生鲜乳抗生素残留检测技术研究

摘 要：目的：研究生鲜乳抗生素残留检测技术。方法：本研究选择4个养殖场作为研究对象，抽取80份生鲜乳样品进行抗生素残留检测，主要结合当前生鲜乳抗生素残留检测要求、生鲜乳抗生素残留检测技术发展趋势，提出生鲜乳抗生素残留检测技术（TTC法），以此来为兽用抗生素规范用药提供参考，致力于提升生鲜乳抗生素残留检测技术水平，保障生鲜乳食品的安全性。结论：TTC法作为临床常用的一种微生物检测法，其能有效应用于生鲜乳抗生素残留检测，且操作简单、成本低，值得推广应用。

关键词：生鲜乳;抗生素残留;检测技术;措施

Abstract：Objective： To study the detection technology of antibiotic residues in fresh milk. Methods： in this study， four farms were selected as the research object， and 80 samples of fresh milk were selected for antibiotic residue detection. Combined with the current requirements of antibiotic residue detection in fresh milk and the development trend of antibiotic residue detection technology in raw and fresh milk， TTC method was proposed to provide reference for the standardized use of antibiotics for veterinary use The detection technology level of antibiotic residues in fresh milk can ensure the safety of fresh milk food. Conclusion： TTC method， as a commonly used microbial detection method， can be effectively applied to the detection of antibiotic residues in fresh milk， with simple operation and low cost， which is worthy of promotion and application.

Key words：Fresh milk; Antibiotic residue; Detection technology; Measures

中图分类号：S859.84

现阶段，生鲜乳中存在的抗生素残留问题是最为主要的药物残留因子。根据实际情况进行分析，发现在奶牛饲养、产品加工过程中仍旧存在滥用或者大量应用抗生素问题，其必然会导致奶制品存在抗生素残留问题，严重威胁人们的身体健康[1]。从来源层面进行分析，生鲜乳抗生素残留的来源：①养殖场治疗泌乳期乳牛疾病选择抗生素进行治疗，抗生素会从乳牛体内逐渐进入乳腺，并在乳腺中残留。根据有关统计数据可知，在使用抗生素治疗后的5 d内，奶牛产的奶中都存在抗生素残留。②为有效预防奶牛疾病，同时提高产奶量，部分养殖户会在饲料中添加抗生素，引发抗生素残留问题。③因为养殖场管理工作不完善，在挤奶、储奶方面没有严格落实对应的卫生制度，或是配套设施不够完善，也会因为人为添加因素引发抗生素残留问题[2]。对生鲜乳抗生素残留问题，不仅需要加强饲养管理、监管，同时还需要科学合理的应用生鮮乳抗生素残留检测技术，提升检测的精准度，以此来有效控制生鲜乳的抗生素残留问题，保障生鲜乳的安全性。

1 材料与方法

1.1 样品选择

本研究分别选择A、B、C和D共4个养殖场，随机选择80份生鲜乳样品，其中A区16份样品，B区24份样品，C区20份样品，D区20份样品。

1.2 菌种、试剂以及仪器

菌种：嗜热乳酸链球菌;培养基：MC培养基;试剂：TTC（2，3，5一氯化三苯基四氮唑）;仪器：灭菌试管、灭菌吸管、100 ℃温度计、天平、恒温培养箱、水浴锅、温箱。

1.3 检测方法

（1）生鲜乳抗生素残留检测技术。选择GB 5409-

1985TTC法进行检测。综合参考生鲜乳抗生素残留检测要求，先在生鲜乳制品中融入菌种，进行一段时间培养后，接着融入TTC指示剂，最终试剂会呈现出多种颜色，以此来明确生鲜乳样品当中存在的抗生素[3]。生鲜乳样品当中的菌种没有增殖情况，则不会出现还原显色情况;而生鲜乳样品当中的菌种能够增殖的情况下，则会呈现为红色。

（2）生鲜乳样品采样处理。每类生鲜乳样品选择500 mL，进行消毒处理以后，将瓶盖盖上，选择25 mL作为备检样品，将其置入225 mL灭菌生理盐水当中，均匀摇晃处理。将实验室温度控制为15 ℃，

3 500 r·min-1离心10 min。在进行离心处理后，去掉最高层脂肪，然后将下面的脱脂乳放入其他装置当中，进行保存。

（3）菌种移种（嗜热链球菌）。脱脂乳为培养基，将其置入恒温培养箱中培养，温度36 ℃，培养15 h，接着针对脱脂乳进行灭菌处理，遵循1∶1的比例实施释放、储存。

（4）试验指示剂进行调制处理。称取标准品TTC1 g，将其放入烧杯当中，然后在烧杯当中倒入24 mL蒸馏水。等到混合均匀以后，将其放入棕色瓶，放置于7 ℃的环境中。在实际使用进程中，需要按照1∶5的比例进行稀释处理。倘若使用前溶液颜色为淡褐色、玉色，表示其变质，不能用于检测。

1.4 检测流程

①生鲜乳样品加热处理。将前面环节制作好的生鲜乳样品取出9 mL，将其倒入试管（16 mm×160 mm），通过水浴进行加热，使其温度达到80 ℃的恒温，持续5 min，等到加热完成以后，自然冷却到37 ℃。②接种处理。把1 mL活性菌液置入水浴（36±1）℃当中进行培养，培养时间需要达到2 h。③显色处理。按照1∶5的比例，针对TTC指示剂（4%浓度）实施稀释处理，选择稀释完的溶液0.3 mL，将其置入水浴培养，进行0.5 h的培养处理，并观察培养之后的颜色。④复检处理。对于复检的生鲜乳样品，准备一式2份，若第一次检测结果属于阳性，则需要实施二次检测处理。与此同时，还需要进行阴阳性对照组对比分析。对于阴性对照组来说，主要是在没有抗生素的生鲜乳（9 mL）当中添加菌液;对于阳性对照组来说，主要是在在没有抗生素的生鲜乳（8 mL）当中添加TTC、抗生素、菌液[4]。

