刘广超 田晓玲 王孟军 黄承玲*
(1.贵州民族大学人文科技学院 贵阳 550025;2.贵州民族大学生态环境工程学院 贵阳 550025)
杜鹃花属植物是重要的观赏植物,“杜鹃”是中国十大传统名花之一,欧洲更有“离开杜鹃便不成园林”的说法,说明了其在世界园林中的重要地位。百合花杜鹃Rhododendronliliiflorum是杜鹃亚属有鳞大花亚组的种类,灌木,枝叶繁茂,花白色,有香味,花期5月,在贵州主要分布于贵定、雷山、安龙、梵净山,生于海拔1100~1500米的多石地段[1]。2013年有学者在百里杜鹃自然保护区发现有百合花杜鹃分布,这是在贵州西部及西北部海拔较高地区的首次发现,约有3个居群,二百余株。杜鹃属植物种子极细小,发芽率低,长势慢,因此提高种子萌发率,扩大种群数量,对于保护濒危物种具有重要意义。大量研究表明外源激素能显著提高杜鹃属植物等种子的萌发率,应用于种子萌发的激素主要是GA3、NAA、6-BA[3~9],但尚无对百合花杜鹃种子使用外源激素促进萌发的研究报道。
2016年11月百合花杜鹃蒴果成熟即将开裂时,在百里杜鹃保护区采集成熟蒴果,自然晾干后取出种子,挑净杂物后放入冰箱备用,恒温4℃。
1.2.1 实验种子消毒
实验前选取大小均匀的百合花杜鹃种子,以50粒为一组分别用纱布包好,在消过毒的试验台上使用0.1%的升汞消毒9分钟,取出后用无菌水冲洗干净。
1.2.2 不同浓度的激素浸种
GA3、NAA、6-BA三种激素均采用5个浓度梯度,分别为50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l、800mg/l,以无菌水作对照处理。将消好毒的百合花杜鹃种子放入各浓度激素溶液中浸泡12h后,用无菌水清洗5次,再将消毒后的纱布平铺在垫有2层滤纸的培养皿中作为萌发基质。实验过程中视水分情况适当添加无菌水,保持纱布湿润。
1.2.3 不同浸种时间
将消毒后的百合花杜鹃种子分别放入400mg/l的三种激素溶液中浸泡2h、12h、24h。每个处理均设置3组重复,每组重复均用50粒种子。实验过程中也视水分情况适当添加无菌水,保持纱布湿润。
1.2.4 种子萌发指标测定
采用发芽率和发芽势作为衡量种子的萌发能力的指标。发芽势是用来衡量种子出芽的整齐度,发芽率是用来衡量种子的发芽能力[10]。播种完成后开始观察并记录发芽的种子数。种子的胚根突破种皮时即为萌发,以第1天发芽到第8天发芽的所有种子数来计算发芽势,连续5天观察不到种子萌发即表示萌发结束,以结束之日的发芽种子数计算发芽率和发芽势[11]。
发芽率(%)=发芽的种子数/供试种子数×100%
发芽势(%)=8天内所有发芽种子数/供试种子数×100%
另外,详细记录每个处理的开始发芽日期,计算萌发时滞,即发芽启动时间,指从萌发试验开始到第1粒种子开始萌发所持续的时间[12]。
实验记录的数据用Excel进行统计,计算出发芽势和发芽率,然后用Duncan检验法比较分析数据间的差异显著性。
从表1可见,在不使用外源激素的情况下,百合花杜鹃种子的萌发率仅为4%,发芽势仅为1.33%;而三种激素处理都不同程度地促进了百合花杜鹃种子萌发,但不同浓度及不同处理时间其结果差异较大。当GA3浸种处理浓度为800mg/l时,发芽率和发芽势都达到最大,分别为56%和40%,与对照差异显著(p<0.05),萌发时滞相对较短;当6-BA的浸种浓度为400mg/l时,发芽率和发芽势都达到最大,为24.67%及12%,与对照差异显著,萌发时滞为21天,与对照相当;当NAA的处理浓度为50mg/l时,发芽率和发芽势都达到最大,为25.33%及6.67%,与对照差异显著,萌发时滞为23天,高于对照。
三种激素相比,GA3浸种处理效果较好,发芽率及发芽势及萌发时滞都显著优于其他两种激素处理。而NAA在低浓度50mg/l时有促进萌发作用,随着浓度升高,促进作用变小,到800mg/l时种子没有发芽,说明有抑制作用。
从表2可知,用GA3和6-BA浸种时,随着浸种时间的延长,种子发芽率和发芽势都随之增高,当浸种24h时萌发率最大,分别达到76.67%和37.33%,与浸种2h、12h的相比,差异达显著水平;而NAA浸种处理时,浸种2h时发芽率最高,为25.33%,随着浸种时间延长,种子发芽率显著降低。
表1 不同激素不同浸种浓度对种子萌发的影响
表2 不同浸种时间对种子萌发的影响
种子萌发常常受多种因素的影响,常见的原因主要有种皮障碍、种子休眠、胚发育不完全、含有抑制物质等。一定浓度的植物生长调节剂浸种可打破种子休眠,分解抑制物质,从而利于种子吸水萌发;GA3及6-BA在一定浓度下会加快种子萌发,其原因主要是这两种激素具有打破种子休眠,促进种子萌发的作用,在前人的很多种子萌发实验中已经证实[3~13];GA3可通过诱导种子内部淀粉酶等水解酶的合成,促进种子内胚乳贮藏物质的水解,为种胚生长提供必要的营养物质,从而促进种子萌发[13~14];但对不同植物种子适宜的浸种浓度和浸种时间却不尽相同。本实验研究表明,GA3浸种浓度为800mg/l时促进百合花杜鹃种子萌发的效果最为显著,萌发启动时间变短,而且浸种时间越长促进萌发的效果越好;6-BA浸种浓度为400mg/l时促进种子萌发的效果最好,且浸种时间越长促进萌发的效果越好;NAA浸种则是在50mg/l时促进种子的萌发,但浸种时间越长反而抑制种子萌发。从三种激素浸种的种子发芽率来看,GA3浸种比其它两种激素处理的种子发芽率要高。本研究将为百合花杜鹃的种群扩繁与回归奠定重要基础。