中药岩黄连总碱的体外抗菌实验研究＊

丘倩倩，韦志鹏，吴丽敏，刘怡雯，蒙田秀

中药岩黄连总碱的体外抗菌实验研究＊

丘倩倩，韦志鹏，吴丽敏，刘怡雯，蒙田秀

（广西中医药大学 赛恩斯新医药学院，广西 南宁 530222）

通过体外培养革兰氏阳性菌和阴性菌，用中药岩黄连总碱进行抑菌和杀菌实验，测定药物的最小抑菌药物浓度（MIC）和最小杀菌药物浓度（MBC），观察培养条件对MIC的影响，考察岩黄连总生物碱的体外抗菌作用。结果显示，岩黄连总碱对常见的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用，其中9种菌株有杀菌作用，除铜绿假单胞菌和白色假丝酵母菌外，同时改变培养液的pH和细菌接种量，不影响测定结果。实验表明，岩黄连总生物碱有很好的体外抗菌作用。

岩黄连；总生物碱；体外抗菌；实验研究

岩黄连（Corydalis saxicola Bunting）来源于罂粟壳紫堇属植物，是广西特色药材，由于药效近似黄连又长在石缝中或岩石上而得名，因此又叫土黄连、岩连等[1]。岩黄连味苦，性凉，有散瘀消肿、清热利湿功效，临床可用于治疗肝硬化、肝炎、肝肿瘤及作为辅助治疗[2-3]。其主要生长在广西、贵州、四川、云南等地方，广西主要分布在桂西、桂西等地[4]。目前已研制了注射液和片剂等中成药制剂，是临床治疗肝硬化、肝炎、肝癌等特效药[5-7]。近些年来，国内国外对岩黄连研究较多，其化学成分复杂，已报道有57种化学成分，主要是49个生物碱类及8个甾体类成分，并进行了多方面岩黄连相关药效作用研究。现代药理研究证明，岩黄连具有抗肝炎病毒、保肝、抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗菌、镇静及其他药理作用[8]。探索中药抗菌药效的方法有体内试验和体外试验两大方法，前期对抗菌中药的研究，多在体外进行。体外抗菌实验是第一步，本项目先从体外抗菌实验展开，研究中药岩黄连总生物碱的抗菌作用，为今后的进一步研究做铺垫。

1 试药与材料

1.1 试药

岩黄连药材购于广西玉林中药材市场，经广西中医药大学赛恩斯新医药学院苑敏副教授鉴定为罂粟壳紫堇属岩黄连。岩黄连总生物碱的提取：用75%乙醇提取，每次加醇量10倍，提取3次，每次提取时间为2 h，合并提取液，滤过，备用。

1.2 试剂

所用实验试剂：营养肉汤、营养琼脂。

1.3 仪器

所用实验仪器：96孔细胞培养板、BKQ-B59L压力蒸汽灭菌器（山东博科科学仪器有限公司）、DH-500恒温培养箱（北京中兴伟业仪器有限公司）、10～200 μL微量移液器、0.22 μL一次性无菌超微滤器、一次性无菌培养皿。

1.4 材料

所用实验材料：革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、粪链球菌）、革兰氏阴性菌（大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、变形杆菌、白色假丝酵母菌）

2 方法

MIC和MBC测定：将革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、粪链球菌）和革兰氏阴性菌（大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、变形杆菌、白色假丝酵母菌）37 ℃、24 h培养，再将上述菌株接种在营养肉汤，于恒温培养箱37 ℃、24 h培养。细菌计数用比浊法进行，再用肉汤配制为 106 CFU/mL的菌液备用。用肉汤由10%为起点对岩黄连总碱肉汤药液进行连续二倍梯度稀释，逐次加入0.2 mL/孔于96孔细胞培养板中。再按0.01 mL/孔单独加入浓度为 106 CFU/mL的每种试验菌菌液，且分细菌和培养基对照孔。先在4 ℃环境中培养12 h，再于恒温培养箱37 ℃、培养 48 h，直接肉眼观察结果。若无细菌生长（不浑浊）孔的最小药物浓度为MIC。再用无菌蒸馏水依次将各没有细菌生长孔的培养物稀释10倍，吸取0.01 mL接种在普通琼脂平板上，于普通培养箱37 ℃、培养48 h，以接种区域无细菌生长所对应的最小药物浓度为MBC。

培养条件对MIC测定的影响：用表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌，将含有岩黄连总碱肉汤培养液的pH分别调整到5.7、7.2、8.2，将试验菌液浓度一次调到104 CFU/mL、106 CFU/mL、108 CFU/mL，测定MIC。

3 结果

岩黄连总碱对常见的9种革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用，同时，除白色假丝酵母菌和铜绿假单胞菌，对其他9种菌株有杀菌作用，如表1所示。

岩黄连总碱对6种340株肠道感染的临床分离菌株有一定的杀菌作用，如表2所示。改变培养液条件（pH和细菌接种量），不影响测定结果。

4 讨论

中药自古以来在感染性疾病的防治中发挥了积极的作用，为保障人类的健康起到重大贡献。近年来，许多研究者对中药抗菌作用进行了大量的实验研究，发现很多中草药和许多方剂对某些病原菌具有良好的抗菌作用，并将这些中药或其有效成分制成了制剂[9-12]，用于临床防治传感染性疾病，推动了医疗卫生事业的发展。本实验通过测定中药岩黄连生物碱的体外抗菌作用，发现其具有良好的广谱抗菌活性，这给岩黄连生物碱开发为广谱抗菌剂提供理论基础，同时也为中药抗菌药物的开发拓宽新渠道。

表1 岩黄连总碱对常见革兰氏阳性菌和阴性菌标准菌株的MIC和MBC（单位：mg/mL）

菌株MICMBC 金黄色葡萄球菌17.870.0 化脓性链球菌20.570.0 粪链球菌17.870.0 大肠埃希菌35.570.0 铜绿假单胞菌70.0＞300.0 福氏志贺菌16.835.5 伤寒沙门菌35.570.0 肠炎沙门菌16.870.0 肺炎克雷伯菌70.0130.0 变形杆菌70.0130.0 白色假丝酵母菌130.0＞300.0

表2 岩黄连总碱对340株临床分离细菌的MIC、MBC（单位：mg/mL）

菌种菌株MIC范围MIC50MIC90MBC范围 大肠埃希菌13016.8～70.035.57035.5～130.0 伤寒沙门菌288.4～70.035.57016.8～130.0 肠炎沙门菌2516.8～130.035.513016.8～300.0 福氏志贺菌228.4～70.016.835.516.8～70.0 肺炎克雷伯菌8035.5～300.070300130.0～300.0 变形杆菌5516.8～130.07013035.5～300.0

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R284

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2020.09.015

2095－6835（2020）09－0043－02

2018年广西大学生创新创业训练计划项目（编号：201813643024）

丘倩倩（1997—），女，广西来宾人，本科。

蒙田秀（1985—），女，广西桂林人，硕士，高级实验师，研究方向为中药药效学研究。

〔编辑：严丽琴〕