Angpt2/Angpt1比值与脑梗死病人神经功能缺损程度及预后的关系探讨

廖健妮，罗 薇，严文静

脑梗死又称为缺血性脑卒中，是由于局部脑组织缺血出现缺氧、组织坏死等，且急性脑梗死发病率及致残率逐年升高，严重影响病人生活及工作[1]。既往研究表明，脑梗死病人脑缺血引发氧化应激反应，导致自由基生成量增加进而引起脑损害[2]，故应及早治疗脑梗死并降低致残率以改善病人预后。有研究表明，血管生成素1(angiopoietin-1，Angpt1)属于血管生成素家族，主要作用是维持血管稳定性[3]。血管生成素2(angiopoietin-2，Angpt2)是Angpt1的酪氨酸激酶受体2(Tie2)受体拮抗剂，有研究表明Angpt2参与感染性休克、心脏血管疾病及急性心肌梗死等多种病理生理过程并发挥促炎作用[4]。相关研究表明，心血管疾病病人新血管生成过程中Angpt1与Angpt2均发挥重要作用，Angpt1/Angpt2比值可反映病人体内血管稳定性[5]。关于Angpt1/Angpt2比值与脑梗死病人的相关性研究较少，因此本研究探讨Angpt1/Angpt2比值与脑梗死病人神经功能缺损程度及预后的关系，为提高临床疗效及改善预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年7月—2018年7月我院收治的108例急性脑梗死病人为脑梗死组，所有病人均符合急性脑梗死诊断标准[6]，且均经头颅CT或磁共振成像确诊。根据美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS)评估脑梗死组神经功能缺损程度，NIHSS评分1～15分为轻度组(33例)，NIHSS评分16～30分为中度组(40例)，NIHSS评分31～45分为重度组(35例)[7]。同时以我院门诊健康体检者78名为对照组。本研究经医院伦理委员会批准，所有受试者或家属均知情且签署同意书。纳入标准：急性脑梗死病人均为首次发病；所有病人均于发病48 h内入院；病人未接受抗血小板、抗凝、溶栓等治疗；对照组体检报告显示正常。排除标准：外伤导致的脑梗死病人；心、肝、肾等功能严重损伤；伴有凝血功能障碍；存在颅内脑出血或存在占位性疾病；精神疾病病人。

1.2 研究方法

1.2.1 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清Angpt1、Angpt2表达水平 所有研究对象均于入组后抽取空腹静脉血5 mL，以3 000 r/min离心10 min，分离血清，采用SV Total RNA Isolation System Kit试剂盒(美国Promega公司)提取总RNA，应用紫外分光光度计检测提取RNA的浓度及纯度。根据RR036A Takara PrimeScriptTMRT Master Mix (Perfect Real Time)试剂盒(北京麦瑞博生物科技有限公司)将RNA反转录为cDNA。通过Primer软件设计Angpt1、Angpt2引物，Angpt1正向引物序列为5′-TGCACTAA AGAAGGTGTTTTGCT-3′，反向引物序列为5′-CCGGTGTTGTATTACTGTCCAA-3′；Angpt2正向引物序列为5′-CCTCGACTACGACGACTCAGT-3′，反向引物序列为5′-TCTGCACCAC ATTCTGTTGGA-3′；β-actin正向引物序列为5′-TGCCATCCTAAAAGCCAC-3′，反向引物序列为5′-TCAACTGGTCTCAAGTCAGTG-3′，引物均由上海生工生物技术服务有限公司合成。按照SYBR Green PCR试剂盒(德国QIAGEN公司)进行RT-PCR反应，体系20 μL：SYBR Premix Ex Taq TM混合液10 μL，cDNA模板(稀释20倍) 2 μL，正反向游引物各1 μL，ddH2O 6 μL。反应条件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共42个循环。采用2-ΔΔCt相对定量法计算Angpt1、Angpt2 mRNA的相对表达量并计算Angpt2/Angpt1比值。其中7500型ABI实时荧光定量PCR仪购自美国ABI公司；SMA2000超微量紫外分光光度计购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.2.2 脑梗死病人预后评估 所有急性脑梗死病人出院3个月后均采用改良Rankin量表(Modified Rankin Scale，mRS)评定预后情况，mRS评分为≤2分为预后良好，>2分为预后不良[8]。本研究中急性脑梗死病人中预后良好86例(预后不良组)和预后不良22例(预后良好组)。

1.2.3 观察指标 所有研究对象均于入组后抽取空腹静脉血5 mL，应用日立7170A型全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特公司)检测三酰甘油(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)，并记录急性脑梗死病人NIHSS评分。

2 结 果

2.1 两组临床资料比较(见表1)

表1 两组临床资料比较

2.2 不同组别Angpt2/Angpt1比值及NIHSS评分比较 与对照组比较，脑梗死组及不同神经功能缺损程度病人血清Angpt2表达水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS评分均升高(P<0.05)，且重度组与中度组高于轻度组(P<0.05)，重度组高于中度组(P<0.05)。与对照组比较，脑梗死组病人及不同神经功能缺损程度病人血清Angpt1水平降低(P<0.05)，且重度组与中度组低于轻度组(P<0.05)，重度组低于中度组(P<0.05)。详见表2。

