尘肺并发肺结核患者外周血CD4+、CD8+T细胞计数和ADA水平改变及临床意义*

王 维，何 杰，周 取，刘文彬

1.重庆市第六人民医院实验医学中心，重庆400060；2.重庆市人文科技学院计算机工程学院，重庆 401524；3.重庆大学附属肿瘤医院肝胆胰肿瘤科，重庆 400030

尘肺病是由于工人长期吸入的矿物性粉尘在肺内潴留所致的以组织弥漫性纤维化为主要病变的全身性疾病，是我国发病率最高、危害最严重的职业病[1]。若粉尘长时间滞留在肺中，可直接或间接介导肺巨噬细胞、成纤维细胞和胶原蛋白积累，导致进行性缺血性坏死，间质纤维化和呼吸衰竭[2]。尘肺患者肺组织纤维化和大量巨噬细胞损伤等因素，为结核分枝杆菌的感染提供了有利机会，使肺结核成为尘肺病常见的并发症，也进一步加速了尘肺患者病情发展[3-4]。有研究指出，尘肺病患者免疫细胞会延缓肺部纤维化并加速炎症的消退，提示尘肺病患者免疫系统调节功能存在缺陷[5]。腺苷脱氢酶(ADA)在T淋巴细胞发育和分化中发挥着极其重要的作用，其活性与免疫功能密切相关，是活动性肺结核辅助性T淋巴细胞的重要标志物[6]。同时ADA对体内积液的结核感染具有一定的诊断价值。鉴于此，本文将对尘肺并发肺结核患者的外周血CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数和血清ADA水平进行特征分析，试图通过对比研究探讨其临床意义，为尘肺并发肺结核感染的预防和治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年 1 月至 2019 年11 月重庆市第六人民医院门诊及住院54例尘肺患者(尘肺组)和尘肺并发肺结核患者34例(尘肺并发肺结核组)作为研究对象，其诊断标准参照 GBZ70-2015《职业性尘肺病的诊断》和WS288-2017《肺结核诊断》标准[7-8]。排除骨折与骨质疏松、严重内分泌疾病和/或严重代谢疾病及严重肝、肾疾病患者。尘肺组中男39例、女15例，平均年龄为(56.9±1.9)岁；尘肺并发肺结核组中男25例、女9例，平均年龄为(59.6±2.7)岁。另选取本院体检健康者33例作为对照组，其中男18例、女15例，平均年龄为(46.2±1.8)岁，对照组均无肺部疾患、无其他病变且各项生化、影像等检测指标和表现均正常。

1.2方法 采集所有选入对象清晨空腹外周静脉血6 mL，其中2 mL加入乙二胺四乙酸二钾抗凝管中,混匀后用于检测CD4+、CD8+T细胞计数,另4 mL分离血清后检测ADA水平。CD4+、CD8+T细胞计数检测系统为SemiBio CD，仪器试剂均购自上海汇中细胞生物科技有限公司。细胞计数操作过程严格按说明书进行，主要分为稀释血样、孵育、洗染和计数，最后采用SemiBio CytoCounter 全自动细胞可视化检测系统对玻片上的细胞放大成像，高速、精确扫描玻片上固定的细胞后自动定位、聚焦，根据特异性细胞标志识别并得出结果。血清ADA使用速率法在贝克曼 AU5800全自动生化分析仪进行检测，检测试剂采用重庆中元生物技术有限公司。

2 结 果

2.1各组CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数、CD4+/CD8+T细胞比值结果比较 尘肺组和尘肺并发肺结核组CD4+T细胞计数均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。与尘肺组相比，尘肺并发肺结核组CD4+T细胞计数明显减少，差异具有统计学意义(P<0.05)。尘肺组和尘肺并发肺结核组CD8+T细胞计数均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。尘肺组CD8+T细胞计数高于尘肺并发肺结核组，差异有统计学意义(P<0.05)。尘肺并发肺结核组CD4+/CD8+T细胞比值均低于对照组和尘肺组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1。

表1 各组CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数、CD4+/ CD8+ T细胞比值结果比较

注：NS表示两组比较差异无统计学意义。

2.2各组ADA水平比较 对照组、尘肺组和尘肺并发肺结核组血清ADA水平分别为(11.47±3.97)U/L、(13.01 ±3.28)U/L和(20.79±4.78)U/L，尘肺并发肺结核组血清ADA水平均高于对照组和尘肺组，差异有统计学意义(P<0.05)。见图2。

图2 各组血清ADA水平比较

2.3CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数与ADA水平相关性分析 尘肺组中CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数与血清ADA水平呈正相关(r=0.11、0.17，P=0.43、0.23)；尘肺并发肺结核组CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数与血清ADA水平呈负相关(r=-0.36、-0.31，P=0.03、0.07)。

3 讨 论

尘肺患者因长期被粉尘刺激，气道发生炎症引起分泌物增加，气道清除功能减弱，易被微生物定植和侵入。由于尘肺患者肺组织纤维化和部分免疫细胞吞噬清粉尘后裂解释放炎症因子等进一步加剧肺组织损伤，为结核分枝杆菌的生长繁殖创造了极好条件，使肺结核成为尘肺病常见的并发症[3]。当尘肺并发肺结核后，结核分枝杆菌引的起免疫应答及病理改变使得病情进展迅速，病死率远高于普通尘肺患者[3]。尘肺患者并发肺结核确诊主要依赖于痰涂片、培养和病理学证据，但痰涂片、培养和病理学检查阳性率较低，受取材等影响，易出现漏诊。因此，寻找尘肺并发肺结核感染的实验室检测指标，及时诊治，对改善患者的病情，有效控制肺结核在尘肺患者中的传播意义重大。

肺结核的发生、发展和转归不仅与细菌的载量和毒力相关，而且受宿主免疫功能的影响[9-10]。宿主肺结核免疫以细胞免疫为主，也是反映宿主免疫功能的重要指标[11]。为进一步探讨T淋巴细胞在尘肺并发肺结核中的作用，本研究比较了对照组、尘肺组和尘肺并发肺结核组CD4+T细胞计数和CD8+T细胞计数，与前期研究结果一致[12]，尘肺并发肺结核组CD4+T细胞计数和CD8+T细胞计数远低于对照组和尘肺组，提示CD4+T细胞计数和CD8+T细胞计数检测有望成为尘肺患者并发肺结核感染的辅助诊断指标。

ADA是体内参与嘌呤核苷酸代谢的酶类，主要存在于肺组织和部分淋巴细胞中[13]。在肺结核患者体内，T 淋巴细胞吞噬结核分枝杆菌后被破坏，大量ADA释放入血，因此表现出患者受到结核分枝杆菌的感染时血清中ADA水平增加[14]。本研究发现，与对照组和尘肺组相比，尘肺并发肺结核组血中CD4+和CD8+T细胞计数都明显减少，但ADA水平却明显增加，且CD4+T细胞计数与ADA水平呈负相关。本研究结果提示，动态监测尘肺患者淋巴细胞计数和ADA水平变化趋势对并发肺结核感染的诊断具有一定的意义。

综上所述，动态监测尘肺患者外周血T淋巴细胞和ADA水平对提示尘肺并发肺结核感染具有临床意义。本研究的局限性在于未对各组T淋巴细胞计数和ADA水平绘制受试者工作特征曲线分析其在尘肺并发肺结核病诊断中的灵敏度和特异度。用最佳临界值来鉴别尘肺患者是否伴发结核感染还需进一步扩大样本量来探讨。