北京市海淀区女性人乳头瘤病毒感染结果分析

王海滨 张冬青 赵娇

乳头瘤病毒（papillomavirus）属于乳多空病毒科（papovaviridae）的乳头瘤病毒属，包括多种动物乳头瘤病毒和人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV），HPV 主要通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。HPV 不但具有宿主特异性，而且具有组织特异性，只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，至今已鉴定出100 多种HPV 基因型［1］。HPV 可分为高危型和低危型，持续性高危型HPV 与宫颈上皮内瘤、宫颈癌密切相关，而低危型HPV 与生殖道外生性湿疣类、扁平湿疣类病变相关，不同HPV 的亚型具有不同的致病能力，多重HPV 感染是加重宫颈病变的重要因素［2-3］。因此，了解不同HPV 感染情况及亚型的分布对早期诊断和预防宫颈病变具有重要意义。本文对北京市海淀区3 650 例妇女的宫颈脱落细胞进行了17 种HPV 亚型检测，分析HPV 感染情况、亚型分布及感染年龄情况等特点，为本地区女性预防HPV 感染和宫颈疾病防治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年7月至2019年7月期间在解放军总医院第四医学中心妇科、皮肤科和体检中心就诊的3 650 例妇女，年龄15～80 岁，平均为（43.9±11.8）岁，其中＜20 岁22 例、20 岁～381 例、30 岁～989例、40 岁～1141 例、50 岁～745 例、60 岁～296 例、70岁～76 例。所有人群均为初次检查，排除第二次复查结果。

1.2 仪器和试剂

基因扩增仪为上海宏石医疗科技有限公司生产的全自动医用PCR 分析仪SLAN-96P 型，HPV基因检测试剂盒为上海之江人乳头瘤病毒基因分型核酸测定试剂盒，可检测HPV-DNA 高危型15种：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82，HPV-DNA 低危型2 种：6、11。

1.3 方法

1.3.1 标本的采集

用窥阴器暴露宫颈，宫颈取样器刷取上皮细胞，然后将宫颈刷置于3 mL 细胞保存液中，沿宫颈刷柄折痕处将其折断，旋紧管盖并做好标本标识，将细胞保存液直立放置于4℃保存，在48 h 内检测完毕。

1.3.2 DNA 的提取

严格按照上海之江生物科技股份有限公司的人乳头瘤病毒分型核酸测定试剂盒操作说明书提取DNA。

1.3.3 PCR 扩增

将配制好的PCR 混合液（含有dNTP、Taq DNA 聚合酶、引物和荧光探针）36 μL 置于反应管中，分别加入4 μL 已提取的DNA 样品、阴性对照（H2O）和阳性对照（含目的基因片段的缺陷性病毒），反应体系总体积40 μL，3 000 r/min 离心4 s，上机扩增。扩增条件为94℃2 min；93℃10 s，62℃31 s，循环40 次；单点荧光检测在62℃。

1.3.4 结果判定

根据厂家说明书判读实验结果，当待检样本HPV 的Ct 值≤38，且扩增曲线呈典型的S 型，则判断为阳性；若待检样本Ct 栏都显示“No Ct”，检测样本判定为阴性；如果待检样本Ct 值在38～40 之间，需重复测定，如仍在38～40 之间，且扩增曲线呈典型的S 型，则判断为阳性，若非典型S 型曲线，则判为阴性；当待检样本HPV（IC）核酸荧光PCR 检测混合液的VIC 通道Ct 值＞32，且在其他混合液中均为阴性，则无法判读结果，说明提取存在问题或者PCR 检测存在问题，需重复试验。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 统计学软件分析，计数资料用%表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 感染总体情况

3 650 例受检者中共检测到HPV 感染阳性患者825 例，总检出率为22.60%（825/3650）。HPV 阳性患者中，HPV 高危型745 例，占90.30%，低危型172 例，占20.85%，既感染高危型又感染低危型92例，占11.15%；多重感染情况见表1。

表1 北京市海淀区女性HPV 阳性检测中多重感染情况Table 1 Multiplex HPV infection results of women from Haidian District of Beijing

2.2 不同年龄段HPV 感染情况及亚型情况分析

3 650 例受检人群以40～49 岁人群为主，＜20岁组和20 岁～年龄组感染率较高（59.09%，45.67%），显著高于其他年龄组患者，差异具有统计学意义，见表2。

表2 北京市海淀区不同年龄段女性HPV 感染情况［n（%）］Table 2 HPV positive rate of each group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

