新生儿溶血3项试验与血型抗体IgG亚型的相关性分析

马印图 陈 莉 张 怡 董书文 杨晓亚 王少文 李莉华

母婴血型不合新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是由于胎儿和孕母之间血型不同而引起的新生儿免疫性溶血性疾病，孕期母亲体内产生了针对胎儿红细胞的血型特异性IgG抗体而导致胎儿红细胞破坏，造成产后新生儿黄疸、贫血，严重者出现高胆红素脑病等后遗症甚至死亡等不良后果。因此，临床上针对此类新生儿应尽早诊断，以利于积极治疗。相关文献报道，由于HLA基因多态性和不同的检测方法之间的差异，母婴血型不合HDN的发生率为30%～60%[1，2]。此外，产后新生儿高胆红素血症的危重程度与孕妇血清中IgG抗体亚型的含量密切相关[3]。目前，临床上主要采用新生儿溶血3项试验结合血液生化检测指标进行HDN诊断，对其危重程度的评估尚缺乏更加有力的试验数据，笔者采用新生儿溶血3项试验与微柱凝胶技术检测血型抗体IgG亚型的试验结果进行比较，评价两种方法的相关性以及IgG亚型检测的临床应用价值，为早期精确诊断和精准干预治疗母婴血型不合HDN提供理论指导，现将检测结果报道如下。

资料与方法

1.病例资料：2018年7月～2019年7月在笔者医院分娩的65例产前血型抗体高效价的孕妇进行产后新生儿血型血清学检测，其中ABO系统56例，孕妇血清中免疫性抗A(B)效价≥512, Rh阴性孕妇9例，IgG抗D效价≥32，孕妇年龄22～41岁，平均年龄28.5岁，非近亲结婚，无输血史、过敏史和血液系统病史，分娩后的新生儿送病房进行溶血相关检测和评估、治疗。

2.试剂与方法：2-巯基乙醇(2-Me)、血型试剂和标准红细胞悬液由上海血液生物医药公司提供，凝胶血型卡、抗筛卡及亚型抗体检测卡、专用离心机和孵育器由江苏力博医药生物技术股份有限公司提供。红细胞血型鉴定、抗体筛选及效价测定、溶血3项试验(直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验)均严格按照文献[4]进行，HDN的临床诊断符合规范标准[5]。如果母子之间ABO或Rh血型不同，需要进一步做抗体筛选和鉴定试验，排除不规则抗体的存在，溶血3项试验的结果作为诊断HDN的依据。IgG亚型检测方法采用文献报道的微柱凝胶技术(microcolum gel technology assay,MGTA),以出现“2+”凝集的最高稀释度为IgG抗体亚型含量的结果[6]。

3.统计学方法：采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行统计分析。孕妇血型抗体效价与HDN发生率之间的关系采用χ2检验，新生儿血型抗体IgG亚型含量检测结果以效价的方式表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.孕妇血型抗体IgG效价与HDN的相关性：对65例高效价孕妇产后新生儿进行了血型鉴定，其中母子血型不合的新生儿有60例，5例新生儿ABO血型与母亲相同，51例ABO系统不合的新生儿中有31例确诊为HDN，发生率为60.78%，Rh系统9例，其中有7例确诊，发生率为77.78%，新生儿HDN发生率随孕母体内IgG抗体效价水平升高而上升，差异有统计学意义(P<0.05), 27例孕妇血型抗体效价同样升高，但产后新生儿未出现HDN症状，作为对照组，结果见表1。

表1 60例母子血型不合孕妇产后HDN的发病情况(发病例数/总例数)

2.新生儿溶血3项试验与HDN的相关性：新生儿溶血3项试验对HDN的诊断具有确诊作用，本回顾性研究中，60例分娩后母婴血型不合的新生儿24h内进行了血液生化指标和血常规检测，在溶血病3项试验中，凝集反应以阴性(-)和阳性(+)表示，其中抗体释放试验最具诊断价值，根据患儿的临床表现和血生化、溶血3项试验的检测结果，共计有38例母子血型不合高效价孕产妇分娩的新生儿确诊为HDN，确诊率为63.33%。对于溶血3项试验均表现出强阳性的患儿提示溶血严重，高胆红素血症临床病情进展快，必要时需要换血治疗，溶血3项试验结果与临床HDN发病情况比较详见表2。

表2 60例新生儿溶血3项试验结果与HDN发病情况[发病例数/总例数(%)]

