夏蛎金消颗粒水提工艺的优化及制粒研究*

河北中医学院研究生学院

胡家玉 李国川△ 马 盼 闫娇娇 范焕芳△△(石家庄 050091)

提要 目的：确定夏蛎金消颗粒剂的制备工艺。方法：采用L9(34)正交试验法，以出干膏率和橙皮苷含量为指标并取其权重后综合评分，考察提取次数、提取时间、加水倍量3个因素对提取工艺的影响，用高效液相色谱法(HPLC)测定橙皮苷含量; 采用醇沉法纯化夏蛎金消颗粒，以橙皮苷转移率和纯度为指标，单因素试验考察其醇沉条件。以成型率、颗粒性状为指标筛选成型工艺。结果：最佳提取工艺为：煎煮2次，2 h/次，加8倍水。其醇沉条件为药液含乙醇体积分数60%，相对密度1.12( 80℃)。干膏粉和糊精按 1∶2 混合均匀后以60%乙醇湿润剂制成颗粒。结论：优选的提取和制备工艺简单且合理可行，可为夏蛎金消颗粒的生产以及进一步研究提供技术支持。

夏蛎金消方是在《太平惠民和剂局方》二陈汤的基础上化裁而成，由清半夏、川贝母、陈皮等13味药组成，具有化痰解毒、益气养阴功效，临床上用于治疗痰毒互结、气阴两虚型肺癌。本研究对夏蛎金消颗粒水提工艺进行优化，并明确制粒方法，使其质量可控、服用方便、更能融入于现代生活方式。[1]

1 实验材料

1.1 实验用药 夏蛎金消方由清半夏、川贝母、陈皮、牡蛎、茯苓、石见穿、黄芪、沙参、当归、蜜紫苑、款冬花、猫爪草、甘草13味中药饮片组成，为河北中医学院第一附属医院药剂科提供。

1.2 试剂 水为纯净水；乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯；其他试剂为分析纯；橙皮苷对照样品(中国科学院成都生物研究所，批号：MUST-18032502)；甜菊糖甙(曲阜香州甜菊制品有限责任公司)。

1.3 仪器 98-1-B型电子调温电热(天津市泰斯特仪器有限公司)，SHZ-D(III)循环水式真空泵，KQ2200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，YP2001N电子天平(SHANGPING)，离心机，粉碎机，干燥仪，高效液相色谱仪，色谱柱(5 μm，4.6×200 mm)，喷雾干燥器(山东天力干燥设备有限公司)，分析天平(MSE125P-100-DU德国 Sartorius)。

2 方法与结果

2.1 提取工艺

2.1.1 药材吸水量的考察：按处方比例称取清半夏、川贝母、陈皮、牡蛎、茯苓、石见穿、蜜紫菀、蜜款冬花、黄芪、沙参、当归、猫爪草、生甘草，总计175 g，加水1 750 mL(10倍水量)浸泡，观察药材渗透情况，每隔0.5 h称重湿药材1次，2 h后所称药材重量不变，以公式药材吸水率=(药材湿重-药材干重)/药材干重[2]计算出方中药材的吸水率为86%。

2.1.2 L9(34)正交试验因素水平：通过参阅文献，选择提取次数(A)、提取时间(B)、加水倍数(C)3个因素, 另设D(空白列)为因素4，用来观察随机误差的大小。每个因素设定3个水平。详见表1。

2.2 提取工艺考察指标及评价方法 夏蛎金消方以半夏、石见穿为君药，陈皮、牡蛎、茯苓等为臣药，《日华子本草》记载陈皮“可破癥瘕痃癖”，《药典》述其功效为理气健脾，燥湿化痰。现代药理研究表示陈皮中主要的化学成分为橙皮苷(hesperidin)等黄酮类化合物。[3]陆红玲等[4]通过实验证明橙皮苷可以诱导或促进非小细胞肺癌A549/DDP 细胞凋亡，樊佳新等[5]也证实橙皮苷可通过干扰 PI3K-Akt 信号通路，来影响肺癌细胞蛋白合成，从而体现其明显的抗肿瘤活性。故将橙皮苷含量作为主要考察指标，占权重70%；出干膏率做为次要考察指标，占权重30%。

