不同药物处理及不同开口饵料对金波子鱼受精卵孵化和稚鱼存活的影响

黄毅 洪宇航 王尤潘 彭海

摘要：以金波子鱼（Papiliochromj ramLrezL）为对象，研究3种药物制剂（复方五倍子煎剂、庆大霉素、呋喃西林）对金波子鱼受精卵孵化率的影响以及3种开口饵料（蛋黄粉、草履虫和人工超微粉料）对金波子稚苗存活率的影响。结果表明，添加复方五倍子组孵化率最高，达到了（ 81.22+6.52）%，显著高于其余两组（P<0.05），且未发现畸形稚苗。因此，在金波子受精卵孵化时添加复方五倍子可显著提高孵化率。使用人工超微粉料作开口饵料的小组稚苗7 d存活率最高，达到（91.33+3.06）%，显著高于其余两组（P<0.05）。因此，人工超微粉料较适合作为金波子稚苗的开口饵料。

关键词：金波子鱼（Papiliochromis ramirezi;药物;孵化率;开口饵料;存活率

中图分类号：S948

文献标识码：A

文章编号：0439-8114（ 2020）12-0117-04

D01：10.1408 8/j .cnki.issn043 9- 8114.2020.12.026

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

热带观赏鱼作为一种世界性的观赏鱼，随着人民生活水平的不断提高，饲养热带观赏鱼的人群越来越大，消费市场极其广阔。金波子魚（Papiliochromisramirezi），属于丽鱼科（Cichlidae）彩蝶鲷属（Papilio-chromis），原产于南美洲委内瑞拉、哥伦比亚境内[1]。其是荷兰凤凰经人工选育培育出的人工新品种，是最受欢迎的短鲷之一。金波子成鱼体长6-9 cm，雄鱼体狭长，体色较深;雌鱼腹部膨大，体色较淡。该品种饲养水质pH 6.5-7.0，水温25-28℃。在水温合适、水质良好、饵料充足的环境中，7d可繁殖1次，每次产卵400枚，体质较强者产卵可达500枚，孵化时间3-4 d。金波子经济价值较高，目前市场价值成鱼每尾十几元至几十元不等，可与其他品种的观赏鱼混养。中国金波子市场，以东部沿海城市居多，而在广阔的内地市场仍属于新兴产业，市场潜力巨大。

虽然金波子鱼成鱼饲养相对容易，但其受精卵孵化则相对困难，生产中常出现孵化率较低、初孵稚鱼存活率低下等问题。在自然状态下，受精卵在孵化的过程中易受到水体中水霉菌、细菌等病原微生物的感染，影响孵化率甚至导致孵化失败。常用的抗生素类，如庆大霉素、呋喃西林、孔雀石绿等药物杀菌作用虽然较强，但具有高残留性及强致癌、致畸等缺点，目前已在食用鱼生产中禁止使用。在观赏鱼产业中，由于没有明文规定，因此仍在继续使用，但其强毒性及致畸效应仍对受精卵孵化及稚鱼健康生长产生一定影响[2]。由于中草药抗药性和残留性低的特点，近年来，已越来越多应用到水产养殖行业中。其中，五倍子、黄芩、黄柏、大黄等中草药由于其具有对水产动物常见致病菌，如嗜水气单胞菌、溶藻弧菌及迟钝爱德华氏菌等的强抑制作用以及较好的抗炎消毒效果，已被广泛应用于养殖生产中[3]。但目前中草药制剂在水产行业的应用主要集中于食用鱼、观赏鱼方面则鲜有报道。在绿色环保、健康高效水产的理念下，抗生素类的药物不被提倡使用或被禁用。因此如何在养殖过程中选取最经济有效且环保的药物预防以水霉为主的各类病原微生物感染，提高孵化率，将成为观赏鱼繁殖的一项重要工作[4]。

在金波子鱼繁殖过程中，鱼苗出膜后体质较弱，卵黄囊消失后如果得不到合适的饵料作为营养补充，将造成鱼苗的大量死亡，大大降低成活率。由于目前金波子鱼开口饵料的研究较少，无法为科学育苗提供饵料方面的指导，各大养殖场普遍存在稚鱼存活率较低的情况，使得整个行业鱼苗供不应求。因此，开口饵料开发程度较低已成为制约金波子鱼产业发展的重要因素。传统的开口饵料如豆浆、蛋黄[5]等虽然价格低廉容易获得，然而容易引起水质恶化，造成稚鱼的死亡，直接影响育苗的成败。而生物饵料如草履虫[6]、轮虫[7]等由于具有营养成分全面、规格多样、可获得性佳且不容易败坏水质等特点，在整个养殖过程中可以保持水质稳定，减少因水质恶化而引起的幼苗死亡情况的发生。此外，目前各大水产公司应对开口饵料问题，均推出超微颗粒饲料，其在初孵幼苗的存活方面也起到较好的效果。

