乙型肝炎肝硬化患者血清 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 的水平及临床意义

梁新宇 李彩东 杨勇卫

兰州市第二人民医院，甘肃 兰州 730046

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球关注的公共卫生和健康问题，约有3.5 亿感染者［1］。据世界卫生组织报道，HBV 感染者所致的肝硬化以致肝衰竭、肝细胞癌的比例可达30%～45%［2］。我国2006 年流行病学调查显示1～59 岁人群HBsAg 携带率为7.18%，其中慢性HBV 感染者约 9300 万人［3］，HBV 感染者进展为肝硬化的年发生率为2%～10%［4］。乙肝病毒感染引起的肝细胞炎症是促使肝细胞进行自行修复、细胞外基质（extracellular matrix，ECM）沉积、形成肝纤维化的基础。在乙型肝炎感染进展为肝硬化的过程中，伴随新生血管和纤维疤痕形成，炎性细胞因子参与的肝细胞反复受损所致的ECM 过度沉积，致肝内纤维疤痕形成，导致不可逆转的肝纤维化，最终导致肝硬化。HBV 感染肝细胞后引起宿主的免疫反应，感染所致的病理损伤机制尚未完全清楚，而细胞因子在调节免疫反应中起着重要的作用，因此，本研究检测乙型肝炎肝硬化患者血清细胞因子 IL-15、IL-16 、IL-18、IFN-γ 的水平，以探讨其在肝硬化中的表达水平及临床意义。

1 资料和方法

1.1 临床资料 收集2014 年7～12 月我院住院及门诊乙型肝炎感染者90 例，其中乙型肝炎病毒携带者（asymptomatic surface antigen carrier，ASC）45 例，年龄（38.5±18.0）岁，男性 23 例，女性 22 例；乙型肝炎肝硬化患者（liver cirrohisis，LC）45 例，年龄（47.5±21.0）岁，男性25 例，女性20 例；另选取健康体检正常对照40例，年龄（36.5±20.0）岁，男性 21 例，女性 19 例。三组一般资料差异均无统计学意义（P＞0.05）。乙肝病毒携带者诊断符合中华医学会感染病分会、中华医学会肝病学学分会联合制定的2010 年版《慢性乙型肝炎防治指南》［5］，乙肝肝硬化的临床诊断标准符合2000 年指定的《病毒性肝炎防治方案》［6］。排除甲、丙、丁、戊、庚型肝炎的感染、自身免疫性肝病、酒精性肝病、脂肪肝、药物性肝病。

1.2 主要试剂 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒均购自美国RD 公司。

1.3 检测方法 采集受试者清晨空腹静脉血4mL，分离其血清，保存于-80℃。集中采用ELISA 双抗体夹心法（ST-360 酶标仪）检测血清 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 的水平，实验操作严格按实验室标准SOP 文件及试剂盒说明执行。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0 统计软件，单因素ANOVA 分析，计量资料符合正态分布的以均数±标准差（）表示，两组之间均数比较采用 t 检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

LC 组 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 血清水平高于ASC 组和健康对照组（P＜0.05），ASC 组高于健康对照组（P＜0.05），差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 1，图 1。

表 1 三组 IL-15、IL-16、IL-18 和 IFN-γ 的表达水平

图 1 各组人群血清 IL-15、IL-16、IL-18、IFN-γ 的水平统计分析图

3 讨论

乙型肝炎病毒感染后，由多种细胞因子参与引发肝细胞炎症和活化肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC），炎性细胞因子对肝细胞造成持续性的损伤过程，同时肝细胞的自我修复功能也导致纤维胶原不断在肝窦Disse 间隙沉积［7］，改变肝内血管的形态结构，致使结缔组织形成。HBV 感染引发免疫反应损伤肝细胞，形成的炎症是促使肝细胞进行自行修复、ECM 沉积、形成肝纤维化的基础，伴随新的血管和纤维疤痕生成，HSC 的活化，再生的肝实质细胞释放多种炎性细胞因子作用于HSC，使其不断增殖，最终导致肝硬化。肝脏含有丰富的巨噬细胞（如Kuffer 细胞），随着对免疫分子作用于肝纤维化机制的深入研究表明，HSC 是调节肝纤维化的共同通路［8］。HBV 感染肝细胞引起机体Th1/Th2 的比例失衡，多种促炎细胞因子，如IL-6、IL-8、IL-10、IL-17 相互作用于肝细胞，不仅引起肝细胞的炎症反应，同时也启动了纤维化的发生，而表达于单核巨噬细胞的钙网质蛋白（calreticulin protein，CRT）的应激反应是HSC 发生凋亡机制之一［9］。HBV 携带者常表现为免疫耐受，肝细胞仅有轻微炎症或无炎症活动。

本研究表明，乙型肝炎病毒携带者和乙型肝炎肝硬化患者血清 IL-15、IL-16 、IL-18、IFN-γ 的浓度水平均升高，以肝硬化组升高的最为显著。在机体的天然免免疫中，IL-15 下调调节性Treg 细胞，解除Treg 细胞对T 细胞的抑制效应，提高NK 细胞的细胞毒性而且协同 IL-12 促使 NK 细胞分泌 IFN-γ［10］。IL-16 促进单核-巨噬细胞（包括肝脏Kuffer 细胞）表达细胞因子受体及分泌TNF 等炎性细胞因子，促进机体的炎症反应［11］。IL-18 是强烈的 IFN-γ 诱导因子，促进 NK 细胞分泌IFN-γ 和T 淋巴细胞的增殖，与HBV 感染后的病情转归有着密切的联系［12］。同时IFN-γ 能通过非细胞溶解方式干扰HBV 感染肝细胞中HBV 的复制中间体，并降解HBV 在复制过程中产生的前基因组RNA，降低细胞中的病毒水平。陈学富等［13］研究表明，随着年龄的增长，低HBsAg 水平、HBeAg 阴性和低水平的ALT，使得慢性感染肝组织病变进展的风险会增加。本研究证明乙型肝炎肝硬化患者以上四种细胞因子均升高，显著高于无症状乙型肝炎病毒携带者，提示以上四种细胞因子均参与乙型肝炎肝硬化的发生发展过程。