不同杀菌剂对滁菊黑斑病病菌孢子萌发及菌丝生长的影响

汤士勇，贾 丹

(滁州职业技术学院 食品与环境工程学院，安徽 滁州 239000)

滁菊是四大药菊之一，药食两用，也是国家地理标志产品。[1]黑斑病是滁菊叶部的主要病害，危害严重年份，常造成叶片枯死达30%～50%，单株花朵减少30%～50%。[2]许高娟、叶琪明等研究表明菊花黑斑病的病原是链格孢属真菌。[3-5]本试验在前期病原菌的分离鉴定中参考赵喜婷等的方法[6]，分离鉴定出滁菊黑斑病的病原菌也为链格孢属真菌。滁菊无公害生产中，病虫害防治以预防为主，在现蕾后一般禁止喷施农药，因此，滁菊叶部病害的药物防治主要是在苗期进行。本研究选取生产中常用的几种高效、低残留、低抗药性的杀菌剂，拟通过对滁菊黑斑病病原菌室内抑菌效果的测定，为筛选防治滁菊苗期黑斑病药剂提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1供试菌株

供试菌株从滁州职业技术学院校内滁菊生产实训基地发病滁菊植株叶片上分离获得，经纯化及致病性鉴定并通过形态学及分子鉴定确定为链格孢(Alternariaalternata)。

1.1.2供试药剂

病原菌室内毒力测定的农药剂型及来源见表1。

表1 供试农药剂型及来源

1.2 方法

1.2.1孢子萌发率测定

采用孢子萌发率测定法测定不同杀菌剂对链格孢(Alternariaalternata)孢子萌发抑制作用。用取样器吸取0.5mL孢子悬液与0.5mL农药母液(浓度梯度为2×0.2、2×1.0、2×5.0、2×25.0、2×125.0μg/mL，含1%葡萄糖)等量混合均匀。加入凹玻片，架放于带有浅层水的培养皿中加盖保湿，置于25℃恒温培养箱中培养，24h后检测孢子萌发率，计算孢子萌发抑制率并进行毒力回归分析，得出EC50。每处理重复3次，以含1%葡萄糖的蒸馏水作为对照。

孢子萌发率(%)=萌发孢子数/检查孢子总数×100。

孢子萌发抑制率(%)=(对照孢子萌发率-处理孢子萌发率)/对照孢子萌发率×100。

1.2.2菌丝生长速率测定

采用生长速率法测定不同杀菌剂对黑斑病病原链格孢(Alternariaalternata)菌丝生长的抑制作用。在含药PDA平板(药剂浓度梯度为0.2、1.0、5.0、25.0、125.0μg/mL)上接种直径5mm的菌饼，25℃恒温箱中黑暗培养7d，用十字交叉法测量菌落直径，计算抑菌率并进行毒力回归分析，得出EC50，每处理重复3次，以不加药剂的PDA平板为对照。

菌落净生长量(mm)=平均菌落直径(mm)-菌饼直径(mm)。

菌丝生长抑制率(%)=(对照菌落净生长量-处理菌落净生长量)/对照菌落净生长量 ×100。

1.3 数据处理

用Excel整理数据并计算、SPSS进行方差、概率单位回归分析。

2 结果与分析

2.1 对病原菌孢子萌发的影响

8种不同杀菌剂对链格孢菌孢子萌发均有较强的抑制作用，同种药剂孢子萌发抑制率随着药剂浓度的增加而增加；在浓度为125μg/mL时百菌清、多菌灵、咪鲜胺3种药剂孢子萌发抑制率>90%；在浓度为0.2μg/mL时甲基硫菌灵、代森锰锌孢子萌发抑制率<10%；异菌脲、氟硅唑在25与125μg/mL浓度水平上，丙环唑在5与25μg/mL浓度水平上孢子萌发抑制率差异不显著。见表2。

表2 不同杀菌剂对链格孢菌孢子萌发的抑制效果

不同杀菌剂抑制黑斑病链格孢菌孢子萌发的试验表明：异菌脲、丙环唑、氟硅唑的EC50值<1μg/mL，效应较强，其中丙环唑EC50值最小(0.673μg/mL)，效应最强；代森锰锌、多菌灵、甲基硫菌灵的EC50值>5μg/mL，效应较弱，其中甲基硫菌灵的EC50值最大(19.452μg/mL)，效应最弱，但甲基硫菌灵的回归方程斜率最大(0.947)表明：甲基硫菌灵的抑制孢子萌发效果随浓度变化较大。见表3。

表3 不同杀菌剂对链格孢菌孢子萌发的毒力比较

2.2 对病原菌菌丝生长的影响

8种不同杀菌剂对滁菊叶斑病病原菌的菌丝生长均有抑制作用，且同一药剂抑菌率基本随着浓度的增大而增加。代森锰锌、百菌清、丙环唑在浓度为0.2与1.0μg/mL处理间抑菌作用差异不显著；异菌脲、氟硅唑在浓度为25与125μg/mL处理间抑菌作用差异不显著；多菌灵在浓度为0.2与1.0μg/mL、1.0与5.0μg/mL处理间差异不显著；甲基硫菌灵在1.0与5.0μg/mL处理间差异不显著。在浓度为125μg/mL浓度时异菌脲的抑菌作用最强(96.10%)，在浓度为0.2μg/mL时代森锰锌抑菌率最低(8.62%)，如表4所示。

表4 不同杀菌剂对链格孢菌菌丝生长的抑菌效果

不同杀菌剂抑制黑斑病链格孢菌菌丝生长的试验表明：百菌清、异菌脲、多菌灵、氟硅唑的EC50值<1μg/mL，效应较强，其中氟硅唑EC50值最小(0.046μg/mL)，效应最强；代森锰锌的EC50值为18.787>5μg/mL，效应最弱，但是代森锰锌的回归方程斜率最大(0.857)表明代森锰锌的抑制菌丝生长效应随浓度变化较大。见表5。

表5 不同杀菌剂对链格孢菌菌丝生长的毒力比较

3 结论与讨论

综合抑制孢子萌发试验和抑制菌丝生长试验结果，异菌脲、氟硅唑两种药剂在抑制滁菊黑斑病链格孢菌的孢子萌发和菌丝生长两方面效应均较强，应该作为下一步田间防效试验的优先选用药剂。同时也发现，同种药剂对孢子萌发和菌丝生长的效应并不完全一致。因此，在田间试验中应考虑同种药剂在黑斑病不同发病期的防效。