因此，在本次试验中比较了3种不同药剂（复方五倍子煎剂、庆大霉素和呋喃西林）和3种不同饵料（蛋黄粉、草履虫和人工超微粉料）分别对金波子鱼受精卵孵化及初孵稚鱼存活的影响，以期筛选最有效的药物和饵料组合以提高孵化率和稚鱼成活率，为规模化养殖提供一定的理论指导，促进金波子鱼的产业化发展，提高经济效益。

1 材料与方法

1.1 试验材料

金波子鱼种鱼购自广州市花地湾观赏鱼市场。试验于2018年3-5月在西昌学院动物科学学院进行。试验前种鱼在125 cmx60 cmx60 cm循环水族缸中暂养2周以上，水温28℃，pH 6.5-7.0，溶氧量>6mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亚硝酸盐<0.15 mg/L。按雌雄比例1：1放人孵化网中暂养，为保证试验顺利进行，共准备50对亲本备用，种鱼投喂经消毒处理的水蚯蚓，每天3次，时间分别为9：00、15：00、19：00。挑选体型健壮、无病无伤、无畸形、成熟度较好的金波子鱼为试验对象。

开口饵料中，蛋黄粉通过购买当地新鲜鸡蛋，煮熟后按照每个蛋黄加入50 mL去离子水制成蛋黄粉悬液;草履虫通过稻草液自行培养;人工超微粉料选择广州利洋公司生产“利饵多”（主要成分为活性生物蛋白、有益微生物，酵母细胞数≥1X10⁶个/g）。

复方五倍子煎剂制备：五倍子20 g、大黄15 g、黄柏15 g、黄岑15 g、土茯苓15g、炒白术15 g，将所有中草药加入2L去离子水先浸泡2h，大火煮沸，在微火下熬制30 min，纱布过滤后备用。

1.2不同药物对金波子鱼受精卵孵化的影响

将发情亲鱼放人规格为25 cmx15 cmx20 cm水族缸中，每个缸中放置2个洗净并经消毒的贝壳作为产卵场。待亲鱼自然交配后，将同一批受精卵随机分为4组放人预先准备好曝气水的水族缸中，其中A组加入复方五倍子煎剂，B组加入庆大霉素，C组加入呋喃西林，D组为空白对照组，不添加任何药物。每小组设3个平行。参照预试验结果及相关资料，最终确定的药物浓度分别为复方五倍子煎剂20mg/L[8]，庆大霉素25 mg/L，呋喃西林25mg/L。各水族缸保持与暂养时相同水质条件。观察并记录各组受精卵孵化情况，并计算孵化率。孵化率=出膜鱼苗数/受精卵总数×100%

1.3 不同开口饵料对金波子鱼稚鱼存活的影响

将孵化率最高组的初孵稚鱼用于开口饵料试验，待卵黄囊消失后开始投饵。试验分为3个小组，每组3个平行，每个平行缸放置50尾稚苗，试验周期为7d。其中A组投喂蛋黄粉，B组投喂人工超微粉料，C组投喂草履虫。蛋黄组每个平行缸投喂0.1 g/次，蛋黄水悬液用60目纱网过滤，取上清液投喂;人工超微粉料组每个平行缸投喂0.1 g/次;浓度为40个/mL的草履虫培养液投喂10 mL/次[6]，各组每天均投喂3次，投喂时间分别为9：00、15：00和19：00。喂食完毕及时吸出残饵并换水，每次换水1/4，温差不超过±1℃。观察并记录各组稚鱼存活情况，发现死鱼及时捞出避免污染水质。存活率=成活鱼尾数，放养鱼尾数×100%。

1.4 数据分析

试验数据以平均值±标准差（Mean+SD）表示，用SPSS V20.0统计软件对数据进行统计分析，用Levene法进行方差齐性检验，不满足齐性方差时对数据进行反正弦或者平方根处理，采用ANOVA对试验结果进行方差分析，采用Duncan法进行多重比较，取P<0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 不同药物对金波子鱼受精卵孵化的影响

如表1所示，添加五倍子复方煎剂组孵化率显著高于其余各组（P<0.05），平均孵化率达到（81.22+6.52）%;庆大霉素组孵化率其次，达到（43.47+8.52）%，显著高于呋喃西林组及空白组（P<0.05）;呋喃西林组平均孵化率为（ 27.07+4.54）%，显著高于空白组（P<0.05）。而未添加任何药物的空白组孵化率很低，仅为（1.32±2.28）%。其中，空白组从孵化开始24 h内受精卵死亡数量超过25%;36 h受精卵死亡数量超过50%;至50h几乎全部死亡。

2.2不同开口饵料对金波子鱼稚鱼存活的影响

经过7d培育后，投喂人工超微粉料（利饵多）组金波子鱼稚鱼存活率最高，达到了（91.33+3.06）%，显著高于其余各组（P<0.05）。投喂草履虫组存活率其次，为（83.33+3.06）%。而投喂蛋黄组的金波子鱼稚鱼存活率相对较低，显著低于其余两组（P<0.05）（表2）。

