桤叶唐棣组织培养快繁技术研究

张利萍

(辽宁省森林经营研究所，辽宁 丹东 118000)

桤叶唐棣Amelanchieralnifolia属蔷薇科唐棣属落叶小乔木或灌木[1]，树高通常1.5～3.0 m[2]，具有耐旱、耐瘠薄的特性，是分布于北美洲内陆的重要经济林树种，具有很高的生态经济价值。其果实为浆果状梨果，富含多种营养成分[3]，是目前国际上发展速度最快的第三代水果之一[4]，英国、俄罗斯、丹麦等国家有引种栽培，适合我国长江以北推广发展。桤叶唐棣果实营养丰富，含糖量11%～19%，蛋白质1.9%～9.7%。每100 g鲜果含钙88 mg，为百果之首，含镁400 mg、钾300 mg、铁79 mg、锌3.28 mg,还含微量元素锰等，富含18种氨基酸。除鲜食外，果实可用于酿酒、制作食品、饮料和药品等。嫩叶可制茶或提取天然色素。花色鲜艳美观，具有观赏价值，也是不可多得的园林绿化树种[5]。由于引种初期种源比较少，所以利用组织培养进行无性繁殖，既保存了物种的原有特性，又可以在短时间内提高优良种苗繁育数量。

1 材料与方法

1.1 试验材料

桤叶唐棣的幼嫩茎段、茎尖取自辽宁省森林经营研究所试验田，试验于2017年6月中旬在组培中心实验室进行。

1.2 培养条件

以MS为基本培养基，附加3%蔗糖、0.6%琼脂以及不同质量浓度的外源激素，pH值调节至5.8～6.0，120 ℃高压灭菌20 min，光照强度1 500～2 000 lx，温度设置为光照培养23 ℃、黑暗培养18 ℃，诱导芽分化时光照培养12 h·d-1，诱导生根时光照培养10 h·d-1。

1.3 试验方法

1.3.1 外植体处理

选取芽眼饱满的桤叶唐棣嫩枝茎段、茎尖，剪去叶片，切成1.0～1.5 cm小段，每段至少有1个腋芽。将切好的茎段用纱布包好，流水冲洗60 min，于超净工作台上进行表面灭菌，先用75%酒精浸泡15 s，无菌水冲洗2次，再用0.1%HgCl2浸泡10 min，无菌水冲洗5次，用滤纸吸去水分，并将其顶端和底部分别切掉约0.3 cm(灭菌剂杀死的部分)，每瓶接种1个茎段或茎尖，每种培养基接种20瓶，重复 3 次，观察记录诱导出芽情况。

1.3.2 芽诱导培养

通过前期试验，确定诱导培养基分别为MS+NAA 0.15 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1；MS+IBA 0.1 mg·L-1+ZT 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1；MS+IAA 1.0 mg·L-1+ZT 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1；MS+NAA 0.1 mg·L-1+ZT 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1。

1.3.3 继代增殖培养

通过前期试验，确定继代增殖培养基分别为MS+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1；MS+IBA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1；MS+IAA 1.0 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1。将诱导出的桤叶唐棣试管苗切成3～4个芽为1簇，均匀接入不同的继代培养基中诱导分化再生苗，每瓶3簇，共20瓶，重复3次，观察记录无菌苗的生长状态，统计增殖率。

1.3.4 生根培养

通过前期试验，确定生根培养基分别为1/4MS+NAA 0.1 mg·L-1；1/4MS+ IAA 0.7 mg·L-1；1/4MS+ IBA 0.5 mg·L-1。当试管苗高2.0～2.5 cm，将继代增殖培养的小苗接入不同生根培养基中诱导生根，每瓶接种试管苗10株，每种培养基接种20瓶，3次重复。培养30 d后统计生根数、根长，计算生根率和平均生根条数。

1.3.5 驯化与移栽

当试管苗根长到1.0～1.5 cm时，打开瓶盖，取出试管苗，洗净试管苗根部培养基，用多菌灵500～800倍液浸泡30 min左右，然后栽入用0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。苗床基质4个处理分别为沙∶土=1∶1、沙∶蛭石=1∶1、纯沙和纯蛭石。移栽后浇1次透水，以不造成基质积水而腐烂根系为准，以后根据具体情况补充水分，每周喷1次百菌清和营养液，盖塑料拱棚，保温保湿，7 d后逐渐增加通风量，减少浇水量，30 d后移栽到营养钵或直接移栽到大田。30 d后统计移栽成活率。

2 结果与分析

2.1 芽诱导培养

从表1可以看出，当6-BA为2.0 mg·L-1时，随着激素种类及质量浓度的不同，试管苗的生长也存在差异，试管苗在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.15 mg·L-1上生长最好，在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ZT 0.5 mg·L-1上生长最差。

表1 不同外源激素对桤叶唐棣嫩枝茎段、茎尖芽诱导的影响 mg·L-1

2.2 继代增殖

从表2可以看出，继代增殖培养时，不同激素配比对桤叶唐棣试管苗的分化状态和增殖系数影响不同，在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1培养基中继代分化的苗最多，增殖系数5～7，生长最好。且在继代增殖培养基上培养出的试管苗比较粗壮，不需要进行壮苗培养。可以直接将高2.0～2.5 cm的试管苗进行生根培养，剩余小苗继续继代增殖培养，当苗高达到标准后即可继续进行生根培养，为工厂化育苗奠定了基础。

表2 不同外源激素对桤叶唐棣继代增殖的影响 mg·L-1

由表3可见，不同激素配比对试管苗增殖系数有极显著影响。多重比较表明，MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1是桤叶唐棣增殖的最佳培养基。

2.3 生根培养

从表4可以看出，接种在培养基1/4MS+IAA 0.7 mg·L-1上的试管苗10 d开始发根，根数最多，生长最好，生根率达到91%以上。

表3 不同培养基对桤叶唐棣增殖系数影响的方差分析

表4 不同外源激素对桤叶唐棣试管苗生根的影响

从表5、表6可见，不同培养基对试管苗生根数和生根率的影响达到极显著水平，多重比较表明，1/4MS+IAA 0.7 mg·L-1是桤叶唐棣试管苗的最佳生根培养基。

表5 不同培养基中桤叶唐棣生根数方差分析

表6 不同培养基中桤叶唐棣生根率的方差分析

2.4 组培苗移栽

组培苗移栽是组培快繁的重要环节。当试管苗根长到1.0～1.5 cm时，分别移栽到沙∶土=1∶1，沙∶蛭石=1∶1，纯沙和纯蛭石4种基质上，成活率分别为71%、78%、80%、75%，其中纯沙的成活率最高，其余3种基质的成活率均低于80%。

3 结 论

在桤叶唐棣嫩枝茎段、茎尖为外植体的培养试验中，最佳芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.15 mg·L-1，诱导25 d左右开始继代增殖培养；最佳增殖培养基为MS+6-BA 2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1，增殖系数≥5，在增殖培养基上培养出的试管苗比较粗壮，不需要进行壮苗培养，可以直接将苗高2.0～2.5 cm的试管苗进行生根培养，23～27 d为一个继代周期；最佳生根培养基为1/4MS+IAA 0.7 mg·L-1，生根率达到91%以上，每株6～8条根，根粗苗壮。当试管苗根长1.0～1.5 cm时，将试管苗根部培养基冲洗干净，移栽到纯沙中，成活率达80%。