纸片扩散法检测MRSA 耐药性的临床意义

康玲燕 梁艳芝 康俊芳

金川集团公司职工医院，甘肃 金昌 737100

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）可引起肺炎、中耳炎、脓毒血症、脑膜炎等严重感染，是一种毒性较强的细菌。在中老年人、儿童、烧伤患者、免疫系统功能障碍患者中较为常见，现已成为诱发社区感染及医院感染的重要致病菌。有报道指出，MRSA 对四环素类、喹诺酮类、大环内酯类等的抗生素呈现耐药，虽然万古霉素等糖肽类抗生素在MRSA 治疗中效果显著，但随着其应用的广泛，MRSA 对其敏感度也明显下降［1］。若要有效地避免和控制MRSA 感染，及时、准确的检测方法至关重要，全自动微生物分析仪、头孢西丁纸片扩散法、免疫学检测等，均为临床常用的MRSA 检测方法，本文将以我院2019 年1 月至2020 年1 月提取分离的268 株金黄色葡萄球菌为研究样本，对纸片扩散法在MRSA 临床检测和耐药性研究方面的应用价值和意义进行探究，结果如下。

1 资料与方法

1.1 基本资料 研究样本为2019 年1 月至2020 年1月我院分离的268 株金黄色葡萄球菌，采用头孢西丁纸片扩散法和Vitek 全自动微生物分析仪分别进行检测。268 株金黄色葡萄球菌以ATCC25923 为对照组，采用PCR 法进行mecA 实验室基因检测，其中阳性菌株194 株，阴性菌株74 株。

1.2 方法 Vitek 全自动微生物分析仪：操作步骤严格按照说明书进行，采用Vitek 2 Compact 微生物分析仪及药敏板进行检测。头孢西丁纸片扩散法：采用无菌生理盐水溶液配成0.5 麦氏单位的细菌悬液，在琼脂平板（90mm）均匀涂抹放置，待水分充分吸收后，经头孢西丁纸片贴于琼脂表面，35℃孵育24 小时。抑菌环直径≥20mm 为敏感，≤19mm 为耐药。MH 琼脂平板、头孢西丁纸片（30μg）购自英国Qxoid 公司。

1.3 统计学方法 采用SPSS 23.0 对收集的数据加以分析，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 MRSA 检出率对比 Vitek 全自动微生物分析仪检出阳性菌株194 株，阴性菌株74 株，检出率为72.39%（194/268）。头孢西丁纸片扩散法检出阳性菌株194株；阴性菌株74 株，检出率为72.39%（194/268）。

2.2 MRSA 抗菌药物耐药率 MRSA 对替考拉宁、万古霉素的耐药性均为0；对庆大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在较高的耐药性。见表1。

3 讨论

金黄色葡萄球菌是导致人和动物感染的重要病原菌，在自然界中广泛存在，且致病力较强。1961 年，首株 MRSA 被学者发现，20 世纪70 年代MRSA 感染率急剧上升，给人们生命安全造成了严重威胁［2］。在介入治疗、免疫抑制剂、抗菌药物广泛应用的背景下，MRSA菌株数量不断增多，容易引发脓毒血症、血流感染等相关社区或医院感染。不仅如此，有报道指出MRSA 对克林霉素、氨基糖苷类、大环内酯类等非β 内酰胺类抗生素呈多重耐药，且在胸腹水、脑脊液、咽拭子、分泌物和血液中均有检出，一定程度上增加感染患者死亡风险，提高临床治疗难度。现阶段MRSA 感染仍然是重要的公共卫生问题之一［3-4］。本次研究结果显示，头孢西丁纸片扩散法检出率与Vitek 全自动微生物分析仪检测、PCR 法mecA 实验室基因检测相同，MRSA 对替考拉宁、万古霉素的耐药性均为0；对庆大霉素、青霉素、左旋氧氟沙星等均存在较高的耐药性。纸片扩散法具有成本低廉、操作简便的特点，最早采用甲氧西林作为药敏纸片，但经过长期临床实践可知，甲氧西林药物容易降解，因此容易存在误差，影响检测的准确性。头孢西丁属于头霉素抗菌药物，不受β-内酰胺酶的影响，可诱导mecA 基因的表达，在MRS 检测中具有很高的准确性。全自动微生物仪是一种常规的MRSA检测方法，特异性和敏感性较高，但价格普遍较为昂贵。本次研究发现，Vitek 全自动微生物分析仪和头孢西丁纸片扩散法MRSA 检出率无差异，可采用便捷、成本较为低廉的头孢西丁纸片扩散法代替微生物分析仪在基层社区或医院进行MRSA 检测。

表1 194 株MRSA 抗菌药物耐药率

MRSA 耐药性具有多重性和不均一性，对多数种类抗菌药物都有着耐药性。有学者研究指出，万古霉素是MRSA 感染治疗的首选药物，MRSA 对左氧氟沙星、庆大霉素、磺胺甲恶唑、克林霉素、头孢唑啉、氨苄西林等耐药率均在60%以上，呋喃妥因、利福平的耐药率也较为显著［5］。在重症MRSA 感染患者治疗中，可联合呋喃妥因和利福平进行治疗，其中呋喃妥因适用于尿路感染和肠道感染患者，可提高临床治疗效果，防止细菌耐药问题发生；复方磺胺甲恶唑适用于轻、中度感染患者，但由于该药只能口服、起效慢，因此不适用于全身治疗。在甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌中，含有PBPs，即与β-内酰胺类抗生素亲和力高的青霉素结合蛋白，在细菌保持正常形态、生长繁殖方面起重要作用，参与细胞壁粘肽层的合成，具有转肽酶或羟肽酶作用，是细菌繁殖、生长所必需的。MRSA 通过获得mecA基因对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药机制，但多重耐药机制较为复杂，目前尚未明确，可知获得外界耐药基因是MRSA 产生多重耐药的重要途径。由于MRSA所具有耐药性，因此在临床治疗中应选用联合用药方案，切记乱用、滥用抗生素，最大限度保护万古霉素等对MRSA 的抗菌活性，防止其敏感度下降。

头孢西丁纸片扩散法在MRSA 检测中具有较高的准确性，且具有操作便捷、有效等应用优势，是MRSA可行、可靠的检测方法，与Vitek 微生物分析仪检测法的检出率无差异，值得推广。同时，MRSA 对大多数抗菌药物耐药，在临床治疗过程中，应根据检测结果选用恰当、有效的抗菌药物。