黑色素瘤相关抗原A10和树突状细胞在非肌层浸润膀胱癌中的表达及其意义〔1〕

张建军，蔡龙俊，晁流，孙永明，王祥宇，施龙，蔡维奇

(1.徐州医科大学附属宿迁医院，南京鼓楼医院集团宿迁市人民医院，江苏 宿迁 223800；2.江苏师范大学科文学院，江苏 徐州 221116)

膀胱癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤，是美国男性第4位、女性第11位恶性肿瘤[1]。在中国，近年来膀胱癌的发病率和病死率均呈逐步上升态势，并且70%以上为非肌层浸润膀胱癌[2]。黑色素瘤相关抗原A10(MAGE-A10)是一种肿瘤相关抗原，能引起细胞、体液免疫应答，是有望成为肿瘤疫苗的潜在抗原之一[3]。树突状细胞(DC)是功能最强大的专职抗原呈递细胞，与肿瘤的发生发展关系密切，其数量的减少及功能的障碍是肿瘤细胞逃逸机体免疫监视的一个重要原因[4]。我们应用免疫组织化学法检测MAGE-A10和DC在非肌层浸润膀胱癌组织中的表达，并探讨其与膀胱癌临床病理特征及肿瘤复发、预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2012年1月—2015年2月徐州医科大学附属宿迁医院行经尿道膀胱肿瘤电切术治疗的非肌层浸润膀胱移行细胞癌患者86 例，其中男63 例，女23 例，年龄(62.1±10.9) 岁。原发性膀胱癌44 例，复发性膀胱癌42 例；肿瘤直径(2.0±1.5) cm；临床TNM分期Ta期29 例，T1期57 例。病理分级Ⅰ级28 例，Ⅱ级58 例。标本切片行HE染色明确诊断后分别作MAGE-A10及DC染色观察。随访至2020年2月，共获随访病例77 例，失访9 例，最长随访97 个月。本研究患者均知情同意，并通过医院伦理委员会审批。

1.2 检测方法

免疫组织化学检测采用SP法。S100抗体、MAGE-A10抗体购买于Protein Tech Group公司(美国)，操作步骤按试剂盒说明进行。染色时用已知S100阳性的正常膀胱黏膜作阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定标准

MAGE-A10的阳性表达：显微镜下呈现棕黄色，染色于细胞核。DC的表达：DC表现为S100阳性，细胞浆和细胞核均着色，形态上呈树突状，核不规则。以正常膀胱黏膜组织中S100阳性DC表达为正常表达，肿瘤组织中S100阳性DC表达与之比较后确定为正常表达或低表达。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 MAGE-A10及DC的表达

MAGE-A10蛋白在86 例非肌层浸润膀胱癌组织中的表达率为36.05%。MAGE-A10蛋白的阳性表达与患者性别无相关性。而与肿瘤大小、分级及分期存在相关性。DC在86 例非肌层浸润膀胱癌组织中的正常表达率为65.12%，其余均为低表达。DC的正常表达与患者性别、肿瘤大小无相关性，而与肿瘤的分级及分期有相关性(见表1)。

表1 MAGE-A10阳性及DC正常表达与患者临床病理特征的关系 例(%)

2.2 MAGE-A10及DC的表达与肿瘤复发的关系

本组86 例膀胱癌中77 例获得随访，9 例失访。其中MAGE-A10阳性失访3 例，MAGE-A10阴性失访6 例；DC正常表达失访5 例，DC低表达失访4 例。获得随访的77 例中有42 例复发。其中MAGE-A10阳性表达者的复发率较高，与MAGE-A10阴性表达者的复发率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。DC正常表达者的复发率与低表达者的复发率比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

表2 MAGE-A10阳性及DC正常表达与患者复发的关系 例(%)

2.3 MAGE-A10及DC的表达与肿瘤预后的关系

MAGE-A10阳性表达者预后差，其5 年生存率与阴性表达者比较，差异有统计学意义(P<0.05)。DC正常表达者预后好，其5年生存率与低表达者比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表3)。

表3 MAGE-A10阳性及DC正常表达与患者5 年生存率的关系 例(%)

3 讨 论

肿瘤疫苗是通过肿瘤抗原等激发机体自身免疫系统产生肿瘤特异性杀伤效应，是目前肿瘤治疗研究的重要方向。选择有效的肿瘤抗原对于肿瘤疫苗发挥抗肿瘤免疫至关重要。膀胱癌潜在的肿瘤抗原有：癌基因蛋白，如表皮生长因子受体2(HER2)；癌-睾丸抗原(CTAs)；肿瘤相关抗原，如癌胚抗原(CEA)等[5]。在目前报道的膀胱癌临床试验中，以HER2为作用靶点的肿瘤疫苗[6]、以细胞为基础的疫苗vesigenurtacel-L及由DC驱动的疫苗lapuleucel-T[7]均取得了一定的疗效。MAGE-A10是肿瘤和睾丸抗原(CT)家族的一个成员。CT抗原仅特异性表达于肿瘤和睾丸中，因而不会导致自身免疫性疾病。文献表明[8]，MAGE-A10在黑色素瘤、膀胱癌和肺癌等肿瘤组织中存在阳性表达。Schultz-Thater等[8]报告癌睾丸基因在膀胱癌中有较高表达，同肿瘤等级相关，监测CTA的表达可以判断膀胱肿瘤的预后和复发。开发以CTA为基础的肿瘤特异性免疫治疗有助于提高膀胱肿瘤的治愈率。Mengus等[3]发现MAGE-A10在1/3以上的非肌层浸润性膀胱癌中表达，并且同肿瘤的分级明显相关，一旦肿瘤向高级别进展，MAGE-A10表达明显增高，等级越高表达越多。本研究发现，MAGE-A10蛋白在非肌层浸润膀胱癌中肿瘤分级或分期越高，阳性表达率越高，并且阳性表达率高的患者复发率更高，预后更差。因此，我们认为，MAGE-A10可作为非肌层浸润膀胱癌免疫学检测新的分子标志物，并可作为膀胱肿瘤免疫治疗的一个新靶点。DC既具有一定的吞噬、摄取、加工抗原能力，又具有抗原递呈并刺激幼稚T细胞活化的功能[9]。S100是目前最常用的检测DC的抗体。S100阳性DC具有活跃的免疫活性及明显的抗肿瘤作用[10]。研究发现这种细胞在不同肿瘤组织内存在，并且其浸润程度与患者的预后相关[11]。本研究结果显示：非肌层浸润膀胱癌患者肿瘤分级或分期越低，S100阳性DC正常表达越高，并且正常表达的患者复发率更低，预后更好，提示非肌层浸润膀胱癌组织中S100阳性DC表达数量的多少与肿瘤的发展及预后有关。

综上所述，MAGE-A10及DC的表达与非肌层浸润膀胱癌分级及分期相关，并可影响非肌层浸润膀胱癌患者的复发及预后。MAGE-A10可作为非肌层浸润膀胱癌免疫学检测的一个新的分子标志物。以上结果为我们下一步研制膀胱肿瘤的肿瘤疫苗提供了依据。