不同生长年限木本曼陀罗中莨菪碱和东莨菪碱含量比较研究

刘国宇，崔新爱，李 艳，王 玮，周军辉

(1. 陕西省西安植物园，陕西 西安 710061；2. 陕西省植物资源保护与利用工程技术研究中心，陕西 西安 710061)

木本曼陀罗(Brugmansiaarborea)为茄科木本曼陀罗属常绿灌木或小乔木，其花期长、产量高、繁殖栽培容易。木本曼陀罗中含有莨菪碱(hyoscyamine)和东莨菪碱(scopolamine)等莨菪烷类生物碱，在临床上有广泛应用，主要用于解痉、兴奋呼吸、抑制中枢、活跃微循环和解磷毒等方面[1～2]。目前，对木本曼陀罗的相关研究报道较少，主要是集中在植株的繁殖栽培技术与抗菌研究方面[3～6]，以及对木本曼陀罗不同组织部位中成分含量研究[7]，尚未见对不同生长年限木本曼陀罗中托品烷类生物碱含量测定的研究报道。笔者研究是利用高效液相色谱(HPLC)法对1年生和3年生红花、黄花木本曼陀罗中莨菪碱和东莨菪碱含量进行测定，比较不同生长年限中2种成分的含量差异，以期能够指导木本曼陀罗的合理开发利用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

试验材料于2017年12月4日采自陕西省西安植物园，分别为1年生和3年生木本曼陀罗的根、茎、叶等，切片后阴干，再置于50 ℃恒温烘箱继续烘干6 h，粉碎，密封保存。东莨菪碱标准品(上海同田生物技术股份有限公司，含量≥98%，批号17121229)；莨菪碱标准品(上海源叶生物科技有限公司，含量≥98%，批号KA0802CB14)。甲醇、乙腈均为色谱纯(Fisher公司)，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.2 仪器与设备

Shimadzu LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津)，InertSustain C18(4.6×250 mm，5 μm)色谱柱(日本岛津)，BT125D电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，XY-100型高速多功能粉碎机(浙江省永康市松青五金厂)，KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，UPH-Ⅱ-10T型超纯水机(四川优普超纯科技有限公司)，RV10基本型旋转蒸发仪(德国IKA公司)。

1.3 方法

1.3.1 供试品溶液[8]分别精密称取1年生和3年生红花、黄花木本曼陀罗不同部位样品粉末，称量后置于锥形瓶中，加入浓氨水-乙醚-乙醇(4∶10∶5)溶液45 mL，塞紧后摇匀，室温放置12 h后超声提取2次，每次30 min，过滤，收集上清液，用少量提取液洗涤残渣2次，将上清液与洗涤液合并后于60 ℃水浴蒸干。残渣用0.5 mol·L-1硫酸(1 mL)超声1min，离心4 min(8 000 r·min-1)，收集上清液，再用1 ml纯水超声洗涤后离心4 min(8 000 r·min-1)，合并上清液，分别用40 mL、20 mL、20 mL氯仿萃取，每次萃取后收集水层，用0. 5 mol·L-1氢氧化钠调节pH至8～9，再分别用40 mL、20 mL、20 mL氯仿萃取，收集氯仿层，水浴上旋转蒸发去除氯仿，残渣用甲醇溶解，超声1 min，定容至5 mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

1.3.2 色谱条件[9]InertSustain C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.07 mol·L-1磷酸钠溶液(含0.0175 mol·L-1十二烷基硫酸钠，用磷酸调节pH值至6.0)(50∶00) 为流动相；流速1.0 mL·min-1，检测波长216 nm，柱温35 ℃，进样量10 μL。

2 结果与分析

2.1 莨菪碱和东莨菪碱含量的测定

精密称取1年生和3年生红花、黄花木本曼陀罗不同组织部位样品，按“1.3.1”的方法制备供试品溶液，按“1.3.2”的色谱条件测定莨菪碱和东莨菪碱含量，结果见表1。

表1 不同生长年限木本曼陀罗各组织部位中莨菪碱和东莨菪碱含量

2.2 莨菪碱和东莨菪碱含量比较分析

由表1可以看出，1年生和3年生红花木本曼陀罗中莨菪碱含量最高部位均为根部，分别为0.066%和0.117%，3年生植株根部含量高于1年生植株，其他各部位中莨菪碱含量差别不明显；东莨菪碱含量最高部位分别为当年生绿茎(0.071%)和根部(0.075%)，1年生和3年生植株各部位中东莨菪碱含量差别均较小。1年生红花木本曼陀罗的根中莨菪碱含量稍高于东莨菪碱，3年生红花木本曼陀罗的木质化茎和根中莨菪碱含量稍高于东莨菪碱含量，其他部位中东莨菪碱含量均稍高于莨菪碱含量。

由表1还可以看出，1年生和3年生黄花木本曼陀罗中莨菪碱含量最高部位分别为嫩叶(0.156%)和根(0.039%)，嫩叶中莨菪碱含量为1年生植株明显高于3年生植株，其他各部位中含量差别均不大；东莨菪碱含量最高部位也分别为嫩叶(0.287%)和根(0.215%)，根中东莨菪碱含量为3年生植株明显高于1年生植株，其他部位中含量均为1年生植株高于3年生植株。1年生和3年生黄花木本曼陀罗各部位中东莨菪碱含量均高于莨菪碱含量。

3 结论与讨论

通过研究可以看出，3年生红花木本曼陀罗根中莨菪碱含量明显高于1年生植株，3年生黄花木本曼陀罗根中东莨菪碱含量明显高于1年生植株，生长年限长对于木本曼陀罗根部莨菪碱和东莨菪碱积累有积极作用。而对于其他组织部位中2种成分的含量，一年生植株更体现出其优势。笔者实验也证明了黄花木本曼陀罗是东莨菪碱优势资源植物，与彭广芳等[10]的研究结果一致。生长年限更长的木本曼陀罗中莨菪碱和东莨菪碱含量变化，以及不同生长年限植株在不同季节中2种成分含量变化还有待进一步研究。