细胞角蛋白19片段基因多态性与肺癌临床特征的相关性

蒋艳秋 于 露 夏 阳

肺癌为最常见恶性肿瘤之一，多由肺炎、肺部结节等发展而来，其发病率及死亡率一直比较高，虽然随着医学技术的发展，部分肺癌患者通过手术切除等方法可获得很好的治疗效果，但是5年生存率一直比较低[1-2]，主要原因在于肺癌患者的早期诊断率比较低，缺乏有效的诊断手段，很多患者在就诊时已为中晚期[3-4]。细胞角蛋白19片段抗原(Cytokeratin 19 Fragment Antigen，Cyfra21-1)与肺癌的发生与发展密切相关，其主要分布于单层和复层上皮肿瘤细胞的胞质内，当细胞发生凋亡或死亡时，其以溶解片段的形式释放入血清中，导致血清Cyfra21-1表达水平上升[5-6]。rs17561作为Cyfra21-1基因上重要的功能性位点，属于非同义SNP，rs17561在多种炎症和免疫性疾病发生中有着重要的促进作用，其原因可能与rs17561的主要等位基因上C突变为次要等位基因A，形成的A114S具有促进Cyfra21-1释放作用，进而促进炎症反应，同时可能涉及人类疾病的易感性[7-8]。有研究发现，Cyfra21-1 rs17561基因多态性与恶性肿瘤有一定的相关性，可能是引起消化道肿瘤的一种遗传因素[9-10]，但在肺癌中的报道比较少。本研究对Cyfra21-1 rs17561基因多态性与肺癌临床特征的相关性进行分析，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究经医院伦理委员会审核批准，并经所有患者知情同意。选取本院2017年6月至2019年4月收治的肺癌患者78例作为病例组，纳入标准：①肺癌的诊断标准；②年龄在30～70岁；③无严重的自身免疫系统、血液系统疾病；无严重的心脑血管、肝肾等器官组织疾病；④临床与病历资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②伴有遗传代谢性疾病；③伴有其他基因疾病患者。同期选择性别相同(按比例匹配)和年龄相近的健康人群78例作为对照组。

病例组中男性40例，女性38例；年龄最小35岁，最大68岁，平均年龄(54.29±2.18)岁。对照组中男性41例，女性37例；年龄最小35岁，最大68岁，平均年龄(54.29±2.18)岁。2组患者的性别、年龄等一般资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 血清Cyfra21-1基因多态性检测

清晨空腹静脉抽取2组患者的外周静脉血2 ml，提取基因组DNA(上海生工公司提供)，放置于-20 ℃低温箱保存备用。Taqman探针由大连TAKARA公司合成与提供，上游引物序列：5'-ACATTGCTCAGGAAGCTAAAAGGTG-3'，下游引物序列：5'-TGACCTAGGCTTGATGATTCTAAA-3'。采用Bio-Rad CFX manager软件对Cyfra21-1 rs17561基因的基因型PCR扩增结果进行分析。

1.3 临床特征调查

调查所有肺癌患者的临床资料，包括年龄、性别、肿瘤最大直径、病理类型、临床分期与淋巴结转移情况等。

1.4 统计方法

采用SPSS 22.00统计学软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，计数数据以%表示，计量数据与计数数据的对比采用t检验与χ2检验等，相关性分析采用直线相关分析与二分类变量Logistic回归分析(选入变量与剔除变量P值分别为0.05和0.1)，统计结果以P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Cyfra21-1 rs17561基因多态性对比

Cyfra21-1 rs17561基因共有CC、CA、AA 3种基因型，2组人群的Cyfra21-1 rs17561基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，因此研究对象具有群体代表性。

2组入选者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布差异具有统计学意义(P<0.05)，病例组的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例显著高于对照组(P<0.05)，病例组等位基因C频率显著高于对照组(P<0.05)。见表1。

2.2 Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与肺癌临床特征的相关性

在病例组78例患者中，不同年龄、性别、病理类型患者的CC基因型比例对比差异无统计学意义(P>0.05)，不同肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移患者的CC基因型比例对比差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 相关性分析

在病例组78例患者中，直线相关性分析显示Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移都呈现相关性(P<0.05)，见表3。Logistic回归分析显示肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移为影响Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型分布的主要因素(P<0.05)。见表4。

表2 Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与肺癌临床特征的相关性(例，%)

表3 Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型分布与肺癌临床特征的相关性(n=78)

表4 影响肺癌患者Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型分布的多因素分析(n=78)

3 讨论

近年来随着人类基因组计划的深入开展，基因多态性逐渐成为研究热点，其研究重点主要集中在启动子区的多态性对基因表达的影响，可能关系到疾病易感性[11-12]。编码区域的非同义突变是指位于编码区可造成翻译后相应氨基酸序列改变的单核苷酸突变，能改变蛋白质结构及功能，被普遍认为是增加疾病易感性的主要原因[13]。Cyfra21-1是细胞角蛋白家族成员之一，也是一个分子量为4 kD的酸性细胞蛋白，由细胞角蛋白19片段的2个单克隆抗体组成[14]。已有研究显示肺癌患者的血清与胸水中CYFRA21-1浓度升高，其敏感性随病情进展而发生变化，与肺癌的临床分期、淋巴结转移呈正相关。rs17561作为Cyfra21-1基因上的非同义突变，当主要等位基因C改变为次要等位基因A时，则可产生变异体A114S，从而将rs17561基因114位置上的编码氨基酸由丙氨酸(Ala)转变为丝氨酸(Ser)[15-16]。有研究显示，Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因能增强妇科肿瘤的易感性，还可增加子宫内膜异位症的易感性。也有研究显示Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因可促进炎症因子的释放，增强免疫反应，从而提高炎性相关疾病的易感性[17-18]。本研究显示2组入选者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布有差异，病例组的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例显著高于对照组，病例组等位基因C频率显著高于对照组，表明肺癌患者的rs17561基因CC基因型比例比较高。

目前临床上仍以病理活检作为肺癌诊断的金标准，但是其为一种创伤性检查，临床上的应用有一定的局限性，也比较难以反映患者的病理特征[19]。Cyfra21-1是肺鳞癌生存及复发的一种独立预后因素，血清Cyfra21-1增高还可见于胆道癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌等肿瘤性疾病[20-22]。本研究显示在病例组78例患者中，不同年龄、性别、病理类型患者的CC基因型比例对比差异无统计学意义，不同肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移患者的CC基因型比例对比差异具有统计学意义；直线相关性分析显示Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移都呈现相关性；Logistic回归分析显示肿瘤最大直径、临床分期、淋巴结转移为影响Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的主要因素。表明Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与肺癌患者的病理特征显著相关，其影响机制可能与主要等位基因在机体发挥的某种调控作用有关[23-24]，但本研究未发现其具体调控机制，需要后续进一步研究证实。

综上所述，Cyfra21-1 rs17561基因在肺癌患者中呈多态性分布，Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型与患者的临床病理特征显著相关。