布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项

刘坤洋

（辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳 110164）

目前，布鲁氏菌抗体检测仍是我国布病诊断最常用、最主要的检测方法。其中虎红平板凝集试验（RBPT）具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查，同时由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验。现将RBPT中的影响检测结果的因素及应注意的问题进行简要分析。

1 RBPT的影响因素

1.1 RBPT抗原

RBPT抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，不同厂家的抗原对同一批血清样本的检测结果存在不同程度的差异，如果RBPT的假阳性率过高，不仅造成工作量加大，也会造成不必要的经济损失。

1.2 血清

血清质量也是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，而采集的时间与分离方式直接影响血清的质量。用于RBPT的血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。纤维蛋白原能与虎红抗原产生非特异性凝集反应，而且纤维蛋白原含量越高凝集反应发生的越快、越强。因此，如果待检血清中含有纤维蛋白原也会出现RBPT假阳性结果，严重影响检测结果的准确性。

1.3 温度

试验时，RBPT抗原与被检样品的温度、环境温度对试验结果的准确性也有很大影响。RBPT用的抗原需要恢复至室温（22±4℃），并且使用前要充分混合均匀。血清与温度和时间成反比关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。由此可见，在一定温度范围内，温度越高，血清学反应进行的越快。本试验要求在室温下进行，因此，在试验前要注意观察环境温度是否适合进行本试验。

1.4 药物

血清中的药物浓度也会干扰检测结果的准确性，在经过治疗后或治疗期间血清凝集不明显。因此，在血液样品采集前除了要查明动物的免疫背景，还要查清动物的患病及治疗情况，以免出现误诊、漏诊现象。

1.5 试验操作

RBPT虽然操作简便，但在试验过程中操作是否规范、抗原及血清加入的量是否准确并混匀、结果判定的时间是否准确等因素也会影响试验结果的准确性。

2 注意事项

2.1 对照的设立

每次试验时必须设立标准阴性、阳性血清对照，用以判断试验是否成立。同时在试验前应使用弱阳性对照血清确定试验条件的敏感性。

2.2 试剂的保存及使用

RBPT抗原应用OIE标准血清校准过的血清进行最后标化，于4℃暗处保存，避免冻结和污染。试验时使用的抗原应与用0.5%石碳酸生理盐水1/45稀释的OIE标准阳性血清出现清晰的阳性反应，而不与1/55稀释的血清反应。为了避免RBPT抗原被污染，降低温度变化对抗原灵敏度的影响，可以每次试验前只取出足够本次试验用的抗原量。

2.3 血清

采集的血液样本在分离血清之前，避免长时间晃动以及与冰袋接触，以免发生溶血。为了分离到合格的血清样本，最好在早晨喂料前或停食后6小时进行采血，将装有血液的注射器或采血管摆成斜面，以促进血清更好的析出。除特殊要求外，用于血清学试验时采集血液样本时不要加抗凝剂，以免影响对检测结果做出正确的判定。血清样品在使用前一定要上下颠倒混匀，对于冰冻保存的血清样品应充分融化后再进行试验。

2.4 试验操作

虽然RBPT操作易于掌握，结果判定直观，但在试验过程中所用抗原和血清量都很少，试验时加入的量一定要准确。抗原与血清混合均匀后室温轻微摇晃4分钟后立即判定结果，若抗原抗体反应超过4分钟后也会产生假阳性结果。

3 讨论

RBPT作为快速、准确筛查布鲁氏菌病特异性抗体的简便方法，不仅反应敏感稳定，同时由于抗原的pH为3.65±0.05，可抑制引起非特异性反应的IgM、增强特异性IgG的活性，也具有较好的特异性。但在试验操作过程中要严格按照标准的操作规程进行，注意影响试验的各种因素，降低各种因素对试验结果准确性的影响。