EGFR与PD-1、PD-L1在子宫内膜癌中的表达研究

汪 锋，胡玉崇，贺 凤，王 靖，钗丽干,苏依图，贺慧杰，武 慧，张 帆，郭 彦，于 虹

(内蒙古自治区人民医院 1.病理科；2.妇产科；3.院长办公室，内蒙古 呼和浩特010017)

子宫内膜癌(EC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，每年新增诊断约有200，000例，是全球妇女发病和死亡的重要原因[1,2]。早期诊断是EC治疗的关键，晚期患者5年生存率低于20%，早期患者5年生存率高于90%[3]。为了患者能得到早期诊断及治疗，需要发现一些敏感的生物标志物。

越来越多的证据表明，肿瘤发生常在肿瘤微环境(TME)中引起，TME由细胞外基质、血管或淋巴管、成纤维细胞、免疫细胞和炎症细胞组成[4]。程序性死亡受体1 (PD-1)在肿瘤免疫逃避中发挥了重要作用，是表达在T细胞、自然杀伤细胞、单核细胞和B细胞上的免疫检查点受体。程序性死亡配体1 (PD-L1)与PD-1相互作用抑制T细胞功能，诱导肿瘤免疫逃避[5]。Cai[6]等发现EGFR联合其他指标可作为子宫内膜癌早期诊断、预测复发和评价预后的指标。本文就EGFR与PD-1、PD-L1在子宫内膜癌中表达情况及其相关性进行研究。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2012年12月至2019年10月在内蒙古自治区人民医院完成手术的103例子宫内膜癌标本及26例诊刮正常子宫内膜标本，标本均经10%福尔马林固定和石蜡包埋。年龄32-81岁，中位年龄51岁。参照2014年第4版《WHO女性生殖器官肿瘤分类》诊断标准对病例进行回顾性分析。

1.2 方法

EGFR、PD-1、PD-L1抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司，免疫组化染色采用链霉菌素-生物素(SP)免疫组织化学染色方法。

1.3 判断标准

EGFR阳性染色为上皮细胞膜及细胞质上棕黄色着色，显微镜下选择10个具有代表性的高倍视野，分别计数100个细胞，计算阳性染色细胞百分率，<5%为阴性，≥5%为阳性。

PD-1、PD-L1阳性染色为肿瘤浸润性免疫细胞的细胞膜或细胞质中呈棕黄色着色，镜下选择10个具有代表性的高倍视野，分别计数100个细胞，如Allred等人[7]所述，采用基于比例评分和强度评分的两分系统。比例评分为阳性染色比例：(0)无着色;(1)<1/100着色;(2)从1/100-1/10着色;(3)1/10-1/3着色;(4)1/3-2/3着色;(5)>2/3着色。强度评分表示阳性染色细胞的平均染色强度:(0)无着色;(1)弱着色;(2)中等着色;(3)强着色。总分(Allred scores)为每例的比例分数和强度分数的总和。Allred评分为≥1，则为阳性;如果Allred评分为0，则为阴性。

本课题HE切片及免疫组化切片均由两位副高级以上病理医师一起判读。

1.4 统计学分析

统计分析使用SPSS 13.0版本。本文分类计数资料显著性检验，采用四格表χ2检验。EGFR得分与PD-1或PD-L1得分的相关性,采用Spearman相关分析。P值<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达关系

在正常子宫内膜样本中PD-1阳性表达率3.8%，而子宫内膜癌中PD-1染色阳性率占65.0%(P值<0.001)。共有34.6%的正常子宫内膜样本PD-L1染色阳性，52.4%的子宫内膜癌中 PD-L1染色阳性(P=0.104)。另外，23.1%的正常子宫内膜样本EGFR染色阳性，76.7%的子宫内膜癌 EGFR染色阳性(P<0.001)。其中PD1与EGFR在子宫内膜癌和正常子宫内膜病例中表达具有显著性差异(表1)。

2.2 PD-1、PD-L1和EGFR表达与预后高危因素的关系分析

在103例子宫内膜癌中PD-1阳性表达67例(65.0%)。蛋白的表达与预后的高危因素组织学分级(P=0.001)、浸润深度(P=0.016)、肿瘤最大径(P=0.043)相关，而与年龄(P=0.160)、淋巴间隙受侵(P=0.509)、宫颈黏膜腺体受侵(P=0.849)无显著相关性。PD-L1阳性表达54例(52.4%)，与组织学分级(P=0.025)有显著相关性。79例EGFR阳性表达，与组织学分级(P=0.002)、浸润深度(P=0.032)、肿瘤最大径(P=0.003)及淋巴间隙受侵(P=0.019)相关(表2)。

表1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宫内膜癌和正常子宫内膜病例中表达情况

表2 子宫内膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表达和预后高危因素的关系

2.3 子宫内膜癌组织中EGFR与PD-1、PD-L1表达相关性

在子宫内膜癌组织中，EGFR阳性表达与PD-1、PD-L1阴性表达相关性统计分析显示r值分别为0.260及0.295，P值均<0.05，表明EGFR表达与PD-1、PD-L1表达具有显著负相关性(表3)。

表3 子宫内膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表达相关性研究

3 讨论

本研究对NCCN[8]指南提出的子宫内膜癌高危因素与EGFR、PD-1、PD-L1表达的关系进行分析，以显示三者对EC早期诊断、预测复发和评价预后意义。

我们的研究中EGFR表达与子宫内膜癌高危因素组织学分级、浸润深度、肿瘤最大径及淋巴间隙受侵相关。Cai[6]等发现在子宫内膜癌中，EGFR阳性表达与FIGO分期、分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移相关，与本研究相一致。

我们的研究中在正常子宫内膜样本中PD-1阳性表达率3.8%，而子宫内膜癌中PD-1染色阳性率达65.0%，差别具有统计学意义。MO[9]等发现61.3%的EC中PD-1染色阳性，几乎只在肿瘤浸润性免疫细胞中发现，在肿瘤细胞和正常子宫内膜组织中均未见表达，PD-1表达在中、低分化肿瘤组织比高分化肿瘤更常见，与本研究相一致。本研究中PD-1表达与预后的高危因素肿瘤浸润深度、肿瘤最大径相关，而MO等研究中PD-1在不同临床分期的患者中表达无差异，可能为所研究的样本群体不同所致。

我们研究中PD-L1在54例(52.4%)子宫内膜癌组织中阳性表达，与组织学分级有显著相关性。MO[9]等研究75例子宫内膜癌中，中低分化肿瘤组织中73.7%病例免疫细胞表达PD-L1,明显高于高分化肿瘤，与本研究的趋势相一致。

本研究进一步分析子宫内膜癌病例肿瘤组织中，EGFR与PD-1、PD-L1表达的相关性。李向敏[10]等研究发现非小细胞肺癌患者EGFR突变与肿瘤的微环境存在密切相关，尤其是和肿瘤中PD-L1的低表达相关。2013年，癌症基因组图谱将子宫内膜癌分为POLE超突变、MSI高突变、低拷贝内膜样和高拷贝浆液样4种亚型[11]。文献报道PD-L1在子宫内膜癌MMR缺陷型表达率更高[12,13]。本研究中发现EGFR表达与PD-1、PD-L1表达具有显著负相关性，提示EGFR与PD-1、PD-L1蛋白表达可能与子宫内膜癌不同亚型相关，有待进一步研究证实。

综上所述，EGFR、PD-1及PD-L1表达与子宫内膜癌的预后高危因素具有明显的关系，有望成为EC早期诊断、预测复发和评价预后的生物标志物。