理气散结颗粒的质量标准研究

魏谭军 肖成 魏旭 陈飞 周殿儒 程阔菊 王毅

(四川省达州市中西医结合医院，四川达州 635000)

理气散结颗粒为医院制剂，由理气散结丸（批准文号：川药制字Z20 070503；标准号：四川省食品药品监督管理局标准SZBZ20070502-12[1]）改进而来，原丸剂质量标准仅对方中延胡索进行了显微鉴别，亟待完善。该研究不仅采用TLC 对方中白芍、柴胡等进行定性鉴别，还通过HPLC 对方中芍药苷进行含量测定，按照《中国药典（2015 版）》对理气散结颗粒进行颗粒剂项下相关检查[2]，旨在为建立该制剂的质量标准提供实验依据。

1 材料与方法

仪器：Agilent 1100 型高效液相色谱仪，美国Agilent 公司；BT 25S 十万分之一电子天平（赛多利科学仪器北京有限公司），AotoScience As20500T超声波提取仪（无锡沃信仪器有限公司）。

试药：芍药苷（批号110736-201438，中国食品药品检定研究院）；理气散结颗粒自制（批号分别为20151125、20151126、20151127）。

方法 ：薄层色谱法鉴别方中柴胡、延胡索、甘草、青皮、当归及白芍；高效液相色谱法测定芍药苷的含量并定限；按照《中国药典（2015 版）》规定的方法性状、粒度、溶化性、装量差异及微生物限度进行检查。

2 结果

2.1 制法

称取白芍、柴胡等10 味中药饮片加12 倍量水浸泡0.5h，煎煮1h，煎煮过程中收集芳香水；第二次加10 倍量水煎煮1h，同时收集芳香水；第三次加8 倍量水煎煮1h，同时收集芳香水。三次水提液合并后浓缩至相对密度为1.20～1.40(60℃)的稠浸膏，芳香水经水蒸气蒸馏法继续提纯。取稠浸膏1份，蔗糖粉3 份，糊精1 份（稠膏：蔗糖粉：糊精=1:3:1），混匀，制粒，干燥（70℃），喷加挥发油，混匀，低温干燥，制成1000g，即得[3,13]。

2.2 性状

对三批样品进行观察，样品为黄棕色至棕褐色颗粒；气微香，味甜，微苦。

2.3 TLC 鉴别[4]

2.3.1 柴胡薄层鉴别

以柴胡对照药材为对照，以乙酸乙酯-乙醇-水（8:2:1）为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

图1 柴胡TLC 图（日光与紫外灯下）

2.3.2 延胡索薄层鉴别

以延胡索对照药材为对照，以环己烷-乙醚-三氯甲烷（3:5:0.5）为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，置碘缸中约3min 后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

图2 延胡索TLC 图

2.3.3 当归薄层鉴别

以当归对照药材为对照，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰乙酸（6:5:2:1）为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

2.3.4 白芍薄层鉴别

以芍药苷对照，以三氯甲烷-甲醇（4:1）为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，喷5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

图3 当归TLC 图

图4 白芍TLC 图

2.3.5 青皮薄层鉴别

以橙皮苷对照，以三氯甲烷-甲醇-水（32:17:5）下层溶液为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

2.3.6 甘草薄层鉴别

图5 青皮TLC 图

以甘草对照药材对照，以三氯甲烷-甲醇-水（13:6:2）为展开剂，硅胶G 薄层板上展开，在105℃加热至斑点显色淸晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。而阴性对照溶液色谱中无相应的斑点。结果斑点清晰圆整，Rf 值适中，用以验证三批样品重现性好，故收入标准。

图6 甘草TLC 图

2.4 检查

2.4.1 性状：本品为黄棕色至棕褐色的颗粒；味甜、微苦

2.4.2 粒度：按照《中国药典（2015 年版）》四部粒度和粒度分布测定法（通则0982 双筛分法）测定三批样品（批号：151125、151126、151127），结果见表1。

结果符合《中国药典（2015 年版）》规定，结合药典要求，理气散结颗粒剂粒度暂定为不过1 号筛与过5 号筛总和不超过15%。

表1 理气散结颗粒三批样品粒度测定表

2.4.2 水分 ：按照《中国药典（2015 年版）》四部，水分测定法（通则0832）甲苯法测定三批样品（批号：151125、151126、151127），除另有规定外，水分不得超过8.0%。甲苯法，结果如表2。

表2 理气散结颗粒三批样品水分测定表

结果符合《中国药典（2015 年版）》规定，结合药典要求，理气散结颗粒剂装量含水量暂定为不超过8%。

2.4.3 溶化性：照《中国药典（2015 年版）》四部，颗粒剂溶化性测定，取本品10g，加热水200ml，搅拌5 min，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊。照上述方法测定三批样品，结果符合药典规定。

2.4.4 装量差异：按照《中国药典（2015 年版）》四部（通则0104）颗粒剂项下装量差异检查法测定三批样品（批号：151125、151126、151127）。结果如表3。

