346株结核分枝杆菌耐药性分析

汪作琳，张 威，高静全

(1.阜阳职业技术学院 医学检验教研室，安徽 阜阳 236000；2.阜阳市疾病预防控制中心，安徽 阜阳 236000；3.阜阳市第三人民医院 医学检验科，安徽 阜阳 236000)

根据WHO2019年发布的全球统计报告显示，结核病是目前全球范围内导致人类死亡的十大原因之一。同时也是单一传染病中的头号杀手，随着耐药性结核的感染日趋严重，它成为一项全球公共卫生威胁，中国是结核病高耐药国家，位居世界第二位[1]。为了解阜阳市结核病人的耐药情况，本研究通过传统培养法对结核分枝杆菌进行培养，并针对四种一线、四种二线抗结核药物进行药物敏感试验，为临床合理选择抗结核药物与耐药性结核病的监测提供实验室依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2019年1月-2019年6月期间，阜阳市第二人民医院收治的肺结核患者痰培养阳性标本共367例作为本次调查对象。

1.2 实验方法

痰涂片、传统培养法、菌种鉴定方法严格按照《结核病实验室检验规程》[2]。每个病例选择两份涂片阳性的痰标本，加入1～2倍的4%氢氧化钠，预处理15～20分钟，然后分别取约100μL的标本处理液接种在两支酸性罗氏培养管上，8周内观察结果，培养阳性的菌株将进行药物敏感性试验及菌型初步鉴定。采用世界卫生组织/国际防痨和肺病联合会(WHO/IUATLD)推荐的比例法，分别对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、阿米卡星(AK)、卷曲霉素(CPM)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFX)八种药物进行药敏试验。8 种含药培养基的终浓度分别为：INH 0.2 μg/mL，RFP 40.0 μg/mL，SM 4.0μg/mL，EMB 2.0 μg/mL，AK 30.0 μg/mL，CPM 40.0 μg/mL，KM 30.0 μg/mL，OFX 2 μg/mL。分枝杆菌酸性罗氏培养管与分枝杆菌药敏罗氏培养管由珠海贝索生物技术有限公司提供，安徽省结核病防治所参比实验室提供结核分枝杆菌标准菌株(H37Rv)。

1.3 结果判定

计算方法：耐药百分比=(含药培养基上生长的菌落数/对照培养基上生长的菌落数) ×100%。如果耐药百分比大于1%者报告耐药(R)，否则报告敏感(S)[3]。药敏试验同时进行菌种鉴定，对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基上有菌落生长为非结核分枝杆菌菌群，无生长为结核分枝杆菌复合群。

2 结果

2.1 菌种鉴定结果

本调查共收集367例结核病患者和疑似患者，经固体培养鉴定出结核分枝杆菌复合群346例，占94.01%，非结核分枝杆菌复合群17例，占4.63%，污染4株，占1.09% 。346例结核分枝杆菌感染患者中，男性237例，占68.50%，女性109例，占31.50%，不同性别之间耐药率、单耐药、耐多药、多耐药、广泛耐药差异无统计学差异(P>0.05)，表1。

表1 不同性别之间耐药情况的比较

2.2 初、复治患者在不同年龄组的耐药情况比较

本调查共收集346例结核病患者，参考相关文件按年龄分为三组，青年组(≤30 岁)81例；中年组(31 岁～59 岁)128例；老年组(年龄≥60 岁)137例；其中初治患者共204例，复治患者共142例。比较各年龄组初、复治患者耐药情况。青年组中，初、复治患者的耐药情况无统计学差异(P>0.05)(见表2)。中年组中，复治患者对EMB、SM的耐药率高于初治患者(P<0.05)(见表3)，复治患者单耐药、广泛耐药及总耐药率均高于初治患者(P<0.05)。老年组中，复治患者对RFP的耐药率高于初治患者(P<0.05)(见表4)，复治患者的广泛耐药高于初治患者(P<0.05)。

表2 青年组初、复治患者耐药情况(%)

表3 中年组初、复治患者的耐药情况(%)

表4 老年组初、复治患者的耐药情况(%)

2.3 初、复治患者耐药情况分析

346株结核分枝杆菌复合群菌株中，全部敏感占76.59% (265 /346) ，总体耐药率为23.41% (81 /346) 。单耐药共56株，单耐药率为16.18%，耐多药( MDR-TB)至少耐INH + RFP者共10株，耐多药率为2.89%( 10/346)，多耐药，耐INH+RFP的同时耐OFX和KM或两种药物其中一种者共7株，耐药率为2.02%(7/346)，广泛耐多药(XDR-TB)8株，耐药率为2.31%(8/346)；其中复治组单耐药、广泛耐多药、总耐药均高于初治组，差异有统计学差异(P<0.05)，见表5。

表5 初、复治患者耐药情况比较

2.4 对八种药物的耐药情况分析

346株结核分枝杆菌对药物的耐药顺位由高到低依次为链霉素(SM)11.85%、异烟肼(INH)10.98%、利福平(RFP)10.98%、氧氟沙星(OFX)4.05%、乙胺丁醇(EMB)2.89%、阿米卡星(AK)2.02%、卷曲霉素(CPM)1.73%、卡那霉素(KM)1.73%，通过初治耐药与复治耐药株进行分析，经χ2检验，利福平、 链霉素和氧氟沙星的耐药率在复治患者中高于初治患者，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表6。

表6 八种药物的耐药情况

3 讨论

近年来，结核病的发病率呈逐年上升趋势，而且MDR-TB的扩散更是导致结核病疫情严重的重要原因之一[4]。结核分枝杆菌复合群是引发人类发生结核病的重要菌株。本研究从结核病患者痰标本中分离出结核分枝杆菌复合群346株，其中 81株为耐药菌株，对抗结核药物的总耐药率为23.41%，低于国内报道水平[5-7]。本研究中男性结核病患者68.50%(237/346)，高于女性患者31.50%(109/346)，男性患者人数远远高于女性人数，但两者耐药率无明显差别(P>0.05)，此结果与邵丽文等[8]的调查结果一致。

针对不同年龄组的初、复治患者的耐药情况进行分析，结果显示，青年组初、复治患者耐药情况无明显差异(P>0.05)，中年组中，复治患者对EMB、SM的耐药率高于初治患者，老年组中，复治患者对RFP的耐药率高于初治患者，差异有统计学意义(P<0.05)。分析结果，在耐药患者中以中、老年为主，其中复治组单耐药、广泛耐药、总耐药均高于初治组，差异有统计学意义(P<0.05)，可能因为中老年人群免疫力低下，更易感染所致，复治患者，耐药性明显加大[9]。

四种一线抗结核药物耐药率由高到低依次为SM 11.85%、INH 10.98%、RFP 10.98%、EMB 2.89%，均低于李美等人关于皖南地区结核分枝杆菌耐药状况的报道[10]；二线抗结核药物的耐药率依次为OFX 4.05%，AK 2.02%，CPM 1.73%，KM 1.73%。虽然本地区的抗结核药物的耐药率低于国内耐药水平，但是长期使用，仍会降低药物的治疗效果。在防治结核病的诊疗方面，常规监测SM、INH、RFP的耐药性，尤其是对复发结核病人或者是接受复治标准化疗失败的患者如定期进行结核培养和药敏试验，则可结合药敏结果及时调整用药和重新制定化疗方案。为降低耐药性结核病的发生，必须要进行防治结合，加强宣传教育，增强群众对结核病的防御意识；加强对结核病的防护，降低感染率；同时准确检测结核病患者的耐药性，及时调整抗结核治疗方案指导临床合理用药。