3.新生儿IgG亚型含量与HDN的相关性：对60例母婴血型不合新生儿血清中总IgG和各IgG亚型抗体含量进行检测，分娩后的新生儿有31例发生了ABO系统HDN,7例Rh系统HDN，血清总IgG含量均值为9.68±0.73g/L，27例未出现HDN症状的对照组新生儿血清IgG含量均值为4.97±0.55g/L，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，新生儿体内IgG抗体亚型高效价组HDN发生率为63.33%(38/60)，与正常新生儿发生率比较，差异有统计学意义(P<0.01)，结果见表3。

表3 新生儿血清总IgG以及各亚型检测结果比较

4.新生儿溶血3项试验与血型抗体IgG亚型含量相关性：在38例经溶血3项试验确诊为HDN的患儿中有23例血清中检出IgG1和IgG2的含量升高, 15例检出IgG1和IgG3的含量升高,均以IgG1升高为主,患儿及其母亲血清中各IgG亚型的含量比较，差异无统计学意义(P>0.05),新生儿红细胞上结合的IgG亚型抗体越多，高胆红素血症的发病越早，其血清中IgG1和IgG3的含量,尤其是IgG1的含量与血型不合引起的HDN存在较大的相关性, 其中换血治疗的12例(ABO 7例、Rh 5例)重度高胆红素血症新生儿体内IgG3亚型含量明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，结果见表4。

表4 新生儿溶血3项试验与体内IgG亚型含量的比较

讨 论

早期诊断母婴血型不合HDN对预防和治疗高胆红素脑病的发生具有重要意义，新生儿血清胆红素水平及溶血3项试验为临床诊断HDN提供了有力依据[7，8]。其中直接抗球蛋白试验(DAT)又称Coomb′s试验是临床诊断自身免疫性溶血性疾病的重要依据，目的是检测新生儿红细胞上有无不完全抗体以及结合抗体数量多少的指标，反映孕期胎儿在母体内的致敏情况；游离抗体试验是检测游离于新生儿血清中的不规则抗体情况，检测结果有利于评估溶血的持续性和换血治疗效果；抗体释放试验是判断新生儿红细胞被IgG抗体致敏最敏感和准确的方法，对HDN具有确诊价值。在新生儿溶血3项试验中，单项DAT试验阳性而发生高胆红素血症的概率低于DAT和抗体释放试验两项均阳性的新生儿，而新生儿溶血3项试验均阳性与高胆红素血症的发生具有显著一致性[9]。然而，笔者在临床实践中发现，有些孕产妇产前血型IgG抗体效价很高，产后新生儿溶血3项试验结果均呈阳性，但临床溶血症状并不严重，进一步研究发现与新生儿体内IgG亚型的含量有密切关系。

母婴血型不合HDN的发病机制主要是胎儿红细胞表面的血型抗原与母亲产生的抗体反应而引起的红细胞破坏，理论上，胎儿红细胞上结合的抗体越多，溶血破坏的越多，新生儿出现高胆红素血症的病程越短、症状越重。实际上，红细胞溶血的轻重与血型抗体效价、孕母免疫状态、胎儿营养状况和血型物质含量等多种因素有关[10,11]。相关研究显示，HDN的危重程度与IgG亚型关系密切[12，13]。IgG抗体在体内含量最多，也是唯一可以通过胎盘屏障的免疫球蛋白，在血清中的浓度高低依次为IgG1>IgG2>IgG3>IgG4，激活补体的能力IgG1>IgG3>IgG2>IgG4。国内文献报道母体内IgG1和IgG3的含量,特别是IgG1的含量与ABO系统的HDN密切相关[14，15]。国外研究显示，IgG1是Rh系统HDN的主要致病抗体,但病情的严重程度和进展与IgG3有直接关系，提示在分析新生儿溶血试验结果的同时，如果检测到新生儿体内IgG1含量也升高，则新生儿受累的可能性较大，若IgG3同步升高，则提示新生儿病情严重、进展快，换血的概率大大提高，如果仅是IgG2和(或)IgG4升高，则新生儿病情轻微，可能不需要过多干预治疗[16]。

基于以上回顾性分析，本研究结果证实了新生儿溶血3项试验与体内血型抗体IgG亚型具有一定的相关性。前者对高胆红素血症具有诊断价值，但严重程度与体内IgG亚型，特别是IgG1和IgG3亚型关系密切。在临床实践中，有必要针对溶血3项试验阳性的新生儿进一步检测IgG亚型,有助于对新生儿发生高胆红素血症的概率和危重程度进行精确判断，为临床提供参考，二者联合检测对于早期精准治疗母婴血型不合HDN具有重要意义，值得临床实验室推广应用。