不同干燥方式桑叶药材及水提物的质量评价

陈江平，陈 达，梁志毅，孙冬梅，魏 梅，罗文汇

(广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244)

桑叶为桑科植物桑MorusalbaL.的干燥叶，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等证[1]。桑叶又称铁扇子、黄桑、家桑等，始载于《神农本草经》，列为中品，为常用中药材，也是原国家卫生部2002年确定的药食同源品种之一，主产于江苏、广西、安徽、浙江等地[2]。桑叶主要含有黄酮类、生物碱类、甾醇类、多糖和氨基酸等多种活性成分，黄酮类化合物芦丁是桑叶的主要有效成分[3-4]。2015年版《中国药典》以浸出物和芦丁含量作为桑叶药材的质量控制指标[1]。已有报道证实桑叶水提物具有降血脂、降血糖、降血压、抗炎、抗肿瘤、解毒等多种药理作用[5-7]。

药材采收加工是影响中药材质量的关键因素[8]，本研究采用单因素法，以浸出物及芦丁含量为评价指标，确定桑叶药材适宜的干燥方式和贮藏水分限度，明确桑叶药材与水提物的浸出物、芦丁含量的相关性，为桑叶药材及水提物的质量控制和进一步开发利用提供理论参考。

1 器与试药

1.1 仪器

Acquity Arc型高效液相色谱仪(Waters公司)；ME204E型万分之一天平(梅特勒-托利多公司)；B-290型喷雾干燥仪(瑞士步琪有限公司)；YRE-501型旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)；KQ500D型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HWS28型恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)；Milli-Q Direct型超纯水系统(默克股份有限公司)。

1.2 试药

芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100080-201811)；磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)；甲醇(天津市富宇精细化工有限公司，色谱纯)；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

16批桑叶鲜品经广东一方制药有限公司魏梅主任药师鉴定为正品，其产地信息见表1。

表1 16批鲜桑叶样品信息

2 评价指标测定方法

2.1 出膏率测定

照水溶性浸出物测定法(2015年版《中国药典》四部通则2201)项下的热浸法测定[9]。

2.2 浸出物测定

照醇溶性浸出物测定法(2015年版《中国药典》四部通则2201)项下的热浸法测定，药材用无水乙醇作溶剂，水提物用95%乙醇作溶剂[9]。

2.3 药材芦丁含量测定

照2015年版《中国药典》一部桑叶项下“含量测定”方法测定[1]。

2.4 桑叶水提物芦丁含量测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.5%磷酸溶液(40∶60)；检测波长：358 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 L。

2.4.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含99.586 μg的溶液，即得，备用。

2.4.3 供试品溶液的制备 取桑叶水提物0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[10]。

2.4.4 专属性考察 分别精密吸取空白溶剂、对照品溶液和“2.4.3”项下供试品溶液，照“2.4.1”项下色谱条件测定，结果如图1。

注：S1-空白溶剂；S2-对照品溶液；S3-供试品溶液

2.4.5 线性关系考察 分别精密吸取浓度为99.586 μg/mL的芦丁对照品母液1、2、3、4、5 mL置5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 mL含19.917、39.834、59.752、79.669、99.586 μg的对照品溶液。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，照“2.4.1”项下色谱条件测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(y)，对照品浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，得回归方程：y=341 923x-29 745(r=0.999 8)，芦丁质量浓度在19.917～99.586 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液，照“2.4.1”项下色谱条件重复进样6次，计算芦丁峰面积的RSD为0.92%，表明仪器精密度良好。

2.4.7 重复性试验 精密称取同一批样品6份，照“2.4.3”项下方法制备供试品溶液6份，照“2.4.1”项下色谱条件测定，计算芦丁含量的RSD为1.50%，表明该方法重复性良好。

2.4.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于配制后0、2、4、8、12、24 h照“2.4.1”项下色谱条件进行测定，计算芦丁峰面积的RSD为2.85%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.9 加样回收率试验 取已知含量的桑叶水提物适量，精密称取3组样品共9份，每份约0.1 g，置于具塞锥形瓶中，3组分别精密加入相当于含有量50%、100%、150%的芦丁对照品溶液，照“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，照“2.4.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率及RSD值，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果 (n=9)

3 研究内容与结果

3.1 不同干燥方式对桑叶药材的质量影响

取桑叶鲜品X1，分为三份，一份晒干、一份阴干、一份用55 ℃鼓风烘箱烘干，得桑叶药材(Y1～Y3)，桑叶药材的检验结果，见表3。

结果表明，三种干燥方式对桑叶药材的浸出物影响不大，但对芦丁含量影响明显，晒干方式桑叶中芦丁含量最高，为0.360%；阴干次之，为0.253%；热风烘干最低，为0.208%，选择晒干作为桑叶的干燥方式。

