人用流感疫苗鸡胚孵化技术要点

毛东有 李丽华 王志强 黄秀英

中图分类号：S831.3+2     文献标识码：C     文章编号：1673-1085（2020）7-0031-02

流感是威胁人类健康的重要疾病之一，疫苗接种是当前人类防控流感流行的有效手段之一。随着生物技术的发展，人用流感疫苗的种类越来越多，全病毒灭活疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗等均已经上市使用。流感病毒的培养主要依靠鸡胚尿囊腔接种繁殖，但随着生物技术发展，受到蛋源紧张的控制，细胞培养等生产技术逐步进入流感病毒的生产环节，但目前绝大多数的流感疫苗的生产仍然依靠鸡胚接种。鸡胚质量将直接影响着疫苗的质量，所以本文对生产流感病毒所用鸡胚的种蛋、孵化、运输等相关控制环节进行介绍，以供参考。

1  种蛋选择

1.1  种鸡品种、代次选择  人用流感疫苗的生产主要使用白壳蛋鸡生产的种蛋。选择白壳蛋鸡生产疫苗的优势主要是其在照蛋生产方面的方便性，并且白壳蛋鸡的抗病能力强。产白壳蛋的蛋鸡品种主要有京白1号，海兰白w-36、罗曼白等。所用代次最好选择为父母代种鸡，因为父母代种鸡的净化程度较高，并且种鸡的受精率较高，能够满足大规模生产所用，节约成本。

1.2  种鸡健康的控制  生产种蛋的鸡群必须为健康种鸡，鸡群健康：一方面需保证无垂直传播性疾病和烈性传染病等，主要包括无白痢、无肠炎、无鼠伤寒沙门氏菌、无白血病、无传染性贫血、无病毒性关节炎、无禽流感、无新城疫等疾病;另一方面种鸡的饲料、药物等需重点关注，饲料中不能含有国家禁止使用的三聚氰胺;在种蛋收集期间不得使用产蛋期禁用药物，避免出现药物残留;种蛋收集期间不能进行活疫苗免疫，活苗免疫可能引起不同程度鸡胚尿囊液浑浊;最后种鸡的抗体水平需在标准保护值之上。

1.3  孵化种蛋的选择  孵化所用种蛋必须是符合要求的种蛋。蛋形指数好，无沙皮，无破损、无粪污、无蛋清等污染物，即必须保证蛋表面清洁。孵化所用种蛋蛋重必须在53g以上，72g以上或过小的蛋重会影响尿囊液的收液量。已有研究表明，鸡胚重对尿囊液有极显著的影响，随胚重增加，尿囊液量增多[1];但过大的蛋重由于生产模具的影响容易受到破损。在规模化机械化生产过程中，需要剔除过大、过小种蛋，所用种蛋的受精率需要保证在90%以上。

2  孵化前准备

2.1  种蛋的处理  种蛋储存时间不能超过7d，储存温度需控制在13～21℃之间，湿度控制在60%左右即可。种蛋在入孵前码放至孵化车后需进行熏蒸处理，可使用24mL/m3的甲醛溶液配合12g的高锰酸钾熏蒸30min，并且熏蒸后对蛋表微生物进行监测，微生物需严格控制在1×102个数量级以下。孵化前要对所用的种蛋进行分级处理并码放在孵化器中备用，因为在同等孵化条件下，特大蛋孵化前期受热慢，容易造成弱胚;特小蛋受热快，发育比大蛋快，胚胎重量增加，尿囊液量减少[2]。在对种蛋分级处理前要对分级处理的设备进行校正，以保证使用的种蛋符合厂家的要求。

2.2  孵化设备的处理  孵化设备在使用前必须经过校验处理，以保证孵化过程中的温、湿度的均衡以及数据显示的准确性。孵化机和孵化车需要进行熏蒸消毒处理;孵化所用塑料用具需要进行浸泡消毒，浸泡消毒前需先清理好塑料蛋盘上的污物如蛋清、蛋黄及灰尘等污染物，浸泡消毒可以使用1%的氢氧化钠、2%的戊二醛溶液，浸泡时间不少于30min，浸泡消毒后再进行熏蒸消毒，以保证孵化所有物品的清洁度。

