血清抗体检测在新型冠状病毒感染诊断中的临床价值

刘国生，唐生尧，褚志华，曾守逵，郑建琼

湖北民族大学附属民大医院医学检验科(湖北 恩施 445000)

新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS-CoV-2)是冠状病毒中的一种，是新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Infected Disease-19，COVID-19)的病原体，该病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60～140 nm[1-4]。SARS-CoV-2感染后，患者一般要经历潜伏期、发病期和康复期等复杂过程，且SARS-CoV-2感染者是主要的传染源，具有人传人的特性，呈现家族聚集性传播，其传染性较强，感染后治愈周期较长，具有一定的致死率而深受关注[5-6]。本研究主要通过检测血清中SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体，观察分析其在临床诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2020年1月24日-2月25日湖北民族大学附属民大医院及其医联体医院(均为COVID-19定点收治医院)收治的住院患者61例，其中包括已经核酸检测的COVID-19患者35例，男19例，女16例，年龄7～87岁，平均(58±32)岁，以及根据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第六版)》的标准[7]，未经核酸检测的疑似患者26例作为病例组，男14例，女12例，年龄32～73岁，平均(51±22)岁。选取健康体检者60例作为正常对照组，男33例，女27例，年龄29～64岁，平均(45±19)岁。

1.2观察指标采集空腹静脉血液标本，3 500 r /min离心10 min分离血清，采用胶体金法行SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测分析。试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供(科研试剂)，检测步骤严格按照试剂说明书进行操作。

1.3结果判断SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测结果阳性：出现质控线(C)和检测线(T)。阴性结果：仅出现一条质控线(C)，不出现检测线(T)。无效结果：不出现或只出现一条检测线(T)，表明测试无效，需重新检测。联合检测特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%。

1.4统计学处理应用EXCEL建立数据库，采用SPSS 21.0统计学软件，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1COVID-19确诊患者血清中SARS-CoV-2IgM和IgG抗体检测结果比较35例COVID-19确诊患者血清中SARS-CoV-2 IgM抗体呈阳性反应者33例，阴性反应者2例，SARS-CoV-2 IgG抗体呈阳性反应32例，阴性反应3例，SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体均呈阳性反应31例，均呈阴性反应1例，其中有1项呈阳性反应3例。结果表明，SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体在COVID-19患者中检出敏感度分别为94.29%(33/35)，91.43%(32/35)，两者联合检测敏感度为97.14%(34/35)，假阴性率为2.86%(1/35)，见表1。

表1 COVID-19确诊患者血清中SARS-CoV-2IgM和IgG抗体检测结果比较(n)

2.226例疑似患者SARS-CoV-2抗体和核酸检测结果26例疑似患者中SARS-CoV-2抗体检测呈阳性反应13例，核酸检测呈阳性反应8例，SARS-CoV-2抗体检测阳性率50.00%(13/26)显著高于核酸检测的阳性率30.77%(8/26)，差异有统计学意义(χ2=15.1，P<0.01)，见表2。

表2 26例COVID-19疑似患者SARS-CoV-2抗体和核酸检测结果比较(n)

2.3SARS-CoV-2IgM和IgG抗体检测特异性正常对照组60例受试者血清中SARS-CoV-2 IgM抗体均呈阴性反应，特异性100%(60/60)，IgG抗体呈阳性反应1例，阴性反应59例，特异性98.33%(59/60)，两者联合检测特异性为98.33%(59/60)，见表3。

表3 60例正常对照受试者血清中SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测结果(n)

3 讨论

SARS-CoV-2是COVID-19的病原体，于2019年12月在湖北省武汉市爆发[8-10]，随后在全国各地及全球多个国家出现了确诊病例，国务院紧急将其划分为乙类传染病，按甲类传染病进行管理，全国31个省、自治区、直辖市被迫启动了公共卫生安全Ⅰ级响应。该病毒人类普遍易感，无地域差异性，其基因测序同SARS-CoV高度同源，被称为SARS-CoV的姊妹。SARS-CoV-2攻击的主要靶器官是肺，感染后以发热、干咳、乏力为主要临床症状，少数患者会伴有腹泻、头痛、胸闷等临床特点，重症患者可出现呼吸系统、神经系统、心血管系统、消化系统、泌尿系统等多器官损害，病情凶险，极少数病情危重，可致死亡。SARS-CoV-2感染者是主要的传染源，具有人传人的特性，呈家族聚集性传播，感染潜伏期也具有传染性，主要通过呼吸道飞沫和密切接触传播，也存在粪-口传播及气溶胶传播的可能[11-12]。

SARS-CoV-2核酸检测阳性是其感染诊断的金标准，普遍使用的方法是实时荧光定量PCR法。该法首先需要对标本中的核酸序列进行扩增，获得足够的核酸数量后，通过荧光等常规方法进行检测，但因其受到标本采集、运送、核酸提取质量、检验试剂、实验条件等多因素的影响，核酸检测阳性率较低。有研究指出[13]在人体感染SARS-CoV-2后，其抗原刺激免疫系统产生免疫应答，血清中出现相应的抗体，其中IgM出现较早，3～5 d即可升高，随后IgG效价迅速上升，随着病情的转归，IgM抗体衰减消失。本研究结果显示，35例确诊病例中，33例检测到了IgM抗体，敏感度为94.29%。2例未检测到IgM抗体，提示可能感染时间长，病毒已逐渐被机体清除，IgM抗体消失所致。35例确诊病例中，32例检测到了IgG抗体，阳性率为91.43%，3例未检测到IgG抗体，提示可能感染时间较短，机体可能还未产生IgG抗体。26例疑似病例中，SARS-CoV-2抗体检测阳性率50.00%(13/26)显著高于首次核酸检测的阳性率30.77%(8/26),差异有统计学意义(P<0.01)。其余5例抗体阳性疑似病例也通过第二次核酸检测阳性转为确诊病例。正常对照组60例健康体检者SARS-CoV-2 IgM抗体检测均呈阴性反应，特异性100%(60/60)，IgG抗体呈阳性1例，阴性59例，特异性98.33%(59/60)，两者联合检测的特异性为98.33%(59/60)，说明人类体内不存在或极少存在针对SARS-CoV-2的特异性抗体，也应证了人类对SARS-CoV-2的普遍易感。

本研究重点探讨了血清SARS-CoV-2抗体IgM和IgG的检测敏感度和特异性，揭示了其在临床应用的价值，但因受到确诊病例和疑似病例标本数量的影响，其研究结果必然存在一定的偶然性。一般情况下，当病原微生物感染机体激活免疫系统后，首先产生IgM抗体，随后快速下降直至消失，而IgG通常在IgM之后出现，并且能够保持较高水平在机体内长时间维持。但鉴于SARS-CoV-2是一种新的病原体，目前对其感染人体后抗体产生的规律还没有相关报道。由于本研究的局限性，血清SARS-CoV-2抗体IgM和IgG产生的时间周期，检测的敏感度、特异性、假阳性率和假阴性率等问题，还有待进一步运用大样本、大数据进行深入研究分析。

综上所述，应用胶体金法对血清中的SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体进行检测，适用于隐性感染及大规模人群筛查。同时，血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测与新型冠状病毒核酸检测可形成有效的互补，作为感染诊断的依据，为SARS-CoV-2感染的防治提供参考依据。临床医生应根据患者的临床资料和流行病学史，及时合理选择SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测，尽早对其感染患者进行筛查。