表2 不同组别Angpt2/Angpt1比值及NIHSS评分比较(±s)

2.3 脑梗死病人Angpt2/Angpt1比值与NIHSS评分的相关性分析 Pearson相关性分析结果显示：Angpt2/Angpt1比值与NIHSS评分呈正相关(r=0.463，P=0.000)，详见图1。

图1 脑梗死病人Angpt2/Angpt1比值与NIHSS 评分相关性分析的散点图

2.4 影响脑梗死病人预后的单因素分析 根据mRS评分将脑梗死病人预后分为预后良好组(86例)与预后不良组(22例)，其中预后良好组mRS评分为(1.26±0.41)分，预后不良组为(4.85±1.55)分，两组比较差异有统计学意义(t=-19.227，P=0.000)。将影响脑梗死病人预后的因素进行单因素分析，结果显示：预后不良组年龄、收缩压、NIHSS评分、Angpt2/Angpt1比值均高于预后良好组(P<0.05)。详见表3。

表3 影响脑梗死病人预后的单因素分析

2.5 影响脑梗死病人预后的多因素Logistic回归分析 Logistic多元回归分析结果显示：年龄、NIHSS评分、Angpt2/Angpt1比值均为影响脑梗死病人预后的独立危险因素(P<0.05)。详见表4。

表4 影响脑梗死病人预后的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

脑梗死病人脑细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)等炎性因子并引发有害的神经毒性反应。有研究显示，机体炎症反应和脑梗死发生及发展过程与神经功能缺损程度密切相关[9]。炎性因子释放进一步加重病体内炎症反应，增加血管通透性，导致神经功能恶化[10]。早期采取干预措施可有效改善脑梗死病人预后，因此，寻找简便有效的监测指标对提高疗效及改善病人预后具有重要意义。

血管生成素作用于血管内皮细胞且具有特异性，其中Angpt1可维持并保护血管内皮稳定，而Angpt2破坏血管稳定并促进内皮细胞增殖，与Angpt1之间存在拮抗作用[11]。Angpt1通过分泌糖蛋白促使内皮细胞酪氨酸磷酸化在血管发育及生成过程中发挥重要作用；Angpt2属于分泌型细胞因子并特异性作用于Tie-2，可抑制Angpt1对血管的保护作用，并促使血管结构松解进而促进血管形成，增加内皮细胞对血管内皮生长因子(VEGF)敏感性，促进血管新生[12-13]。有研究表明，VEGF可上调Angpt2表达进而促进血管增生[14-15]。相关研究表明，Angpt2具有促血管生成与致炎双重作用，并可作为判断疾病进展及预后的新型标志物[16]。有研究显示，黄体血管结构变化与Angpt2/Angpt1比值有关，早期与发展期黄体血管新生Angpt2/Angpt1比值升高，中、晚期血管内皮细胞退化Angpt2/Angpt1比值降低[17]。

本研究按照神经功能缺损程度将脑梗死病人分为轻度组、中度组与重度组，结果显示脑梗死组病人及不同神经功能缺损程度病人血清Angpt2表达水平、Angpt2/Angpt1比值及NIHSS评分均高于对照组，且重度组高于轻度组、中度组；血清Angpt1水平降低，重度组低于轻度组、中度组，说明Angpt1、Angpt2参与脑梗死发生过程，Angpt2/Angpt1比值随着脑梗死病人神经功能缺损程度加重明显升高。进一步分析脑梗死病人Angpt2/Angpt1比值与NIHSS评分关系，结果显示Angpt2/Angpt1比值与NIHSS评分呈正相关，提示Angpt2/Angpt1比值可反映脑梗死病人神经功能缺损程度。

脑梗死病人血压升高损害血管内皮功能并加重血管炎症反应及氧化应激反应，导致病人预后差[18]。高NIHSS评分是脑梗死病人预后不良的危险因素，病人神经功能缺损程度升高可增加预后不良风险[19]。本研究根据mRS评分将脑梗死病人分为预后良好组与预后不良组，分析影响脑梗死病人预后的相关因素，结果显示预后不良组mRS评分高于预后良好组；随着脑梗死病人年龄增加、收缩压、NIHSS评分及Angpt2/Angpt1比值升高病人预后越差。本研究采用Logistic多因素回归分析脑梗死病人预后的影响因素，结果显示年龄、NIHSS评分、Angpt2/Angpt1比值均为影响脑梗死病人预后的独立危险因素，提示年龄、NIHSS评分、Angpt2/Angpt1比值与脑梗死病人预后有关，可用于判断病人预后。

综上所述，脑梗死病人Angpt2/Angpt1比值升高，且与神经功能缺损程度有关，Angpt2/Angpt1比值越高病人预后越差，监测Angpt2/Angpt1比值变化有助于判断脑梗死病人病情进展及预后。本研究存在不足：关于Angpt2与Angpt1及Angpt2/Angpt1比值在脑梗死疾病进展及神经功能缺损中的具体调控作用机制有待深入研究。