高效液相色谱法测定果汁饮料中安赛蜜

王少伟　张金秋　戚繁　徐春祥

摘 要：建立了果汁饮料中安赛蜜的高效液相色谱测定方法。采用C18色谱柱，以20 mmol·L-1乙酸铵与甲醇（98∶2）为流动相，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，二极管阵列检测器，检测波长214 nm。结果表明：该方法安赛蜜回归方程线性关系良好，相对标准偏差<3.2%（n=6），回收率在97.5%～99.1%。该方法简便快速，适用于果汁饮料中安赛蜜的检测。

关键词：果汁饮料;安赛蜜;高效液相色谱法

Abstract：The analysis is performed on a C18 column using 20 mmol·L-1 sodium acetate solution and methanol as the elution. The flow rate is 1.0 mL·min-1， the column temperature is 30 ℃. The detector is DAD， the detection wavelength are at 214 nm The results show that a good linear relationship. The RSD is below 3.2% （n=6）， the average recovery is 97.5%～99.1%.The method is simple， rapid， repeatable and which could be applied for the analysis of additives in Fruit juice beverage.

Key words：Fruit juice beverage; Acesulfame; High performance liquid chromatography

中图分类号：TS202.3

果汁饮料是由原果汁或浓缩果汁加糖、酸等调配成的风味饮品[1]。近年来，随着消费者消费能力的提高，消费者对果汁饮品的营养价值与安全性更加重视。我国果汁饮品生产工艺多采用安赛蜜作为甜味剂[2]。安赛蜜是一种人工合成甜味剂，具有在人体内不代谢、不吸收、对热和酸稳定性好等特点。但是过量食用含合成甜味剂的食品以及含合成甜味剂超标的食品会对人体的肝脏和神经系统造成危害[3-6]。研究果汁饮料中安赛蜜的测定方法，对提高我国果汁饮料质量有着重要的意义。

目前我国果汁饮料中安赛蜜的检测依据是

GB/T 5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》。日常检验中发现，标准中前处理方法对果汁中色素和蛋白质不能有效进行去除。標准规定的流动相配制过于复杂，不适用于市面上主流高效液相色谱仪的操作。本研究针对果汁饮料基质采用蛋白沉淀剂+C18固相萃取前处理法，以甲醇-乙酸铵作为流动相，紫外可变波长检测，方法快速准确，检出限能达到国家标准要求。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

（1）仪器。高效液相色谱仪，电子天平，超纯水仪。

（2）试剂。甲醇（HPLC，TEDIA），20 mmol·L-1乙酸铵溶液，亚铁氰化钾溶液，乙酸锌溶液。

1.2 标准溶液配制

精密称取安赛蜜标准品适量于10 mL容量瓶中，用水配制1 mg·mL-1标准储备溶液。再用水稀释成

0.001 mg·mL-1、0.005 mg·mL-1、0.010 mg·mL-1、

0.020 mg·mL-1、0.050 mg·mL-1、0.100 mg·mL-1和

0.200 mg·mL-1系列标准工作溶液，浓度由低到高进样，以待测物质峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。

1.3 样品处理

（1）方法1（国标方法）。吸取2 g样品，加水约20 mL混匀后，离心15 min（8 000 r·min-1），上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱。收集洗脱液25 mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。

（2）方法2。吸取2 g样品于50 mL 离心管中，加水15 mL，50 ℃超声30 min。加入2 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2 mL乙酸锌溶液，摇匀，在

8 000 r·min-1条件下，离心5 min。将上清液完全转移至C18固相萃取小柱中，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱。收集洗脱液25 mL，混匀后，超声脱气，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

1.4 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（symmetry shield RP18， 5μm，4.6 mm×250 mm）;流动相为20 mmol·L-1乙酸铵∶甲醇=98∶2;流速1.0 mL·min-1;进样量5 μL;柱温30 ℃;检测波长214 nm。