按处方比例称取18份复方药材，每份175 g，分9组，每组平行工艺2份，按照表1进行实验，在药材吸水基础上加水煎煮提取，水蒸气蒸馏法收集挥发油备用。将所提取滤液按分组合在一起浓缩，在浓缩的同时加入2 g甜菊糖甙以达到调味目的，[6]浓缩后喷雾干燥，使之成干浸膏后粉碎，最后将干膏粉进行称重，计算出干膏率。

3个因素对出干膏率及橙皮苷含量影响程度的顺序为A>B>C，提取次数 A影响最大，提取时间B次之，加水倍数C影响不显著，最佳组合是 A3B2C2,根据正交实验结果，提取时间选择最长，但煎煮2次的评分值与煎煮3次的评分值差异不显著，加8倍水与加10倍水的评分值差异不大，因此可煎煮2次，用8倍水。综合考虑，最终选择A2B3C2，最优提取工艺为：煎煮2次、每次2 h、8倍水。既考虑了生产效益、出干膏率，又兼顾了提取物中有效成分的含量。详见表2～表4。

表2 水提取工艺L9(34)正交实验

表3 出干膏率的正交试验结果方差分析

表4 橙皮苷含量的正交试验结果方差分析

2.3 提取工艺验证实验 为验证提取工艺的稳定性，按上述正交试验所优化的提取工艺重复提取3次，测定提取液中的橙皮苷含量及出干膏率。结果提示，按优化的水提工艺所得药液有效成分及出干膏率接近，比较稳定，具有可操作性，详见表5。

表5 提取工艺验证

2.4 醇沉浓度及相对密度 按处方10倍比例称取药材共1 750 g，按正交试验所选最佳工艺方法进行提取，浓缩至相对密度1.11～1.15(60℃)，分3份，分别加入乙醇(边加边搅拌)至乙醇体积含量为55%、60%、65%，静置24 h，取上清液减压回收乙醇，依据上述色谱条件进行含量测定，测得橙皮苷含量分别为16.7、18.4 、17.6 mg/g，喷雾干燥后，将所得干膏粉称重，计算出干膏率分别为 17.2% 、16.5%、15.7%。综合考虑，用60%浓度的乙醇沉淀，橙皮苷含量最大、效果最佳。经醇沉后，出干膏率与水提取后的平均值25%比较，平均转移率 > 60%。

按处方10倍比列称取药材共1 750 g，按正交试验所选最佳工艺方法进行提取，分3份，每份浓缩至相对密度：1.06～1.10、1.11～1.15、1.16～1.20。醇沉至乙醇浓度为60%。静置24 h，取上清液减压回收乙醇，然后进行橙皮苷含量测定，测得橙皮苷含量分别为18.1、18.5、17.6 mg/g，喷雾干燥后，出干膏率分别为16.8%、16.1%、15.5%。综合考虑，醇沉相对密度应控制在1.11～1.15(60℃)。

2.5 制剂工艺

2.5.1 辅料的选择：根据经验和文献报道，颗粒剂的辅料多选择蔗糖、淀粉、糊精，本实验选用糊精作为辅料，是因为蔗糖的吸湿性不利于有糖尿病等基础疾病患者的健康[7]，而且糊精较淀粉黏性小，可提高颗粒成型性。取干膏粉称重后分3份，按表5加入不同重量的糊精，混合均匀后制粒来确定辅料用量。以制粒过程中黏度、颗粒形状及成型率以及颗粒溶解度为指标，确定辅料用量为干膏粉∶糊精= 1∶2。详见表6。

