基于标准汤剂的玫瑰花配方颗粒质量标准研究

胡飞凤 吴美兰 孟祥颖

1 浙江省药品检查中心 浙江 杭州 310013

2 浙江景岳堂药业有限公司 浙江 绍兴 312025

玫瑰花是蔷薇科植物玫瑰Rose rugosa Thunb.的干燥花蕾，可用于肝胃气痛，食少呕恶，月经不调，跌扑伤痛等[1]。玫瑰花中有多种化学成分，主要活性成分有挥发油、黄酮、多糖等[2]。玫瑰花配方颗粒是由玫瑰花经提取、浓缩、干燥、制粒而成，在质量控制上缺少饮片性状等重要指标，因此建立玫瑰花配方颗粒的质量标准很有必要性[3]。中药指纹图谱技术已经成为国内外公认的控制中药材质量最有效的方法[4]，逐渐成为中药配方颗粒质量控制发展趋势。通过出膏率、含量、薄层鉴别、特征图谱等指标建立了基于标准汤剂的玫瑰花质量评价方法[5]，可为玫瑰花配方颗粒质量评价提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器：1260HPLC（安捷伦）；LGJ-10C冷冻干燥机（北京四环科仪）；煎药壶30B2（康雅顺电器有限公司）；GOODLOOK-1000全自动薄层色谱成像系统（上海科哲）。

1.2 药品及试剂：没食子酸对照品（批号：110831-201605，纯度：90.8%）、玫瑰花对照药材（批号：121508-201403），中国食品药品检定研究院。试剂乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

1.3 药材：16批玫瑰花饮片（S1～S16）来源：山东济南市平阴县（S1～S4）、山东东营市垦利县（S5～S8）、山东日照市莒县（S9～S12）、湖州长兴（S13～S14）、临沂市平邑县（S15～S16），均为蔷薇科植物玫瑰Rosa rugosa Thunb.的干燥花蕾。由本实验室根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》制备玫瑰花的标准汤剂。另取（S14～S16）分别制备3批配方颗粒样品。

2 方法与结果

2.1 玫瑰花标准汤剂冻干粉和配方颗粒的制备：标准汤剂冻干粉：称取玫瑰花100g，各加水10倍浸泡、煎煮2次，每次30min，滤过合并，浓缩至约100g，冷冻干燥，即得。配方颗粒：取玫瑰花饮片10kg，同法煎煮2次。减压浓缩至相对密度为1.05～1.10的浸膏，喷雾干燥，得干膏粉；加入麦芽糊精适量，混匀，制成颗粒，即得。

2.2 TLC法鉴别玫瑰花汤剂和配方颗粒中的指标成分：具体如下。

2.2.1 供试品与对照药材溶液制备：取玫瑰花标准汤剂冻干粉S1、配方颗粒S14～S16及对照药材各1g，加甲醇20ml，超声过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液及对照药材溶液。

2.2.2 对照品溶液制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 TLC鉴别：吸取上述4种溶液各4μl，分别点于GF254薄层板上；以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。相应位置显相同的没食子酸暗色斑点，见下图1。

图1 玫瑰花配方颗粒薄层色谱图

2.3 含量测定：具体如下。

2.3.1 对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇溶解并定容，制成浓度为29.40μg/ml的对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备：取玫瑰花标准汤剂或配方颗粒适量，精密称取0.1g，精密加入甲醇50ml，超声处理30min，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 色谱条件：Ultimate AQ C18（4.6mm×250.0mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸（2：98）；检测波长：274nm；流速：1ml/min；柱温：35℃；进样量10μl。理论板数以没食子酸计不得少于5000[6]。

2.3.4 线性关系：取没食子酸对照品溶液的不同浓度(2.940μg/ml、14.70μg/ml、29.40μg/ml、44.10μg/ml、58.80μg/ml)。分别进样 10μl，得线性方程为 Y=36028X-8155.4，相关系数r=0.9999。在2.940μg/ml～58.80μg/ml之间线性关系良好。

2.3.5 重复性试验：精密取0.1g6份，同法处理，计算没食子酸的含量RSD为0.09%，该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收试验：精密称取配方颗粒（S14)样品0.05g，平行6份，各加入没食子酸对照品1.176mg，各10μl注入HPLC，计算回收率99.6%，RSD2.35%，该方法回收率良好。

2.3.7 含量测定：分别对药材、汤剂、配方颗粒样品进行测定，结果见表1。标准汤剂出膏率范围12.60%～23.41%，没食子酸含量范围21.10mg/g～39.19mg/g，没食子酸转移率范围26.46%～49.14%。三批颗粒出膏率、没食子酸含量和转移率均在该范围内。说明配方颗粒与汤剂相当。

表1 16批标准汤剂和3批颗粒含量测定结果

2.4 特征图谱的建立：具体如下。

2.4.1 对照品溶液制备：取没食子酸对照品加50%甲醇溶解制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.4.2 供试品溶液制备：取玫瑰花标准汤剂冻干粉和配方颗粒样品各约0.1g，精密加50%甲醇50ml，超声30分钟，滤过，取续滤液，即得。

2.4.3 色谱条件：采用WondasilTM C18柱（4.6mm×250mm，5μm）。以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B；检测波长为274nm；柱温为30℃。理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于5000。见表2。

表2 色谱条件表

2.4.4 方法学考察：通过对供试品稳定性、精密度、重复性、中间精密度试验RSD＜2%；对不同柱子耐用性试验各主要色谱峰的相对保留时间无明显变化（RSD＜2%），表明该方法耐用性良好。

2.4.5 指纹图谱：采用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以16批不同批次玫瑰花饮片制备的标准汤剂的HPLC图谱色谱峰进行自动匹配，建立对照指纹图谱，结果见图2。

3 讨论

图2 16玫瑰花汤剂叠加图谱（S1-S16）和对照图谱(R)

《中华人民共和国药典》2015版中玫瑰花标准无薄层鉴别、含量及特征图谱，无法对药材有效质量控制；玫瑰花配方颗粒传统汤剂均是水提，为有效控制质量，建立了以出膏率、含量和含量转移率以及薄层鉴别和特征图谱为指标的玫瑰花配方颗粒质量评价方法，可为玫瑰花饮片和相关产品的质量控制提供一定的科学参考。