大枣黄酮的抗菌与抗肿瘤活性研究

李新明， 李 群

（山西农业大学 山西功能食品研究院，山西太原 030031）

天然多酚是一族结构中含有酚的化合物，在许多植物中广泛存在。现代药理学研究发现，它能够直接参与人体新陈代谢并清除体内自由基，具有抗炎、预防癌症等多种功效，其较高的药理学价值已日益受到药理学家的关注[1-3]。

枣（Zizyphus jujuba Miller） 是鼠李科（Rhamnaceae） 枣属（Ziziphus Mill） 植物，分布于30 多个国家，具有很高的经济价值。我国枣类资源丰富，是我国第一大干果树种和第七大果树[4]。大枣是我国传统的营养保健品，有很高的医学价值，其中总黄酮不仅具有较强的天然抗氧化性和较强的自由基清除性，同时还有抗过敏、抗病毒、抗辐射及增强兔疫能力等广谱的生理活性[5-7]，深入研究枣果中天然黄酮类物质对于营养保健学具有重要的科学价值。

1 材料与方法

1.1 材料

原料：山西大红枣，购自太原市。

大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、肉毒杆菌、化脓性链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌，上海艾研生物科技有限公司提供。

细胞株：SMMC-7721，H22，S180 细胞，购自中国细胞库典藏细胞中心，并由实验室冻存，在37 ℃，5% CO2培养箱中传代培养。

1.2 多酚提取

将去核红枣洗净后粉碎，取枣粉30.0 g 2 份，分别加入60%的乙醇100 mL，在45 ℃下提取40 min；取滤液，经减压蒸馏、浓缩。

提取总黄酮含量的方法参照文献[8]，测定枣黄酮的提取量为4.06 mg/g。

1.3 抗菌试验

选用大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、肉毒杆菌、化脓性链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌。

（1） 试验菌液配置。MH 肉汤用于接种细菌，置于普通培养箱（37 ℃，24 h） 中培养，比浊法计数。培养液被调配成1×106CFU/mL，使用肉汤培养基和普通琼脂平板培养基，采用微量2 倍连续梯度稀释法测定MIC。

（2） MIC 的测定。将枣黄酮提取物溶于含5%Tween 80 的肉汤，进行2 倍连续梯度稀释，将各浓度样品液分别加到96 孔培养板，0.15 mL / 孔。再依次加入含量1×106CFU/mL 的试验菌液，50 μL/ 孔；同时，设立对照细菌孔，在湿盒内置于普通培养箱（37 ℃，24 h） 中培养、观察，无细菌生长孔的最小药物浓度为最小抑菌浓度（MIC）。

1.4 枣黄酮提取物体外抑瘤活性测定

以MTT 法检测枣黄酮提取物对SMMC-7721，H22，S180 细胞的生长抑制作用。制备上述8 株细胞的细胞悬液，以含量8×104个/ mL、每孔100 μL接种于96 孔板中。培养24 h 待完全贴壁生长后弃上清液；每孔加新鲜培养液100 μL 的质量浓度分别为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mg/mL 的待测枣黄酮提取物溶液，继续培养44 h，加入5 mg/mL 的MTT 溶液100 μL，4 h 以后用SDS 三联液终止反应。采用酶标分析仪于570 nm 处检测OD 值，每处理设置5 个重复，按下式计算抑制率：

2 结果与分析

2.1 枣黄酮提取物体外抗菌活性研究

枣黄酮对细菌的抑制作用见表1。

表1 枣黄酮对细菌的抑制作用/ g·L-1

从表1 可以看出，枣黄酮提取物对试验所选取的8 种试验菌株均有抑制作用，对大肠杆菌、沙门氏菌的效果最好，对副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌的效果其次，对肉毒杆菌的效果最弱。

2.2 枣黄酮体外抑制肿瘤细胞生长

枣黄酮对SMMC-7721，H22，S180 细胞的生长抑制见图1。

枣黄酮提取物对SMMC-7721，H22，S180 细胞均有不同程度的生长抑制作用，且呈现明显的质量浓度依赖关系。当SMMC-7721，H22，S180 质量浓度为1.2 mg/mL 时，枣黄酮提取物对SMMC-7721，H22，S180 的生长抑制率为78.37%±8.03%，53.15%±4.93% 和86.08%±8.11%， 说明枣黄酮提取物对S180，SMMC-7721 细胞抑制率高于H22 细胞。

3 讨论

黄酮物质泛指2 个具有酚羟基的苯环（A- 与B-环） 通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团，是一族重要的生物活性物质，具有抗各种致病菌的抗菌活性[9]，可通过阻止微生物附着和直接破坏细胞结构发挥作用。多酚是许多微生物，特别是革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和真菌的生长和增殖的有力抑制剂[10-11]。试验选择了8 种对食品保质具有重要影响的细菌作为研究对象。结果表明，枣黄酮对8 种细菌均有不同程度的抗菌作用。

近年来，黄酮的抗肿瘤活性已被大量研究[12-13]，结果表明黄酮对多种肿瘤细胞具有抑制作用。黄酮作为枣果实中重要的活性物质，研究其抗肿瘤作用有着重要的应用价值。试验选择了3 种肿瘤细胞SMMC-7721，H22，S180，表明枣黄酮对3 种肿瘤细胞株具有抑制作用，其中抗肿瘤的效果在一定程度上受其质量浓度的影响。在一定质量浓度范围内，存在一定的量效关系，进一步证明了枣多酚对肿瘤细胞的抑制具有量效关系。

4 结论

枣黄酮有效抑制细菌的生长，同时对3 种肿瘤细胞SMMC-7721，H22，S180 具有较好的抑制效果，并且具有一定的量效关系。研究结果对促进枣黄酮在食品营养和健康保健方面的开发具有一定的应用价值。