表6 干膏粉与糊精的比例考察

2.5.2 乙醇润湿剂浓度：进行预试验，以干膏粉∶糊精= 1∶2比例取3份，干膏粉每份为1付处方量，分别混合均匀后滴入3个浓度乙醇制软材，以制粒过程中的现象为指标，对乙醇浓度进行考察，得出乙醇润湿剂浓度80%时所制颗粒性状最佳，但从临床用药安全性出发，应尽量降低乙醇浓度，综合考虑选用乙醇润湿剂浓度为60%。详见表7。

表7 乙醇浓度的考察

2.5.3 湿法制粒：按配方比例取饮片药材，按上述工艺提取，制备干膏。根据预实验，取干膏粉与糊精适量，以1∶2比例混合均匀，用浓度60%乙醇为润湿剂制备软材，制成“握之成团、触之即散”[8]的软材，然后用16目筛进行制粒，制好的湿颗粒干燥后整型，喷入水蒸汽蒸馏法提取所得挥发油分装、密封即得整齐颗粒。

3 讨论

现代研究证实二陈汤可作为治疗肺癌的基础方[9]，其治疗痰湿证的咳嗽、喘证疗效显著[10]，《丹溪心法附余》方论著此方“燥湿渗湿则不生痰，利气降气则痰消解。”范焕芳教授认为肺癌的发生与痰、毒、虚密切相关，其主要病机为痰毒互结，气阴两虚，结合临床在二陈汤的基础上，加用解毒、益气养阴之品，创立夏蛎金消方，方中以清半夏、石见穿为君药化痰散结、清热解毒。陈皮、茯苓助清半夏利湿化痰，兼理气健脾；川贝母、蜜紫菀、蜜款冬花润肺化痰止咳；牡蛎滋阴潜阳，软坚散结；黄芪补气养血；沙参养阴清肺，益胃生津；猫爪草清热解毒散结共为臣药，既助君药化痰散结解毒，又兼具益气养阴之效。当归佐助黄芪补益气血为佐药。甘草为使药调和药性。诸药合用以达化痰解毒、益气养阴之功效。

本方在水提取的过程中，饮片中多糖及脂溶性物质等随有效成分一起溶出，使浸膏黏性过大，而中药原粉黏性相对较小，为了降低颗粒黏性，尝试选择将粉性较大的川贝母及清半夏粉碎代替辅料来提高载药量，但实际操作证明，此法并不能有效降低颗粒的黏性。本试验采用的处理方法为水提醇沉法，药液经浓缩后醇沉，然后将药液喷雾干燥后再湿法制粒。经试验验证醇沉时乙醇浓度为60%为最佳浓度，此时橙皮苷测得量为最大，有效成分保留效果最佳。醇沉一方面纯化制剂、保证其质量和稳定性[11]，另一方面适当降低了干膏得率，可在维持活性成分水平的同时减小服药剂量；将浸膏喷雾干燥后用乙醇润湿剂快速制粒也降低了颗粒的黏性。

本实验对夏蛎金消颗粒剂的制备工艺进行了研究，通过正交试验设计，综合考虑各种因素及实际条件，确定煎煮2次、每次2 h、8倍水为最佳提取工艺。并对醇沉浓度及相对密度进行优选，确定60%乙醇及1.11～1.15( 80℃)的相对密度沉淀效果最佳。湿法制粒所得颗粒耐磨、美观且成型率高[12]，因此夏蛎金消颗粒剂的制备采用传统湿法制粒。从辅料的无糖添加角度出发，用糊精做为辅料，并进行不同比例的比较，当干膏粉∶糊精= 1∶2时，所得颗粒成型度高。也应重视乙醇润湿剂浓度的选择，浓度过低时，颗粒黏性大，不易过筛，浓度过高时，颗粒太松散，而且会增加颗粒的醇含量，因此本实验选用60%的乙醇作为润湿剂，制得整齐颗粒。综合以上研究，本实验工艺稳定且简便可行，可为夏蛎金消颗粒的进一步研究提供实验依据。