3  孵化过程中控制

鸡胚在孵化过程中需要提供足够的温度、湿度、氧气和时间才能保证鸡胚的正常生长。

孵化温度需控制在38.0～38.2℃之间，孵化时间在10d左右。有研究表明，孵化积温控制在9180以下能够有效的将胚重控制在3.5g以下，更低的积温可以获得更小的胚重，但胚重不能太低，因为过低的积温将影响胚胎的正常发育[3]。10日龄孵化胚蛋的小头血管合拢，可作为合格胚蛋的标准之一。

分级后的种蛋在孵化过程中的施温时间有所不同，大级别种蛋由于其前期加热慢，需要提前2～3h提前预温，保证与中小级别种蛋同时达到恒温。

孵化湿度需控制在70%左右，湿度过大会影响胚蛋内水分蒸发和胚胎发育，并且在鸡胚尿囊液收获时，影响胚蛋的削壳工作，引起尿囊液的污染和浪费。湿度低于70%时，蛋内的水分蒸发过快导致胚胎发育不良，接种后的尿囊液量会减少，并且影响抗原含量[4]。

孵化过程中，每两个小时需进行一次翻蛋处理，保证鸡胚在孵化过程中受热均匀，长时间不翻蛋会造成鸡胚血管发育的不均匀，血管不能合拢。

种蛋孵化至6日龄时要进行种蛋发育程度的抽查，抽查种蛋的受精率和发育程度，以便及时进行生产计划的调整。抽查后要对孵化机及胚蛋进行熏蒸处理，可用24mL/m3甲醛、12g高锰酸钾熏蒸20min。在熏蒸过程中，要注意高锰酸钾喷发，导致蛋表面受到污染。

种蛋在孵化至9.5d需要对所有入孵种蛋进行照检。照检过程中剔除脏蛋、胚蛋发育弱的、沙皮蛋、畸形蛋、气室晃动、破损蛋。照检完毕后，将胚蛋进行熏蒸消毒20min，或者使用臭氧消毒30min，继续进行孵化0.5d。

4  胚蛋运输

首先将照檢好的鸡胚从孵化车上移入疫苗厂家提供的接种用种蛋盘中，种蛋盘在使用前需进行消毒处理，胚蛋转移的空间需进行熏蒸消毒，转移胚蛋人员穿戴消毒好的工作服，并且穿戴口罩、手套等防护用具。

将种蛋盘转入种蛋箱或者专用种蛋车运输到疫苗厂家，运输过程中要有相应的温度记录，温度需控制在30～38℃之间，以保证鸡胚的活力。在运输过程中要保证轻拿轻放，避免颠簸造成鸡胚气室晃动，影响鸡胚接种。

综上所述，只有高标准的种蛋、高标准的孵化环节、高标准的消毒管理才能够保证人用流感疫苗的高效生产。保证生产质量的同时提升工作效率，为人类的健康保驾护航。

参考文献：

[1]  周杰，曾明华，魏建忠，等.鸡胚尿囊液与鸡种的相关性研究.[J].中国家禽，1998，20（7）：10-11.

[2]  张爱丽，潘大耐.蛋重对10日胚龄种蛋尿囊液量的影响[J].中国家禽，2016，38（7）：54-55.

[3]  王晓亮，蔡霞，陆军，等.人流感疫苗生产用鸡胚蛋质量指标研究[A].第十六次全国家禽学术研讨会论文集[C].扬州：中国畜牧兽医学会家禽学分会，2013：504.

[4]  孙爱喜.大型生物制药厂的病毒鸡胚培养[J].当代畜禽养殖业，2015，10：4-6.