1.5 试验判断处理

对生鲜乳抗生素残留检测结果判断来说，即完成1.4中前3步检测流程后，观察培养液颜色变化情况。整个结果判断要快速，进行避光处理。若生鲜乳样品中存在抗生素残留情况，通过融入菌液培养，细菌不会增殖，由于添加的指示剂不会被还原，这就使得颜色不会发生变化;若生鲜乳样品中没有抗生素残留情况，通过融入菌液培养，细菌会出现增殖情况，由于添加的指示剂被还原，则导致培养液转变为红色。

2 结果与分析

此次A、B、C和D共4个抽样地点所选取的80份生鲜乳样品，其中A养殖场2份阳性，C养殖场4份阳性。此外，还存在4份可疑阳性，B养殖场与C养殖场各2份。具体检查结果见表1。

针对本研究检测结果存在的4份可疑阳性样品实施再次检验，最终确定均属于阴性。从整体检查结果来分析，此次检查的生鲜乳样品阳性为6份，生鲜乳抗生素残留检查结果为7.5%。

3 讨论

根据本研究生鲜乳抗生素残留检测结果来看，综合参考农业部《无公害食品生鲜牛乳行业标准》，其明确提出生鲜乳卫生标准为抗生素不得检出[5]。由此可以看出，当前部分养殖场在质量管理工作方面还存在一定的疏漏，包括市场监管、食品安全监管等领域，因此加强生鲜乳抗生素残留监管势在必行。需积极分析生鲜乳抗生素残留检测工作常见影响因素，致力于加强生鲜乳抗生素残留检测工作的同时，全面加强生鲜乳监管力度。

3.1 生鲜乳抗生素残留检测影响因素及控制措施

对生鲜乳抗生素残留检测来说，存在诸多因素影响最终的监测结果，包括实验环境、设备因素、人为操作等。对实验室管理来说，内部环境、各实验平台均需要严格按照要求进行清潔、消毒处理，同时选择的各种仪器设备均需要按照要求进行检定、校正，保障仪器设备本身的规范性[6]。与此同时，生鲜乳抗生素残留检测涉及的各个玻璃器皿均需要进行灭菌处理，通常需要在121 ℃的环境中进行0.5 h的灭菌处理。

3.2 加大养殖场监督管理工作的措施

综合参考上文所述生鲜乳抗生素残留的原因，制定针对性的养殖场监督管理措施：①基于规范疫苗防治各种疫病。各个养殖场在进行疫病防治的进程中，需要全面强化疫病监测、诊断工作，综合参考养殖场各个地区常见疫病类型，结合对应的监测依据，按照要求选择疫苗开展预防工作，保障各种疫病的未病先防。如果在已经发生疫病的情况下，若诊断尚不够明确，则需要控制抗生素的应用，等到明确确诊以后，再严格按照要求进行治疗。②提升奶牛饲养管理水平。对奶牛饲养管理不当所引发的生鲜乳抗生素残留问题，必需全面加强奶牛饲养管理工作，减少奶牛发生疾病几率。具体来说，对奶牛的饲养来说，需要开展分阶段、分群体标准饲养管理，同时有关的饲料也需要严格按照要求进行科学搭配、合理应用，并且需要参考奶牛状态、季节差异性进行饲料的搭配，保障饲料能有效满足不同阶段奶牛对于营养的需求。③落实抗生素药敏试验工作。养殖场在需要使用抗生素的情况下，必需要严格按照要求落实抗生素药敏试验工作，避免盲目使用抗生素的问题，从而有效提升抗生素使用的科学性、规范性，保障临床治疗效果。④加大环境卫生控制力度。综合参考奶牛健康养殖方面的要求及有关标准，分别针对养殖场涉及的圈舍、布局、场址、设施等领域实施优化，保持养殖场的清洁、干净，避免环境对奶牛养殖造成二次污染问题。

参考文献：

[1]王 婷，陈明涛.基于多反应监测模式下的超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中19种氟喹诺酮类抗生素残留[J].食品安全导刊，2020（7）：66-70.

[2]张 睿，刘 妤，金丽琼，等.不同净化方式在聚醚类抗生素残留检测中应用[J].食品与发酵科技，2020，56（1）：116-119.

[3]李周敏，李心爱，姚开安，等.可视化蛋白芯片法同时检测牛奶中喹诺酮类抗生素残留的含量[J].药物分析杂志，2019，39（6）：1139-1147.

[4]方 灵，韦 航，黄 彪，等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶中38种抗生素残留[J].分析测试学报，2019，38（6）：681-686，692.

[5]刘彦东，张 权，陈文生，等.高效液相色谱法比较3种固相萃取柱净化对乳品中8种抗生素残留检测的影响[J].分析测试学报，2015，34（3）：362-366.

[6]舒黛廉，王 珏.乳及乳制品中抗生素残留微生物检测法研究进展及其控制措施[J].中国畜牧兽医，2008（1）：74-77.

作者简介：钟红萍（1991—），女，助理工程师;研究方向为生鲜奶抗生素检测。