食品碱性嫩黄O含量测定采取超高效液相色谱-串联质谱法的效果及评价

河南省驻马店市食品药品检验所（463000）叶英剑 李启彬 刘园园

碱性嫩黄O也被叫做奥拉明O，为粉末状物质，颜色为样色，属于工业染料，通常情况下在棉织品、醋酯纤维的染色中应用率较高，同时还可将其用于皮革、纸张以及油漆的染色，但该物质具备毒性，当其与机体皮肤接触或是通过呼吸道进入到人体后，均会导致中毒事件的发生[1]。目前所应用的大量液相色谱-串联质谱法检测中，并未对净化处理进行设置，因此导致检测结果受到严重影响。本次研究就通过对样品处理方式进行优化，将GPC净化系统进行引入，并通过对三类食品进行抽检，探讨食品碱性嫩黄O含量测定采取超高效液相色谱-串联质谱法的效果。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 本次研究所应用的样品均购自农贸市场，均为豆制品，包括豆腐、腐竹以及豆皮。检测所应用的仪器为上海诺普林公司生产的DHK500型液相色谱串联四级杆质谱仪，电子天平、旋转蒸发仪、离心机以及凝胶色谱仪。所应用的试剂包括甲酸、甲醇、乙酸乙酯、环己烷，同时水为超纯水。定溶液为0.1%甲酸甲醇溶液以及0.1%甲酸水溶液，二者比例为70∶30。标准物质为碱性嫩黄O标准物质。

1.2 检测方法

1.2.1 色谱条件 检测所应用的色谱柱为Ecipse-C18，3.5μm，柱温控制为30℃；所应用的流动相材料及配比为：0.1%甲酸甲醇溶液以及0.1%甲酸水溶液，二者之间的比例为70∶30，进样量控制为10μL。在0min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为30%，0.1%甲酸甲醇溶液为70%；在3min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为30%，0.1%甲酸甲醇溶液为70%；在3.5min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为90%，0.1%甲酸甲醇溶液为10%；在5.5min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为90%，0.1%甲酸甲醇溶液为10%；在6min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为30%，0.1%甲酸甲醇溶液为70%；在8min时，流速控制为0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液为30%，0.1%甲酸甲醇溶液为70%。

附表 碱性嫩黄O的回收率和精密度试验结果

1.2.2 质谱条件 应用电喷雾离子源，实施正离子扫描以及多反应监测，电喷雾电压控制为4000V，雾化器压力控制为10L/min，离子源温度控制为350℃。

1.2.3 配置标准使用液 对碱性嫩黄O标准物质进行准确称量，采用定溶液对其开展配置，得到标准储备溶液，该溶液的浓度为100μg/mL。在对该溶液进行使用前，根据具体的需求应用定溶液对标准使用液进行配置，分别为2.50ng/mL、5.00ng/mL、10.00ng/mL、20.00ng/mL、50.00ng/mL以及100ng/mL。

1.2.4 处理样品 首先对样品进行提取，准确称量样品200g，将样品碾碎，然后准确称量1.00g样品，将其放置到10mL离心管内，采用（1+1）乙酸乙酯-环己烷加入到离心管内，使样品被充分溶解，然后定容为10.0mL。涡旋1min，然后放入超声机中进行提取，提取时间为10min，以每分钟4000r速度离心，离心时间为5min。

然后对样品实施净化，凝胶色谱条件为：凝胶净化柱，所应用的流动相为1∶1的乙酸乙酯以及环己烷，流速控制为3.5mL/min，5mL定量环，开展20min预淋洗，然后采用凝胶色谱平衡8min，8～18min收集。采集离心后的上清液，采集量为5.0mL，经由GPC柱开展净化处理，将采集的洗脱液旋转至干。然后采用定溶液实施定容，定溶液应用量为1.0mL。过滤后上机测量，过滤膜直径为0.22μm。

1.2.5 计算公式 样品中碱性嫩黄O的含量计算方法为：待测液中碱性嫩黄O的浓度减去空白待测液中碱性嫩黄O的浓度，乘以样品测试样的最后定容体积，再将乘积除以50%样品质量。

2 结果

2.1 定性及定量结果 应用保留时间和响度离子丰度所具备的最大允许偏差来开展定性，相对离子丰度与允许的最大偏差依次是：超过50时为±20；20～50时为±25；10～20时为±30；低于10时为±50。同时将样品和标准溶液加入到检测仪器中，加入量分别为10μL，定量方法为外标法，定量离子应用268.2/147.1定量，定性离子应用268.2/252.1定性。

2.2 检测方法的检出限 通过对检出条件进行优化，确定检测的回归方程为3891.17X-2210.36，相关系数为0.9995，具备较好的重现性，同时具备高灵敏度，仪器所具备的检测最大限度为0.25ng/mL，超高效液相色谱-串联质谱法的检测限度为0.5μg/kg。

2.3 回收率与精密度试验 通过对样品进行随机选择，将其分别加入到标准溶液中，开展加标试验，标准溶液的剂量为1.0mL，浓度为100ng/mL。然后开展6次平行测定，并实施空白试验，对样本中的本底成分进行检测，结果如附表。通过检测结果可知，样本中所具备的本底值存在一定差异，在将空白进行扣除后，样本本身含量为0。回收范围达到77.5%～114.2%，RSD为7.8%～9.5%，提示基质并不会明显影响检测结果，超高效液相色谱-串联质谱法具备较好的重现性，且结果可靠度高。

2.4 检测结果 通过检测结果可知，本次研究所选取的样品中均未检测出碱性嫩黄O。

3 结论

我国相关法律法规中有明确规定，不可在食品中添加碱性嫩黄O。目前实验室在对碱性嫩黄O含量进行检测时，所应用的方法主要包括高效液相色谱法以及高效液相色谱-串联质谱法。本次研究通过采用超高效液相色谱-串联质谱法对食品中的碱性嫩黄O进行检测，在开展检测前，对样品应用GPC实施净化处理，从而可使样品得到有效净化，同时也能够使样品得到富集，并将劳动力进行解放，使检测工作效率明显提升[2][3]。

在对碱性嫩黄O进行检测时，超高效液相色谱-串联质谱法的操作较为简单，具备较高的灵敏度以及准确性，而且可重复性好，超高效液相色谱-串联质谱法检测食品碱性嫩黄O含量的最小检出值为0.5μg/kg；豆腐回收率为78.4%～100.5%，腐竹回收率为87.1%～107.3%，豆皮回收率为92.7%～114.2%，相对标准偏差为7.7%～9.6%，线性相关系数为0.9995，可作为食品中碱性嫩黄O检测的有效方法[4][5][6]。