俞 斌(湖北省临床检验中心,武汉 430064)
甲肝病毒(HAV)是甲型肝炎的传染源,于1973年由Feinstone 等应用免疫电镜方法在急性肝炎患者的粪便中发现。根据疾病预防控制局数据显示,2019年1 ~7月中国甲型肝炎发病人数为12 734 例,死亡人数为3 例,中国甲肝疫情呈现上升态势[1]。甲型肝炎的实验室诊断主要依赖血清中特异性抗体的检测,抗原检测、病毒分离及分子诊断技术常作为常规诊断方法。通常用酶联免疫吸附试验(ELISA)和化学发光技术对抗甲型肝炎病毒抗体IgM(HAV-IgM)进行检测,HAV-IgM 在急性感染时出现较早,上升快,高峰效价高,持续时间短,是急性HAV 感染或复发的可靠指标,并且有助于区分现症感染和既往感染[2]。为了解湖北省二级以上临床实验室HAV-IgM 检测能力,进一步加强HAV-IgM 检测实验室质量管理,提高HAV-IgM 检测水平,对全省2015 ~2019年二级以上临床实验室开展HAV-IgM 项目血清学能力验证活动进行回顾总结,现将结果分析如下:
1.1 参控实验室2015 ~2019年分别有260,266,265,274 和263 家二级以上临床实验室单位参加HAV-IgM 项目能力验证活动,参加实验室类型包括综合医院、中医院、妇幼保健院、民营医院、专科医院及仪器试剂生产公司(不在此次统计范围),每年度合格率及不同类型实验室检测统计情况见表1,表2。
1.2 参控样本 HAV-IgM 的能力验证物品购自康彻斯坦公司,批号201511~201515, 201611~201615,201711~201715,201811~201815,201911 ~201915,规格为1.0ml/支,储存于-15℃,冷链运输分发,分发前均由通过了CNAS 认可的均稳检测分包方实验室进行了均稳检测,达到质量要求。
1.3 评价方法 每个参评单位每年发放1 套5 个批号高中低不同浓度能力验证物品,附有能力验证活动指导书和结果回报表各1 份。在建议的测定日期,用本实验室采用平时提供检测服务时使用的检测系统做HAV-IgM 血清学试验,能力验证物品检测须与常规标本的处理方法一致。检测完成后,在规定时间内将检测结果、检测方法和所用试剂名称等信息填写在回报表中,通过网络上报至湖北省临床检验中心汇总分析,中心统计完毕后将评价结果反馈至各参评单位。
1.4 评价标准采用美国PT 评分法进行评价 ①针对某项目:本次某项目测定得分= (某项目测定结果可接受样本数/某项目样本总数)×100%;②针对本计划:本次计划测定得分= (所有项目测定结果可接受样本总数/所有项目样本总数)×100%。PT ≥80%为合格,PT <80%为不合格。
2.1 2015 ~2019年检测合格率 见表1。合格率均在95%以上。
表1 2015~2019年HAV-IgM 检测EQA 合格率统计表
2.2 不同类型实验室HAV-IgM 项目检测结果 见表2。中医院检测平均合格率相对较低,为93.5%(其中二级中医院占84.6%)。
表2 2015~2019年不同类型实验室HAV-IgM 检测合格率统计表
2.3 不同浓度HAV-IgM 项目能力验证物品检测合格率 近5年,中心采用不同浓度的HAV-IgM 能力验证物品评价实验室的检测能力,从低到高分别为4,15,20,50,80,150 NCU/ml,对应的平均检测合格率分别为94.7%,96.3%,97.3%,97.8%,97.7%和97.4%。可以看出,中高值浓度能力验证物品测定结果的准确度高,而低浓度能力验证物品则较易出现测定误差。
2.4 方法学比较 实验室采用不同检测方法的合格率结果,见表3。选用不同的方法,其结果存在差异。HAV-IgM 的实验室检测方法有ELISA,放射免疫法(RIA)、化学发光法(CLIA)、化学发光微粒子免疫法(CMIA)、微粒子酶免疫分析法(MEIA)、斑点金免疫结合试验(DIGFA)、间接免疫荧光技术等。表3 对采用使用单位数≥3 家的ELISA,免疫渗滤层析试验、CLIA,磁微粒化学发光法四种方法进行了统计比较,可以看到,采用免疫渗滤层析法检测的合格率较低,近5年的平均合格率为74.6%。
表3 2015 ~2019年不同方法检测HAV-IgM 合格率统计表(n ≥3)
通过以上对近五年来全省二级以上临床实验室开展HAV-IgM 项目血清学EQA 进行回顾总结发现不同类型实验室、不同检测方法的检测结果存在差异。我们建议:一是基层中医院应充分利用能力验证评价结果,从能力验证评价报告中得出有关自身能力的结论,当得到不合格的能力验证评价成绩时,应对相关人员进行适当的培训,对导致能力验证评价失败的原因进行分析并采取纠正或预防措施;实验室应监控结果趋势,这些结果可能为问题正在形成信号[3];二是要选择适当的检测方法。采用ELISA 法简单方便、经济实惠,不需要特殊设备,适用于大批量人群抗原抗体筛查,但在测定中影响因素很多,样本处理时稀释倍数较高会影响检测结果的准确性。免疫渗滤试验优点是操作快捷,结果直观可靠,但只能做定性检测,且容易造成弱阳性标本的漏读和误读,性价比和准确度方面都逊于ELISA 法。实验室在采用该方法时,须注意其检测程序的质量控制,除了检测装置的内对照外,每检测日或分析批,应使用弱阳性和阴性质控物进行质控。阴、阳性质控品的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控,相反则为失控【4】。化学发光法被誉为目前免疫检测的金标准【5-6】。磁微粒化学发光法是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法,该技术充分利用了磁性分离的快速易自动化、化学发光技术的高灵敏度以及免疫分析的特异性。实验室可根据自身情况加以选择使用。三是要不断加强自身实验室建设,制定规范的操作规程,树立全程质量控制观念,要把质量控制理念贯穿到检测的分析前、分析中、分析后的整个过程。
能力验证是利用实验室间比对,按照预先制定的准则评价参加者的能力。实验室应充分利用这个工具,将不合格的成绩从方法问题、设备问题、技术问题、材料问题等方面查找失控原因【7】,及时改进分析能力和实验方法;能力验证提供者也应该不断从评估方面进行改进,共同提高实验室的检测水平和综合能力,更好地为临床服务。