2 结果与分析

2.1 样品前处理

方法1为GB/T 5009.140-2003规定的前处理方法。采用该前处理方法，大批量进样时，会出现色谱柱柱效降低，拖尾严重等问题。原因可能是该方法未能有效去除果汁饮料中的蛋白质与色素等大分子物质。这些物质进入色谱柱后，会堵塞柱头，影响色谱柱寿命。本实验采用方法2前处理方式，先用蛋白沉淀剂沉淀果汁饮料中蛋白质，再经过C18小柱去除样液中色素及大分子物质。经试验比较两种前处理方法样品中安赛蜜测定结果无明显差异（见表1），检出量结果偏差1.8%。样品经方法2前处理后，样液杂质较少，实验耗材色谱柱寿命延长。

2.2 流动相及洗脱条件的优化

GB 5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》中规定的流动相为0.02 mol·L-1硫酸铵（740～800）+甲醇（170～150）+乙腈（90～50）+10%硫酸（1%）。实验中发现，该流动相配制较复杂，强酸性物质（硫酸）会严重损伤色谱柱。因此，本实验采用流动相为20 mmol·L-1乙酸铵（A相）、甲醇（B相）。

研究中分别比较了流动相比例A∶B=90∶10与A∶B=98∶2两种比例条件下，果汁饮料中安赛蜜的分离效果。图1、图2为A∶B=90∶10时标准品与样品的色谱图，安赛蜜在A∶B=90∶10条件下，出峰时间为5.78 min左右。

图3、图4为A∶B=90∶10时标准品与样品的光谱图，图4表明：A∶B=90∶10时，果汁饮料目标峰在202.07 nm处有较大吸收，与图3安赛蜜标准品光谱图有显著差异。分析可能是色谱峰中包含其他的杂质，存在共溶出现象。图5为流动相比例A∶B=98∶2时样品色谱图，结果表明，在流动相A∶B=98∶2时，果汁饮料中安赛蜜与干扰物分离度较好。因此，流动相选用20 mmol·L-1乙酸铵（98%）、甲醇（2%）。

2.3 标准曲线及线性范围

标准曲线及最低检出限标准系列物质按仪器设定条件进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到相应的线性回归方程，同时以3倍信噪比计算安赛蜜的检出限，具体结果见表2，安赛蜜在1～200 μg·mL-1浓度内呈现很好的线性关系，相关系数为0.999 8。

2.4 准确度试验

以市场上常见不含安赛蜜的果汁饮料样品为代表样品，分别按高、中、低3个浓度添加安賽蜜标准品，按优化的色谱条件进行平行6次分析，结果见表3。

3 结论

本文建立了一种测定果汁饮料中安赛蜜的高效液相法。样品前处理采用亚铁氰化钾和乙酸锌作为蛋白沉淀剂，再通过C18小柱去除果汁饮料中色素以及大分子杂质，回收率高。方法耗时短，操作简单，适用于大量样品的快速检验，可作为国家标准方法的补充进行推广。

参考文献：

[1]孙立臻，周禹君，尹丽丽，等.高效液相色谱法同时测定饮料中10种天然甜味剂[J].食品工业，2019，40（10）：344-348.

[2]邓迎春，徐晓楠，郭旭光，等.高效液相色谱法同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）、脱氢乙酸（钠）和糖精钠[J].中国卫生检验杂志，2020，30（8）：918-921.

[3]王智玮，李 莉.超高效液相色谱-质谱/质谱法测定葡萄酒中安赛蜜含量的不确定度评估[J].食品安全导刊，2020（6）：115-116.

[4]戚 繁，王少伟，颜春荣，等.高效液相色谱法同时测定甜油中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠与脱氢乙酸[J].分析检测，2018（20）：101-104.

[5]陈 健，林 真，陈 驰，等.高效液相色谱法同时检测糕点中几种天然甜味剂的探索研究[J].2012（3）：213-217.

[6]李花觉.超高效液相色谱法检测饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠、咖啡因、安赛蜜[J].2018（21）：137-139.

作者简介：王少伟（1987—），男，硕士，工程师;研究方向为食品科学。