高效液相色谱法同时测定八珍丸（浓缩丸）中5个成分的含量

王月玲，徐雪梅，陈文慧，白雯静，王蕙

（兰州市食品药品检验所，甘肃 兰州 730050）

0 引言

八珍丸（ 浓缩丸） 由白术（炒）、党参、茯苓、甘草、当归、白芍、川芎、熟地黄等八味药组成，具有补气益血的作用，临床上主要用于气血两虚，面色萎黄，食欲不振，四肢乏力，月经过多[1]。据文献报道，该药还对于顽固性头痛经中医辨证属于气血两虚所致者有效，症见头痛缠绵难愈、面色萎黄、头晕目眩等症[2]，且该药属于国家基本药物之一[3]。据文献报道，黄卫娟等人采用高效液相色谱法对八珍丸（浓缩丸）中芍药苷的含量测定方法进行了研究[4]。崔慧芳等人也对此成分含量也进行了研究[5]。本文运用HPLC法建立了同时测定八珍丸 （浓缩丸）5个成分的含量测定方法，现讲方法汇报如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器。Waters e2695高效液相色谱仪；MITTLE XSR205DU电子天平；超声清洗机；密理博公司超纯水机。

1.2 对照品与试剂。白术内酯Ⅲ：批号111978-201501，含量99.9%；芍药苷：批号110736-201842，含量97.4%；甘草酸铵：批号110731-201720，含量97.7%；毛蕊花糖苷：批号111530-201713，含量92.5%；阿魏酸：批号110773-201915，含量99.4%。以上对照品均来源于中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈为德国默克公司生产色谱纯试剂，其它试剂为国产分析纯试剂，水为密理博超纯水机所生产超纯水。

1.3 样品。市售八珍丸（浓缩丸）9批，规格均为每8丸相当于原生药3 g。

2 方法

2.1 色谱条件。以资生堂MGⅡ十八烷基键合硅胶为填充剂（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-甲醇（60:40）为流动相A，0.6%磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长芍药苷、甘草酸铵、白术内酯Ⅲ为230 nm，阿魏酸和毛蕊花糖苷为320 nm；流速1.0 mL·min-1，进样量20μL，柱温35℃，洗脱梯度见表1。

表1 梯度洗脱程序

2.2 测定法

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取白术内酯Ⅲ对照品0.01032 g，芍药苷对照品0.01103 g，毛蕊花糖苷对照品0.01111 g，分别置10 mL量瓶中，阿魏酸对照品0.01199 g，置50 mL量瓶中，甘草酸铵对照品0.01148 g，置25 mL量瓶中，分别加75%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取上述5种溶液各2 mL，置同一10 mL量瓶中，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备：取各份样品适量，粉碎，分别精密称取细粉约1.0 g，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇溶液100 mL，称定重量，超声提取（500 W，50 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用75%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 精密度试验：取2.2.2项下的混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6针，分别记录色谱图。积分显示各峰面积的RSD均小于2.0%，表明仪器重复性符合要求，图谱分别见图1，图2。

图1 混合对照品溶液在230 nm波长下图谱

图2 混合对照品溶液在320 nm波长下图谱

2.3.2 重复性试验：精密称定同一批次八珍丸 （浓缩丸）样品6份，按上述供试品溶液制备方法分别制备供试品重复性试验溶液。记录色谱图，计算各个成分的含量，结果RSD均小于2.0%，在可接受限度以内。

2.3.3 准确度试验：精密称定已知含量的样品6份，每份1.0 g，置250 mL具塞锥形瓶中，分别加各个对照品溶液1 mL，按上述供试品溶液制备方法分别制备成供试品加标溶液，记录色谱图，计算加标回收率，结果加标回收率均大于90%，表明本方法准确性良好。

2.3.4 稳定性试验：取同一份供试品溶液，在溶液制备后0、3、6、9、12 h分别进行测定，计算色谱图峰面积RSD。结果显示，各成分在不同时间测定的数据RSD均小于2.0%，可见供试品溶液在12 h内性质稳定。

2.3.5 线性关系考察：精密吸取2.2.1项下的混合对照品溶液1，5，10，15，20，25μL，记录色谱图。以对照品质量与色谱峰峰面积拟合标准曲线，得到各组分回归方程与相关系数，结果见表2。

表2 结果数据

3 结果

运用该方法进行测定，白术内酯Ⅲ、芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、甘草酸铵5个成分分离效果良好，溶液浓度和峰面积在一定浓度范围内呈现线性，回归方程相关系数r>0.99，运用外标法计算，结果显示方法精密度、重复性、加标回收率均符合要求。

4 讨论

目前国内外有关八珍丸（大蜜丸、水蜜丸）的质量标准的研究有很多报道，八珍丸（水蜜丸、大蜜丸） 中各组分均为粉末入药，现行标准为《中国药典》2015年版，该品种正文项下除对各组分进行了显微鉴别外，还运用薄层色谱技术对白芍、甘草进行了鉴别，对其中白芍运用HPLC法进行了含量测定[6]。据文献报道，孙燕等人对八珍丸HPLC特征指纹图谱进行了探索，对多种成分定量分析方法进行了研究[7]。而目前对八珍丸（浓缩丸）的研究却较为鲜见，八珍丸（浓缩丸）的现行标准为《卫生部药品标准》中药成方制剂第八册

WS3-B-1478-93。该标准正文项下只考察了性状、鉴别两个项目，鉴别项下仅对当归进行了显微鉴别，对其它药味均未进行鉴别和含量测定，因此无法对该药市售品种的真伪进行甄别，优劣进行评价。这与我国目前的建立最严谨的标准，构建科学、全面、可检验、能执行的药品标准体系的方针政策严重不相适应，和我国当前的科学技术发展水平不相匹配，因此对其现行标准进行研究显得非常地必要。本文采用高效液相色谱法建立了一种八珍丸（浓缩丸）中5种成分的含量测定方法， 并进行了方法学验证，结果表明该方法操作简便，准确可靠，为八珍丸（浓缩丸）的质量控制提供参考。