3 小结与讨论

鱼类受精卵在孵化过程中易受到水霉、弧菌等病原微生物感染而引起受精卵死亡，导致孵化失败，因此，在孵化过程中会添加各种抑菌药物以提高孵化效率。近年来，中草药在食用鱼养殖中的使用比较广泛[9-11]，但在观赏鱼养殖中应用较少，且鲜有文献报道。金波子鱼作为近年来国内观赏鱼产业中的热门品种而被广泛关注。但由于缺乏相关繁殖生物学研究报道，其较低的受精卵孵化率及稚鱼存活率成为养殖产业的主要制约因素。本研究中以五倍子、黄芩、大黄等中草药为主的复方煎剂处理后，其受精卵孵化率显著高于其余两种药物及空白对照组，表明复方五倍子中草药煎剂在受精卵孵化过程中的抗菌效果优于其他两种药物。该结果与盛竹梅等L81关于以五倍子为主的中草药对虹鳟发眼卵霉菌感染的影响的结果一致。五倍子主要有效成分为鞣质和没食子酸，对多种细菌、真菌具有明显的抑制能力，且没食子酸能够与蛋白质结合生成鞣酸蛋白，对细菌有直接杀灭作用[1 2]。复方制剂中黄芩和大黄等药物主要通过其活性成分黄芩苷和蒽醌类衍生物对金黄色葡萄球菌等水体致病菌产生强抑菌作用而发挥作用[13，14]。此外，有研究表明，饲料中添加五倍子可以促进罗非鱼生长，增强免疫水平[15];而复方五倍子制剂同样可提高鲫鱼免疫力及抗应激水平[16]，即五倍子复方制剂可显著抑制水体中病原菌，提高金波子鱼的受精卵孵化率。

本研究过程中发现庆大霉素组和呋喃西林组稚鱼均出现有少量歪尾等畸形苗的存在，而中草药组并无发现。呋喃西林具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点，虽然被包括中国在内的多个国家禁止在食用鱼养殖中使用，但目前在观赏鱼行业中仍有使用，并大量应用于水霉病等多发性感染的治疗中[17]。此外，庆大霉素对各类鱼具有较高毒性也多有报道[18.19]。因此，由于抗生素类药物具有药物残留时间长、抗药强、致畸率高等缺点，对孵化过程中的胚胎和刚孵出的稚鱼影响比较大，用量把握不好可能会造成受精卵死亡和稚鱼畸形，建议在观赏鱼中少用。本试验结果也表明，使用五倍子复方制剂促进金波子鱼受精卵孵化的效果要明显优于上述两种抗生素，且短期内无致畸作用。

蛋黄含有丰富的营养物质，如磷脂、矿物质、维生素等，且粒径较小适合稚鱼摄食，因此蛋黄可以基本满足多数稚鱼的需要[5]。但由于在狭小的孵化缸内蛋黄极易造成水质败坏，引起鱼苗死亡，到了投喂后期，稚苗死亡量明显增加[20]，因此在日常投喂中为保持水质清新，降低稚鱼死亡率，需要及时吸出残饵粪便，并且适当注入新水。草履虫经常被用作鱼苗的开口饵料。虽然草履虫的营养价值没有其他人工饵料丰富，而且草履虫一直处于运动状态，对于稚苗摄食有一定的困难，但其作为一种活饵，含有优质蛋白质、氨基酸、脂肪等營养物质，可基本满足稚鱼的营养需求。只要养殖水体水质较好，一般不会引起水质的急剧恶化。所以在鱼苗培育过程中，稚鱼的存活率相对较高[21]。本试验使用蛋黄和草履虫作为开口饵料，金波子鱼稚鱼7d存活率均为50%以上，其中草履虫组达80%以上，效果较好。但由于生物饵料来源安全性及稳定性等问题，在大规模生产中存在一定的制约。超微粒粉料作为人工配合饲料，其使用安全性及营养全面性有着一定的保障。本试验所用利饵多在淡水鱼苗水花、虾苗、蟹苗的培育过程中使用较广，其培育稚苗的存活率可达90%以上。但目前在观赏鱼鱼苗培育过程中尚未广泛使用。由于其成分含有大量生物活性蛋白及酵母菌等有益微生物，在培育稚苗时可以满足稚苗摄食需求和营养需求，而且对养殖水环境具有一定调节作用，不会因为水质的急剧恶化引起稚苗大量死亡。

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基金项目：四川省教育厅一般科研项目（18ZB0554）

作者简介：黄毅（1986-），女，重庆人，助教，硕士，主要从事水生观赏动物养殖方面的研究，（电话）0834-2580034（电子信箱）lemonhuangyi@126.com。