头孢地嗪中潜在基因毒性杂质检测研究

唐新萍 魏永红 宋世丘 向以东

（珠海保税区丽珠合成制药有限公司 广东 珠海 519030）

头孢地嗪钠为常见的第三代头孢菌素抗生素，其急性毒性试验相较其他头孢类偏低，具有广谱抗菌活性，其为头孢地嗪成盐后的产品，生产的关键原料包含AE 活性酯和头孢地嗪侧链酸，AE 活性酯中可能引入硫脲[1,2]，头孢地嗪侧链酸中可能引入二硫代氨基甲酸铵[3]。硫脲和二硫代氨基甲酸铵为潜在基因毒性杂质。本文研究了两杂质的检测方法，并对其进行了验证，确认该方法灵敏度符合ICH M7[4]的要求。

1.仪器与试剂

戴安U-3000；Sartoris 电子天平。硫脲：天津福晨。二硫代氨基甲酸铵：江西盛伟化工科技。磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、乙腈均为分析纯及以上，试验用水为纯化水。

2.方法与结果

2.1 波长筛选

用流动相A（取磷酸二氢钾0.87g 与无水磷酸氢二钠0.22g，加水溶解并稀释至1000ml 混匀）-流动相B（乙腈）=(50:50)，溶解配制硫脲和二硫代氨基甲酸铵浓度为0.1mg/ml，在200 ～400nm 进行波长扫描[2]，结果显示：二硫代氨基甲酸铵在220nm～250nm 处于强紫外吸收区，硫脲在220nm ～240nm 处于强紫外吸收区。因此选择230nm 作为检测波长。

图1 硫脲紫外吸收分布图

图2 二硫代氨基甲酸铵紫外吸收分布图

2.2 色谱条件

色谱柱：C18。流动相A：取磷酸二氢钾0.87g 与无水磷酸氢二钠0.22g，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀。流动相B:乙腈。稀释剂：流动相A-流动相B(50:50)。检测波长：230nm。进样体积：20μl，见表1。

表1 梯度洗脱表

2.3 溶液制备

对照品溶液：用稀释剂配制1μg/ml 的两对照品溶液。供试品溶液：取本品用5%碳酸氢钠溶解并稀释制成0.05g/ml 溶液。

2.4 专属性与精密度

分别用对照品溶液连续测试6 次，二硫代氨基甲酸铵和硫脲分离度为5.2，RSD 值均小于5.0%，结果均符合要求。

图3 专属性色谱图

2.5 LOD 和LOQ

取对照品适量逐级稀释至S/N 约为3 和10。结果均远小于根据CPDB 的TD50 计算的最大限度的30%，见表2。

表2 LOD 和LOQ 结果表

2.6 线性与范围

取对照品适量，制成相当于对照品溶液浓度的20%、50%、80%、100%、120%的溶液，每个浓度测试2 次，以各组份浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作图并计算回归方程和相关系数（r ≥0.99），结果均符合规定。

表3 线性回归结果表

2.7 回收率试验

取对照品适量，制成相当于对照品溶液浓度的80%、100%、120%的溶液，每个浓度测试3 次，计算回收率。结果均在85%～105%之间，RSD 均小于10%，结果符合规定。

3.结论

本研究建立的头孢地嗪中硫脲和二硫代氨基甲酸铵的检查方法，操作简单，检查线性范围广，灵敏度高，非常适用于该杂质残留检查。