新型冠状病毒肺炎患者血清SARS-CoV-2抗体的检测分析

2020-09-14 06:50朱旭阳叶寒青陈文亥翁吉仁张艳敏温州医科大学附属乐清医院检验科浙江乐清325600
现代检验医学杂志 2020年4期
关键词:阴性核酸抗体

朱旭阳,叶寒青,陈文亥,赵 行,翁吉仁,张艳敏(温州医科大学附属乐清医院检验科,浙江乐清 325600)

新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)属于套式病毒目、冠状病毒科、β 冠状病毒属[1-2]。引起的新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19 )是一种急性呼吸道传染病[3],轻、中症患者早期临床表现缺乏特异性,以上呼吸道症状(发热、干咳、乏力)为主[4],重型、危重型患者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征等[5]。该病传染性强,治疗难度大,对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁[6]。为加强对该病的早诊早治,控制疫情,《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》明确将抗体检测结果纳入确诊病例的诊断标准,以及疑似病例的排除标准[5]。由于COVID-19 是一种全新的传染病,SARS-CoV-2 抗体的动力学特点尚未明确,难以对抗体的检测结果做出正确解读,为此本研究收集了发病第1~55 天的28 例COVID-19 患者的33 份血清,拟对SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体的变化规律做初步分析,为临床标本采样时机的选择、诊断及疗效评估提供更多依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2020年1月21日到2月9日温州医科大学附属乐清医院收治的28 例SARSCoV-2 核酸检测阳性的确诊COVID-19 患者为病例组,其中男性15 例,女性13 例,年龄21~82 岁。排除COVID-19 的30 例其他疾病患者为对照组,其中男性12 例,女性18 例,年龄27~84 岁。患者相关资料均从电子病历获得。所有研究对象均空腹采集静脉血5ml,置于含分离胶的红头真空采血管内,静置待血液凝固后,3000×g 离心5min,取血清-20℃保存,统一于检测前室温融解。把病例组28 例确诊患者的33 份血清分成四小组:发病第1~6 天采集的13 份血清为病例组1,发病第7~10天采集的5 份血清为病例组2,发病第18~55 天采集的13 份血清为病例组3,2 例患者没有临床症状,因为有流行病学史,自行到医院排查,CT 结果显示肺部感染,咽拭子核酸阳性,他们的血清作为病例组4。

1.2 仪器与试剂 iFlash 3000-B 化学发光测定仪(深圳亚辉龙生物科技股份有限公司),SARSCoV-2 IgM,IgG 抗体检测试剂盒(深圳亚辉龙生物科技股份有限公司)。

1.3 方法 采用SARS-CoV-2 抗原(重组蛋白)包被的磁微粒,全自动化学发光免疫分析技术,按试剂说明书进行检测。阳性判断标准参考试剂说明书,样本浓度< 10.00 AU/ml 时,视为阴性;样本浓度≥10.00 AU/ml 时,视为阳性。病例组2 的SARSCoV-2 IgM 浓度处于临界状态,病例组3 的两例SARS-CoV-2 IgM 浓度处于临界状态,这7 份血清进行两次检测(重复性良好),取均值分析。

2 结果

2.1 SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体诊断特异度 对照组30 例患者中,SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体诊断特异度分别为100.0%(30/30)和96.7%(29/30)。其中IgG 抗体1 例假阳性系脑梗死、高血压患者,结果为14.99AU/ml,属弱阳性反应。

2.2 COVID-19 患者不同病程IgM,IgG 抗体诊断敏感度 见表1。SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体诊断敏感度,病例组1 分别为0.0%(0/13)和0.0%(0/13),病例组2 分别为40.0%(2/5)和80.0%(4/5),病例组3 分别为92.3%(12/13)和100.0%(13/13),病例组4 分别为50.0%(1/2)和100.0%(2/2)。

表1 33 份COVID-19 患者血清在不同病程SARS-CoV-2 抗体的诊断敏感度[n(%)]

2.3 SARS-CoV-2 抗体出现和消失的时间 SARSCoV-2 IgM,病例组1 均阴性;病例组2 的2 例患者分别在第7 天和第8 天出现25.21 AU/ml 和18.62 AU/ml 阳性,1 例患者第10 天仍阴性;病例组3 的2 例患者分别在第49 天和第55 天出现9.80 AU/ml(阴性)和10.79 AU/ml(弱阳性)。SARS-CoV-2 IgG,病例组1 均阴性,病例组2 的1 例患者第8天阴性,其余患者均阳性,病例组3 和病例组4 均阳性。