2.3 不同HPV 亚型检出情况

对825 例HPV 感染阳性患者进行分析，总体感染率高的五种亚型从高到底依次为HPV 52、HPV 6+11、HPV 16、HPV 58、HPV 51 型，单一感染和多重感染率高的三种亚型从高到底依次为HPV 52、HPV 6+11、HPV 16 型，见表3。

2.4 不同年龄段HPV 感染亚型情况分析

不同年龄组女性感染HPV 的亚型各不相同，但是基本以HPV 52、HPV 6+11、HPV 16 型为主，与总感染率基本一致，见表4。

3 讨论

宫颈癌是威胁女性健康的最常见恶性肿瘤之一，虽然近年来我国积极推进宫颈癌的筛查与防治工作，但是新发宫颈癌病例仍然呈逐年增加趋势，发病年龄日益年轻化。HPV 感染，特别是持续的高危型HPV 感染是导致宫颈癌的最重要因素［4-5］。研究发现，宫颈癌患者的宫颈脱落细胞标本几乎都可以检测到HPV 的感染，并且随着宫颈病变的加重而提高，且HPV 感染类型的不同对患者产生的影响也不同［2］。

表3 北京市海淀区女性HPV 感染亚型情况［n（%）］Table 3 HPV positive rate of each group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

表4 北京市海淀区不同年龄段女性HPV 感染分布情况［n（%）］Table 4 HPV infection distribution of each age group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

HPV 的感染率会因地区和人群而有所不同，报道的范围为1.4%～25.6%，分析认为形成差异的主要原因，应该是我国地域辽阔、民族众多，各地区间经济发展不平衡所导致的生化活水平和条件不同造成的［6］。不少省市区发表了各地区HPV 感染情况的报告，如南京地区为33.47%［7］，上海浦东地区为23.43%［8］，连云港地区为25.31%［9］，福建省南平市为22.64%［10］，山东地区为29.38%［11］，西安地区为30.45%［12］。本研究H PV 的总感染率略低于其他地区，高危型HPV 感染的比例高于低危型HPV 感染的比例。Garg 等［13］研究结果显示HPV亚型的分布与种族、年龄、地域有关，全世界范围内共同最常见的感染亚型为16、18、31 型。本文研究结果与我国常见的HPV 优势型别类型基本一致，苏州地区报道的是HPV 52、HPV 81、HPV 16型［14］，贵阳地区是HPV 52、HPV 16、HPV 58 型［15］，南京地区是HPV 16、HPV 58、HPV 52 型［7］，安徽地区是HPV16、HPV 52、HPV 58 型［16］，上海浦东地区是HPV 52、HPV 16、HPV 58 型［17］，北京地区天坛医院报道的是HPV 52、HPV 58、HPV 16 型［6］。但是各地区检出频次构成比略有差异，这与全世界范围内共同的最常见感染为HPV 16，HPV 18 型位居第二位有差异，HPV 52、HPV 58 型的感染率在国内其他地区是否也远超HPV 18 型，这有待于进一步研究确定。HPV 感染的型别具有人群地域的特点，造成亚型分布差异的原因可能研究对象不同、检测试剂不同有关，但也可能与地理环境、社会生物因素或者遗传免疫因素有关，这也提示各地区在筛查和预防HPV、进行HPV 疫苗研究时，应针对本地区的高致病亚型开展相关工作［6］。

本文研究显示＜20 岁组感染率最高，为59.09%（13/22），排除＜20 岁组收集数据过少的原因，可能与女性宫颈发育不成熟，机体免疫系统在特殊时期变化调节，自身防御功能差有关，导致感染概率增高。HPV 感染是一个漫长的过程，初次感染高危HPV 病毒后可长期潜伏在细胞内，而当机体免疫低下时HPV 病毒恢复活性［18］，持续感染高危型HPV 感染时会诱发宫颈癌［19-20］。目前宫颈HPV 单一感染与多重感染对宫颈病变的影响尚无一致性结论，还需要更深入、更大样本量以及更多地区的研究探讨。

综上所述，北京市海淀区解放军总医院第四医学中心就诊女性HPV 感染趋向低龄化，以单一感染为主，不同年龄组女性感染HPV 的亚型各不相同，总体感染率高的五种亚型从高到底依次为HPV 52、HPV6+11、HPV16、HPV58、HPV51 型，＜20岁组和20～29 岁组感染率较高。应该加强对年轻女性HPV 感染的监测力度，通过引入和推广HPV疫苗，并制定综合合适的防治措施并有效应用于特定人群，降低HPV 感染。