四季青酚酸类成分提取工艺及镇咳机制的研究

姜仁禹，梁丽丽，马思提，梁伟玲

（山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264100）

四季青又被称之为红冬青，除此之外，它还有很多别称，如油叶树等，属于冬青科植物，主要生长在长江流域以及秦岭南坡等地域。四季青在我国多被用作观察树种，另外，由于其树木质地坚韧，因此可用于制作雕刻品、工具柄等用，除此之外，它还有清热解毒、凉血止血和消肿去淤等功效，能够有效治疗肺热咳嗽、湿疹、疮疡、风热感冒和急性咽喉炎等，是一种实用价值较高的植物[1]。在四季青中，原儿茶酸和原儿茶醛两种酚酸类成分为主要的抗炎和抗菌活性成分。据调查，我国对于四季青的提取工艺研究资料较为匮乏，因此本文对其指标成分中的原儿茶酸以及原儿茶醛，通过乙醇提取方式进行研究，同时使用大孔树脂对其进行工艺优化，如下文所述。

1 仪器与试药

1.1 仪器

本次实验所用仪器选取APS-80-16plus高效液相色谱仪（迪庆开发区三江生物开发有限公司）、TG-332A微量分析天平（上海精科天美-上海天平仪器厂）、FA-2004实验室电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）以及SG7200HDT超声波清洗器（杭州亿捷科技有限公司）。

1.2 试剂与样品

本次实验所选取对照品为原儿茶酸以及原儿茶醛，两种对照品均从中国药品生物制品检定所购买，其中双蒸水为实验室自制，甲酸为分析纯，乙腈为色谱纯。

2 实验方法与结果

2.1 实验方法

将原儿茶酸与原儿茶醛制作成曲线方程，其中横坐标X为二者浓度，纵坐标Y为二者锋面积所得积分值，最后得出回归方程式。经计算后，原儿茶酸含量在范围内线性关系较好，原儿茶醛含量在范围内线性关系较好。

2.2 不同提取工艺比较

本次研究评价指标为原儿茶酸与原儿茶醇含量中的提取率，不同提取工艺比较方法分别为水煎提取方法与乙醇回流提取方法。

（1）乙醇回流提取方法：选取200单位的四季青药材放置于烧瓶中，烧瓶容量为3000 mL（实验所用烧瓶为圆底），随后使用30与70的乙醇经过1600 mL回流（回流微沸即可）提取60 min，用纱布进行过滤，过滤所得药物残渣需再经过1200 mL溶剂进行回流（同样微沸）提取30 min，用纱布进行滤过，最后将两次所得滤液进行合并，即得。

（2）水煎提取法：首先选取200单位的四季青药材置于烧杯中，烧杯容量为1000 mL，随后向烧杯中加入500 mL纯净水，使四季青在烧杯中浸泡30 min，然后对其进行煮沸操作，待其完全沸腾后需保温60 min，使用纱布进行过滤，过滤所得药物残渣需使用1500 mL纯净水再次进行煮沸操作，操作过程如上述一致，最后将两次所得的滤过液体进行合并，即得。

2.3 实验结果

将上文所述中两种提取方法的供试品进行相应的稀释后所得结果发现，原儿茶酸中乙醇70提取率最高（99.2%），详见表1。

表1 不同提取方法中四季青原儿茶酸提取率对比（n，%）

原儿茶醛提取中，以乙醇70提取率为最高（91.6%），详见表2。

表2 不同提取方法中四季青原儿茶醛提取率对比（n，%）

2.4 大孔树脂纯化工艺应用

作为一种结构为大孔的有机高分子共聚体，大孔吸附树脂能够作为吸附剂，凭借其具有的不同成分进行选择性的吸附和筛选操作，以实现对某一类化合物的分离纯化。现阶段，在我国市面上较为常见的大孔吸附树脂有十多种类型，每一种大孔吸附树脂的适用范围也不尽相同，本文研究对NKA—8极性树脂对四季青酚酸类成分的洗脱效果进行研究。

在选择NKA—8乙醇洗脱液的浓度时，先将容量为50 mL的NKA—8树脂进行预处理后，置于吸附柱，同时在树脂床上倒入12.5 mL四季青提取液，然后用蒸馏水对树脂床中含有的非吸附性杂质进行清洗，以30、60、90的乙醇作为解吸剂，然后计算和检测洗脱液中的药物浓度和洗脱量。结果显示，浓度为60的乙醇洗脱液洗脱效果更好。详细情况见表3。

表3 NKA—8乙醇洗脱液浓度的选择

3 讨 论

四季青作为一种中药，有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛等功效，其功效的实现与发挥主要依赖原儿茶酸、茶醛等酚酸类成分。四季青性寒。味道苦涩，能够用于治疗上呼吸道感染、慢性支气管炎以及慢性哮喘等，由于这类病情常见症状为咳嗽、咳痰等，在治疗上需进行镇咳祛痰方式，而四季青中所含的原儿茶酸、原儿茶醛等酚酸类成分能够清热化痰，达到宣肺止咳的作用[2-3]。

现阶段，在医学领域中，常用水煎提取法来实现对四季青酚酸类成分的提取，因而本文即对四季青提取纯化工艺进行了分析，以期有针对性的改进工艺，去除四季青中含有的杂质，实现优秀的药物制剂目标。

本次研究通过水煎法与乙醇回流法对四季青酚酸类成分进行提取后发现，原儿茶酸中以乙醇70提取率最高；原儿茶醛中以乙醇70提取率最高。应用大孔树脂纯化工艺时，选择浓度为60的NKA—8乙醇洗脱液效果更理想。

综上所述，在进行四季青酚酸类成分提取中，乙醇回流提取和大孔树脂纯化工艺均能够有效去除杂质，同时最大化保留酚酸类成分，因此可基于实际情况，选择适当的工艺实现对四季青酚酸类成分的提取。