毒携带少的原理，剥离0.1 ～0.3 mm 的茎尖生长点，在无菌的条件下培育脱毒组培苗，生产不携带病毒的种薯，有效抑制病毒引发的病害，实现马铃薯的增产增效。

1 脱毒马铃薯试管苗取样

1.1 选择剥离材料及催芽工作

脱毒马铃薯需要准备好茎尖，其剥离工作是基础。在选择剥离材料时，选择在马铃薯生长最好的季节里开展，为优质良种繁育打下基础，扩繁脱毒组培种苗才能生产出最优秀的原种。这是马铃薯实现增收增效的基础。选择具备原品种典型特征的单株系薯块，在培养箱进行催芽处理。

1.1.1 消毒方法及剥离操作。用剪刀切1 ～2 cm 的壮芽，放入烧杯中，编号；用纱布包住在自来水流水下冲洗5 ～10 min；在超净工作台内用75%的酒精浸泡10 s；用0.1%的升汞浸泡10 min（称取升汞0.1 g，用酒精溶解，再加无菌水100 ml 或2% ～10% 的次氯酸钠浸泡5 ～30 min），之后用灭菌后的无菌水反复冲洗3 ～5 次。对超净工作台内进行灭菌操作，提前外光灯照射20 min；接种工具镊子、接种针（3 支）用75% 酒精浸洗，用酒精灯烧灼后放置冷却待用。用镊子取芽放在解剖镜下，用第一支解剖针把外层大叶去除；然后换针去除幼叶，使生长点露出；用第三支针取下含有1 ～2 个叶原基的0.1 ～0.2 mm长的生长点进行接种。在此过程中，注意不要损伤芽顶端圆锥体，分离芽时务必按次序使用消毒后的工具。

1.1.2 茎尖培养和病毒检测。芽尖催芽以后芽为佳，消毒后置入无菌水冲洗5 ～6 次；之后将芽尖放在操作台中进行灭菌操作，用滤纸将其水分完全吸干；在解剖镜观察下，使用解剖针切取叶原基茎尖生长点，迅速接种到预先做好的培养基上；培养一段时间后统计成活率及污染率。

上述处理可以失活减化病毒，提升无病毒植株培育成功率。接种在培养基的茎尖放在培养室中培养（温度25℃，湿度70% ～85%，日照16 h）一个月左右。此时肉眼可见明显成长的小茎，叶原基形成小叶片，即可转入未注入生长调节剂的培养基中继续培养。在没有污染的情况下，苗将继续生长并形成根系，4 ～5 个叶片小植株于5 个月左右即可长出。此时，以单株为系做好扩繁工作，当达到200 株左右苗数时，随机选择4 ～5 个样本，以10 株为一个样本开始病毒检测工作，从中筛选出脱毒试管苗用于继续繁殖基础苗。

1.2 自然光照培养

1.2.1 环境条件。组织培养的材料一般都放在培养架上并用日光灯照明，温度、湿度控制十分重要。一般来说，温度应保持在25℃左右，上下不超过2℃，湿度应保持在70% ～85%。培养室空间大，空气流通比较好，光照强度理想，为脱毒马铃薯试管苗的健康成长提供了条件，在此基础上辅以适当放风、控水、降湿即可。通过上述措施，可以使苗快速适应外部的环境，减少缓苗的时间，并增加植株对大风及低温的抵抗力。一般情况下，直接移栽基质温室成活率可达到99.8%。

1.2.2 温度控制。培养室降温主要通过遮阳幕、风机、暖机、水窗帘单独使用或同时使用以达到目的。在春季通过遮阳幕、风机降温；在秋末夏初温度较高时, 开启风机, 使培养室内的空气形成对流降低温度；在夏季温度最高时, 同时使用三种手段，其中水帘降温作用最大, 水在水帘内通过循环风机的作用将湿气形成对流。冬季加温主要利用暖气,晴天和白天一般不需要加温, 夜晚和阴天要通过控制暖气开放次数和开放时间保持培养室内温度。

2 脱毒马铃薯组培苗的扩繁原理及操作方法

2.1 脱毒种苗的制取

脱毒种苗的制取是整个脱毒马铃薯优质良种繁育体系的第一步, 是技术的核心。通过脱毒组培种苗的扩繁, 生产出优质组培苗，这是原原种生产的关键。通过组织培养的手段,缩短育种周期, 加快繁殖速度, 短期内可以大量地繁殖出优良种苗, 提供给温室扩繁,生产优良种薯。

2.2 马铃薯脱毒组培苗的扩繁操作方法

选用无污染的试管苗, 在无菌条件下切成带1 ～2 个叶片的茎段, 转接于扩繁培养基上，每瓶接10 ～15 段，培养15 ～20 d，待新的小苗长至6 ～8 cm 时再进行下一轮扩繁。

综上所述，在应用试管苗扩繁技术过程中，应严格准确地按照科学、规范的步骤操作进行，促进脱毒马铃薯试管苗的顺利扩繁，进而促进马铃薯生产的稳定发展，提高产业效益。