表3 理气散结颗粒三批样品装量差异测定表

2.4.5 微生物限度 ：按照《中国药典（2015年版）》附录ⅩⅢC，颗粒剂微生物限度检查测定三批样品（批号：151125、151126、151127）。检测结果如表4。

表4 理气散结颗粒三批样品微生物限度测定表

2.5 含量测定[5-9]

理气散结颗粒是由白芍、柴胡等组成，白芍为方中君药，主要含有芍药苷，本标准参考中国药典，建立高效液相色谱法测定本品中芍药苷的含量，并进行方法学考查。试验中采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。试验证明：该方法准确，可靠，操作简便，故收入正文。

2.5.1 色谱条件

色谱条件及系统适用性试验 Diamansil C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 μ m)；流动相乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脱（表5），柱温30℃，流速1 mL·min-1，检测波长230 nm；进样量5 μL。理论塔板数按芍药苷峰计应不低于2000，峰形良好，其保留时间芍药苷约为12min，芍药苷与相邻峰的分离良好(Rs＞1.5)，阴性对照品溶液无干扰（图7）。

表5 理气散结颗粒流动相洗脱程序表

2.5.2 线性关系的考查

对照品溶液的制备：取干燥至恒重的芍药苷对照品6.36mg 置于100ml 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得63.6μg/ml 芍药苷对照品溶液。

图7 理气散结颗粒高效液相色谱图

表6 芍药苷对照品线性关系考查测定结果

分别精密吸取上述溶液2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果见表6，得回归方程Y=1.19749568x-3.7390238，r=0.99983(n=5)。结果表明芍药苷进样量在0.1272-0.6360μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.5.3 精密度考察

精密吸取线性关系考查项下对照品溶液（芍药苷63.6 μg/mL）5μL，连续进样5 次，结果见表7，RSD=1.58318%，表明精密度良好。

2.5.4 重复性考察

表7 精密度试验结果

供试品溶液的制备：取本品1.5g，置50ml 容量瓶中，加稀乙醇溶解至刻度，超声30min，摇匀，过微孔滤膜(0.45 μ m)，即得。对同一批样品（批号151125）分别取样6 份，平行两次，按上述的含量测定方法进行测定，平均含量2.4038mg/mL，RSD=0.250%，结果表明本法具有良好的重现性，见表8。

表8 重复性试验结果

2.5.5 准确度考察

精密量取已知含量（芍药苷含量2.49mg/g）的样品0.75g，分别加入芍药苷对照品适量，按前述成品供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定，以下列公式计算回收率，结果表明：本法回收率良好，见表9。

表9 回收率试验结果

2.5.6 稳定性考察

分别精密吸取对照品、供试品溶液5μL，于0h、1h、2h、4h、6h、8h、24h，注入高效液相色谱仪，测定芍药苷的峰面积，结果见表10、11，峰面积RSD=0.58%（n=5），表明供试品溶液在24h 内稳定。

2.5.7 样品的测定

取三批中试样品(151125、151126、151127)，按前述拟定的含量测定方法进行测定，结果见表12，根据测定结果，结合实际情况及生产出现的误差，故本标准暂定本品每g 含芍药苷计，不得少于2.3687×80%mg，即不得少于1.89mg。

表10 对照品稳定性试验结果

表11 供试品稳定性试验结果

表12 样品中芍药苷的测定结果

3 讨论

临床使用20 余年的医疗机构制剂理气散结丸，由于其为药材打粉后制成大蜜丸，故服用剂量大（每丸重9g，每次2～3 丸，每日3 次），微生物易超标，口感差、运输携带保存不便、起效缓慢，同时辅料蜂蜜含雌激素促进乳腺增生，给患者带来不便，故将理气散结丸改剂型为理气散结颗粒。按照《医疗机构制剂注册管理办法》《四川省医疗机构制剂研究技术指南》的要求对工艺、质量标准和稳定性进行规范研究[11-12]，旨在提高原有医院制剂理气散结丸的质量及顺应性，获得一种生物利用度高、服用量小、顺应性好、携带方便的医院制剂-理气散结颗粒。

理气散结颗粒由白芍、柴胡、香附、延胡索、青皮、当归等10 味中药材加10 味中药材经提取浓缩成稠膏后，再加入蔗糖、糊精等辅料加工而成[3-5]。通过薄层色谱法对方中柴胡、白芍、青皮、甘草等其他药味进行定性鉴别：斑点清晰圆整，Rf 值适中；采用高效液相色谱法对芍药苷进行含量测定并定限：本品每g 含芍药苷计，不得少于1.89mg，完善了理气散结颗粒的质量标准。HPLC 测定芍药苷含量时，考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液共4 个流动相系统，最终以乙腈-0.1%磷酸作为流动相时色谱峰的分离度较好且基线平稳，有利于特征峰的分析[13-15]。