3.2 不同水分桑叶药材贮藏1年后的质量变化

取桑叶鲜品X2～X5，晒干，得桑叶药材Y4～Y7，分别于2018年11月和2019年11月检验，结果见表4。

表3 不同干燥方式桑叶药材检验结果 (n=3)

表4 不同水分桑叶药材贮藏1年后的检验结果 (%，n=3)

结果表明，桑叶药材贮藏1年后，水分较低的桑叶药材(Y4、Y5)的浸出物和芦丁含量均无明显变化，水分接近《中国药典》限度的桑叶药材(Y6、Y7)的浸出物略有下降，但芦丁含量下降明显。

3.3 桑叶水提物的制备

取桑叶鲜品X6～X16，晒干，得桑叶药材Y8～Y18。根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(征求意见稿)》[11]和《医疗机构中药煎药室管理规范》[12]的相关要求，确定桑叶水提物的制备方法为：取桑叶药材，除去杂质，搓碎，去柄，筛去灰屑，得桑叶饮片，饮片加水煎煮二次，第一次煎煮加12倍量水，浸泡30 min后，煎煮20 min，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速用水冷却。第二次煎煮加10倍量水，煎煮15 min，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速用水冷却，测定出膏率，合并两次滤液，得桑叶水提液。水提液用旋转蒸发仪浓缩至适量，得桑叶清膏。清膏进行喷雾干燥，收集喷干粉，即得。11批桑叶药材的出膏率结果，见表5。

3.4 桑叶水提液中芦丁热稳定性考察

取Y12的桑叶水提液，保留一份原液作为对照，其余水提液用18个50 mL的量瓶定容至刻度，分3组，每组6个，分别在65 ℃、80 ℃、100 ℃恒温水浴锅上放置不同时间取出，放至室温，加纯化水至刻度，摇匀，取1 mL置于25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，密塞，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定芦丁含量，结果见表6。

表5 11批桑叶药材的出膏率结果 (%)

结果表明，桑叶提取液在65/80/100 ℃水浴保温条件下，其芦丁含量均呈现明显下降的趋势，且温度越高，下降越显著，说明芦丁热稳定性较差。

3.5 桑叶药材与水提物的浸出物、芦丁含量的相关性

取桑叶药材(Y8～Y18)和相应的桑叶水提物，测定各批次桑叶药材和水提物的浸出物、芦丁含量，在EXCEL表中用CORREL函数分别计算桑叶药材与水提物的浸出物、芦丁含量相关系数，结果见表7。

表6 桑叶水提液中芦丁的稳定性考察结果 (n=3)

4 讨论

(1)中药材传统的干燥方式有晒干、阴干和炕干等，现代干燥方式有热风烘干、真空干燥、微波干燥和远红外干燥等，桑叶产地加工的干燥方式一般为晒干、阴干或热风烘干。本研究比较了晒干、阴干和50 ℃烘干对桑叶药材质量的影响，结果表明，三种方式处理的桑叶药材的浸出物差异不大，但芦丁含量差异明显，其中晒干最高，为0.360%；阴干次之，为0.253%；热风烘干最低，为0.208%。可见，干燥方式对桑叶药材的质量影响较大，为保证药材质量和临床疗效，桑叶的干燥方式宜选择晒干。晒干属于较为传统的产地干燥方式，同样也存在采收期天气依赖程度高、干燥时间长等问题，后续研究将进一步优化晒干工艺，寻求质量与合理加工的平衡点。

(2)中药材贮藏过程中发生的质量变化与诸多因素有关，如空气、温湿度、包装储存方式和药材本身性质等。本研究比较了不同水分桑叶药材存放1年后的质量变化，结果表明，水分较低桑叶药材(Y4、Y5)的浸出物和芦丁含量均无明显变化，水分接近药典限度桑叶药材(Y6、Y7)的浸出物略有下降，芦丁含量下降明显。水分控制水平可能在一定程度上对药材质量产生影响，2015年版《中国药典》桑叶项下药材水分限度是否需适当下调还有待进一步研究。

表7 桑叶药材和水提物浸出物和芦丁含量测定结果 (n=3)

(3)桑叶水提液中芦丁热稳定性考察结果表明，芦丁在65、80、100 ℃保温条件下，均呈现明显下降的趋势，且保温温度越高，下降越显著，说明芦丁在桑叶水提液中的热稳定性较差，提示在桑叶水提物制备过程中浓缩温度可能是影响提取物芦丁含量的关键因素之一。按本研究确定干燥方法制备的11批桑叶药材(Y8～Y18)的芦丁含量范围为0.123%～0.434%，浸出物范围为8.6%～14.0%，均符合2015年版《中国药典》桑叶项下有关规定。桑叶药材与水提物的质量相关性研究结果表明，两者的浸出物、芦丁含量相关系数分别为0.90、0.92，说明桑叶药材与水提物的质量相关性较强。