10种散装感冒凉茶体外对甲型H1N1流感病毒抑制作用的研究

巫结冰　何炳联　冯文希　陈伟东　梁玉萍　张慧红

【摘 要】目的：探讨10种散装感冒凉茶对甲型H1N1流感病毒的体外抑制作用。采用CCK-8法先测定感冒凉茶对MDCK细胞的毒性作用。再分别通过预防给药、治疗给药、药液和病毒直接混合杀灭三种途径进行体外试验，在450nm波长下检测各对应OD值并计算其对甲型H1N1流感病毒的抑制率。结果显示10种感冒凉茶能抑制甲型H1N1流感病毒的生长，预防效果和治疗效果相当，两者无差异。凉茶自身含微量细胞毒性。

【关键词】 感冒凉茶; 甲型H1N1流感病毒; 抑制作用;CCK-8

【中图分类号】R511.7【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2020）13--02

1 材料

随机选取10家散装感冒凉茶经除菌处理;经广东省CDC复检符合甲型H1N1自分离毒株。DMEM、PBS、胎牛血清、0.5%胰酶、0.25胰酶等购自美国GIBCO公司;CCK-8购自美国MCE公司;酶标仪RT6100购自深圳雷杜公司。

2 方法

2.1H1N1 TCID50测定80%成片MDCK细胞经PBS洗涤2遍。用病毒维持液将甲型H1N1流感病毒原液按原液、10-0.5～10-7进行稀释后接种细胞，每孔接种100?l，每个稀释度接种4孔，并设对照孔。5%CO235℃培养72h，观察各孔CPE，利用Reed-Muench法计算出病毒的TCID50。

2.210种感冒凉茶TC50与TC0测定80%成片细胞洗涤后。用维持液将10种感冒凉茶各自按原液、2-1～2-7进行稀释后接种细胞，每孔接种100?l，每种感冒凉茶每个稀释度接种4孔，同时设照孔。5%CO235℃培养72h后观察CPE。吸走药液，PBS洗涤细胞2遍，每孔加入含10%的CCK-8显色液100?l，35℃显色2h后用自动酶标仪450nm波长下测出各孔OD值。利用Reed-Muench法计算出TC50和TC0各自所对应的稀释倍数。

2.3 体外给药试验以2.2计算出的H1N1病毒TCID50配制含100TCID50浓度的病毒液备用。按2.2得到的10种感冒凉茶各自TC0浓度稀释液为母液，分别按2-1、2-2、2-3、2-4 稀释后进行体外试验。三个实验组培养96h后，按2.2检测各孔OD值计算各自对应的病毒抑制率。实验重复3遍。

3 结果与分析

3.110种感冒凉茶细胞毒性检测（TC50与TC0）结果

通过检测，10种感冒凉茶均带有微量细胞毒性。

3.210种感冒凉茶三种给药途径体外实验结果

三种给药途径的体外实验，以≥90%为有效抑制，抑制结果排序为预防给药组（0）<治疗给药组（10%）<直接灭活组（70%）（为55.93，Ρ<0.01; >95%为可信）。预防给药组和治疗给药组对比Ρ >0.01，无统计学意义。具体各结果见表格。

讨论

通过对随机10种散装感冒凉茶的细胞毒性实验，发现这10种感冒凉茶均带有一定的细胞毒性，TC50在0.05ml～0.177mL之间，中位数为0.088mL。TC0则在0.031mL～0.125mL之间，中位数为0.062mL，证明这10款感冒凉茶自身所带的细胞毒性是微小的。当然，凉茶本身存在的细胞毒性也证明了“是药三分毒”的中医理论。

直接灭活试验结果表明10种感冒凉茶在各自TC0的浓度下对甲型H1N1流感病毒是一定的抑制作用。而治疗给药和预防给药相对比，整体对甲型H1N1流感病毒的治疗效果较低，可能与药物进入细胞的效率有关。现代研究表明，病毒是通过相应的受体成功吸附在细胞表面的[1]。感冒凉茶成分复杂，常见的有效成分碱类、苷类和黄酮类等物质缺乏受体，主要是通过被动运输进入细胞[2]，进入浓度随给药浓度增加而增加[3]。实验结论，散装感冒凉茶口服吸收率较低，大部分有用成分不能被细胞直接吸收，但细胞毒性温和，適合日常预防饮用。

参考文献

S.J.Flint等.病毒学原理（I）- 分子生物学[M].原著第三版.北京.化学工业出版社.2016：125-132.

杨秀伟，郭洁，徐嵬.芍药苷类化合物在人源肠Caco-2细胞单层模型中的吸收转运研究[J].中草药，2013，，44（15）：2097～2104.

陈丙銮，李松林，李萍，等.黄酮类化合物在Caco-2细胞模型中的吸收规律[J].中国天然药物，2006，4（4）：299～302.