新孢子虫病的临床症状及诊断方法

李会猛，孙亚青

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新孢子病是牛流产的主要原因，这种疾病的一个关键特征是牛的感染是一种长期的、持续的感染，在怀孕期间被有效地传染给胎儿。虽然怀孕牛的胎儿感染可能导致流产，但大多数感染的胎儿不是流产，而是先天感染。先天感染的小母牛在怀孕后能够将感染传染给下一代，从而在牛群中保持感染。

1 临床表现

新孢子虫病的主要表现是妊娠中期流产，流产牛无其他临床症状的胎儿自溶。绝大多数堕胎发生在妊娠中期，妊娠4～6 个月。木乃伊胎与新孢子虫感染有关。在罕见的情况下，胎儿新孢子虫感染可能导致足月小腿瘫痪或脑脊髓炎所致的瘫痪。80%～90%的血清阳性（感染）奶牛生产明显正常的小牛，这是先天感染的血清学基础上，主要以脑脊髓炎为主要病理变化，脑脊髓中有其组织包囊，大脑至腰部脊髓区可见非化脓性炎，小脑发育不全[1]。这些先天感染的小牛在维持牛群感染方面起着重要的作用，并且增加了流产的风险。

小母牛和奶牛感染新孢子虫一年四季均可发生，往往是局部散发或是地方性流行，以春末秋初最为常见。奶牛流产有两种模式，分为地方病和流行病发生。在地方性模式中牛群体流产率每年超过5%。流行病的模式中的特点是在相对较短的时间内高比例流产。犬的临床症状主要集中在中枢神经系统和骨骼肌中，同时伴有坏死性肺化脓性脑炎、心肌炎以及心肌变性等病变，可引起严重的神经肌肉损伤，有些还可发生心力衰竭，一般有脑炎、肌炎、肝炎或持续性肺炎等。感染母牛妊娠后产死胎、衰弱胎儿以及先天性神经肌肉损伤的小牛。胎牛主要以神经系统和心脏肝脏等病变为主，心脏和骨骼肌出现灰白色病灶，脑组织有灰色或黑色的小范围坏死灶和水肿。胎儿易发生自溶和木乃伊化，胎盘子叶以坏死和非化脓性细胞浸润并出现局灶性病变[2]。流产的胎儿通常会在体腔内自溶，并伴有浆液的积聚。很少有细微的大体病变，由骨骼肌或心脏的苍白病灶组成。组织学病变包括广泛的非化脓性浸润。最具诊断意义的病变位于脑内，由散在的非化脓性细胞浸润灶和偶尔的坏死灶组成。原生动物囊肿通常不能在常规染色的玻片上看到。其他持续发现的组织学病变包括非化脓性心外炎或心肌炎、局灶性非化脓性肌炎和非化脓性门脉型肝炎，常伴有局灶性肝坏死。原生动物感染的特定诊断通常可以根据组织学病变进行。应用新孢子虫抗体免疫组织化学检测胎儿组织中的寄生虫是一种有效的方法。在胎脑和肾脏切片中，新孢子虫免疫组织化学最为成功。

2 诊断方法

1）组织学检查：通常采集寄生在脑、肺、心脏、肝脏、肾脏、肌肉、胎盘和其他器官的散播性炎症病变的地方，检测到新孢子虫速殖子或组织包囊[3]。

2）电镜下观察新孢子虫病的组织包囊出现在神经组织中，包囊厚度可达到4μm。但是要与弓形虫相区分，弓形虫主要出现在许多组织器官中，厚度没有新孢子虫厚，厚度不超过1μm。

3）免疫组织血染色：采集大脑、脊髓等病变部位制作切片，用免疫组织化学染色可检测各种寄生动物体内的新孢子虫，依照新孢子虫血清可以使虫体特异性着染来进行特异性诊断，判断新孢子虫病感染。

4）凝集试验（AT）、免疫印迹（IB）、间接荧光抗体试验（IFAT）和使用酶联免疫吸附法（ELISA）都能有效鉴定新孢子虫，ELISA 能检测新孢杆菌抗体。此过程快速、廉价且具有优异的敏感性和特异性。

5）分子生物学诊断：运用PCR 技术检测新孢子虫的DNA，确诊新孢子虫感染。

3 传播

新生儿感染的传播是复杂的，目前仍在调查中。牛可能通过感染卵囊水平（产后）感染，或妊娠期间感染的垂直胎盘传播有多种方式可获得新孢子感染。在牛新孢子病中，牛是中间宿主。新孢子虫在中间宿主动物身体中扩散，并在各种器官中入侵细胞，在入侵部位造成伤害。组织囊肿阶段，包含多个被厚囊壁包围的缓凝骨细胞，主要出现在神经组织中，并引起轻微的炎症反应，但可持续很长一段时间。最终的宿主在球虫肠道感染后脱离卵囊期。新孢子虫在中间宿主群中有两种传播方式，垂直传播和水平传播，摄入卵囊感染是中间宿主与终末宿主之间的主要是水平传播途径[4]。怀孕期间，牛不需要获得感染，以使其胎儿感染。许多受感染的妊娠母牛是长期感染的牛的垂直传播的结果，这种通过牛的垂直传播是在牛群中维持新孢子虫感染的主要方法。在未感染的牛群中，有血清学证据表明，产后感染水平较低来自未知来源，但垂直传播似乎是感染的主要途径。

4 防控

1）牛群中传播新孢子虫的一个主要方法是通过感染长期感染的牛的胎儿。这些受感染的奶牛可以根据它们的血清学效价或根据以前的新孢子虫流产史或先天性感染来确定。有了这些知识，控制感染的重点可以是减少牛群中受感染的牛的数量，并限制被感染的替代牛进入牛群。可以在知道牛群重复流产的风险较高的情况下，对已证实有新散居性流产的奶牛作出选择决定。血清呈阳性的奶牛也有更大的流产风险，在这些牛所生的小牛中，先天性感染的可能性很高。

2）减少狗在牛场出没可以降低潜在风险，避免牛群误食污染的粪便，造成感染。

3）全部清除可能被感染的组织，如来自环境的流产胎儿和胎盘，可能成为易感的传染源。此外，粪便污染的饲料和水源也要注意，从根源上杜绝新孢子虫病的传播。

5 总结

新孢子虫病的发生流行，严重制约着养牛行业的经济发展，要着重提高养殖户对新孢子虫的危害的认识，积极开展防控措施，加强对疫区动物的检查力度，严禁在疫区引进牛群，一经发现阳性牛只，立即淘汰处理，从根源上保证阴性牛群的健康发展。