2.4 3 例COVID-19 患 者 的SARS-CoV-2 IgM,IgG动态变化 见表2。病例组3 的3 例患者的IgM,IgG 结果提示SARS-CoV-2 IgM 浓度在一个月左右达峰值,随后逐渐下降。

表2 3 例COVID-19 患者SARS-CoV-2 IgM,IgG 的动态变化

3 讨论

SARS-CoV-2 核酸阳性是COVID-19 确诊病例的诊断标准。但是实际应用中核酸检测难以保证结果的及时和准确[7-8],主要受病程、采样、保存、RNA 提取、试剂盒质量、结果判读等因素的影响[9]。为进一步做好COVID-19 诊断和医疗救治工作,国家卫生健康委员会把抗体检测作为COVID-19 诊治的补充检测手段。SARS-CoV-2 抗体检测是一种新的检测方法,需要验证试剂的可靠性和明确SARSCoV-2 抗体产生的时间规律,使SARS-CoV-2 抗体检测结果更科学和准确地应用于临床。

研究表明,SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体检测具有较高的诊断特异度和诊断敏感度,能够满足临床诊断的要求。根据研究中SARS-CoV-2 抗体出现和消失的时间,提示多数患者SARS-CoV-2 IgM 在发病第7 天出现阳性,一个月左右达峰值,随后逐渐下降,持续50 天左右。其中一例患者发病第10 天阴性。故建议发病10 天内SARS-CoV-2 IgM 阴性的患者不能排除SARS-CoV-2 感染,需要动态监测。鉴于SARS-CoV-2 是一种新的毒株[10-11],传染性强,目前没有疫苗和特效药,人体内没有针对SARS-CoV-2的特异性抗体,而且随着病程的延长,大部分患者的病毒载量逐渐下降,当降低到核酸检测的最低检测限,就难以检出,而抗体的诊断敏感度随着病程的延长逐渐增加,所以抗体检测是核酸检测重要的补充实验,尤其对发病超过一周或多次核酸检测阴性的疑似患者。本组研究样本量偏少,未能收集到每个病例组内更多的样本,因此对SARS-CoV-2 抗体变化规律仅做初步分析,结论有一定的局限性。

本研究发现SARS-CoV-2 IgG 血清转阳时间早于IgM 的患者比例更高,与一般传染病的IgG 类抗体出现较晚不一致。分析其原因可能与以下因素有关:①SARS-CoV-2 抗体动力学变化的特殊性所导致,需要大样本的临床数据和可靠试剂来验证;②大量研究提示,不同种冠状病毒N蛋白或S蛋白存在免疫交叉反应[12-16]。SARS-CoV-2 抗体检测可受其他种类冠状病毒的影响,可能具有一定的假阳性率,还需在临床检测中进一步证实。尤其是上感流行季节,大量的hCoV-229E,hCoV-OC43,hCoVNL63 和hCoV-HU1 病毒感染引起的上感患者可影响SARS-CoV-2 抗体的检测结果;③应急开发的试剂缺乏样本多样性验证和临床验证,检测结果的准确性还需大样本临床数据的验证。

研究中我们还发现一例重症患者转上级医院治疗后,咽拭子SARS-CoV-2 核酸2 次阴性,大便SARS-CoV-2 核酸5 次阴性,影像学检查明显改善,体温正常超过3 天,予以出院。出院后随访期间,咽拭子SARS-CoV-2 核酸复查阳性,有别于文献[17]研究中20 例重症患者中没有出现复阳现象。值得注意的是该患者核酸复阳期间,SARS-CoV-2 IgM阳性,SARS-CoV-2 IgG 110.91 AU/ml,阳性。意味着COVID-19 患者IgG 处于高值时,不能排除传染性。复阳患者是否具有传染性还需确定脱落的是否是活病毒,产生的IgG 抗体是否具有保护性还需病毒中和试验进一步验证。该例患者再次入院后,病情稳定,与文献[17]研究大部分复阳患者在再次入院后没有出现明显的恶化一致[17]。

综上所述,本研究建议发病10 天内SARSCoV-2 IgM 阴性的患者需要动态多次监测,不排除SARS-CoV-2 感染;SARS-CoV-2 IgM,IgG 联合检测适用于发病超过一周或多次核酸检测阴性的疑似患者,可以减少潜在传染源的漏检。

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