IL-6 和IL-8 在慢性前列腺炎患者精液中的表达及临床意义

甘进，王晓荣

（南昌大学第四附属医院泌尿外科，南昌 330006）

慢性前列腺炎(Chronic Prostatitis, CP)是临床前列腺炎中最常见的类型，是50 岁以下男性患者中最常见的泌尿系统疾病。 以排尿异常及慢性盆腔疼痛为主要临床表现，伴有性功能障碍、精神神经症状的一类综合征[1-3]。 其病因和发病机制尚不明确，探讨慢性前列腺炎的生物学特性，寻找潜在的治疗靶点可能为临床治疗开辟新的途径。

细胞因子介导免疫细胞之间的相互刺激、彼此约束， 在免疫应答的全过程中发挥至关重要的作用[2,3]。 例如，在免疫应答细胞扩增阶段，IL-6 等促炎性因子辅助T、B 细胞的增殖和分化。 在免疫应答的效应阶段，IL-8 等趋化因子吸引炎症细胞进入组织部位，激活巨噬细胞和增强杀伤活性。 从理论上说，任何免疫相关疾病（包括感染性疾病，肿瘤，移植排斥和自身免疫性疾病）都可以通过人为控制（补充，添加，阻断或拮抗）细胞因子的作用加以治疗。

本研究旨在探讨精液中IL-6、IL-8 等细胞因子表达与CP 诊断的关系，为慢性前列腺炎的诊断及治疗效果评估提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机收集从2017 年9 月-2019 年9 月南昌大学第四附属医院泌尿外科门诊就诊的符合美国国立卫生研究院 （National Institutes of Health，NIH）前列腺炎诊断标准[4]的75 例慢性前列腺炎患者的精液标本， 通过详细询问患者病史，并进行慢性前列腺炎症状指数评分 （the national institutes of health chronic prostatitis symptom index，NIH-CPSI）、常规尿液检查和细菌培养、前列腺液检查及细菌培养。 具体诊断分组标准：患者均有临床症状，主要表现为下腹部、会阴、盆腔区域的疼痛和不适，伴有各种排尿异常、性功能障碍和精神症状，病程大于三个月，并排除尿道炎、附睾炎以及精索静脉曲张、直肠及肛周病变等可能引起类似症状的其他疾病。 所有患者均告知病情、检测项目和收费标准，患者及家属均知情同意。

对就诊患者除系统体格检查外，以“二杯法”[5]进行尿液常规检查及细菌培养、前列腺液常规检查及细菌培养。根据检查结果将慢性前列腺炎病人及健康对照分为4 组。第一组：Ⅱ型组（慢性细菌性前列腺炎）18 例， 前列腺按摩后尿液检查WBC＞10个/HP，细菌培养（+）；第二组：Ⅲa 型（炎症性）组25 例，按摩前尿液镜检WBC(—)，按摩后尿液镜检WBC＞10 个/HP，细菌培养(—)；第三组：Ⅲb 型（非炎症性）组32 例，按摩前、后尿液镜检WBC＜10 个/HP，细菌培养 (—)；第四组：健康对照组 20 例，前列腺按摩前后尿液检查WBC＜5 个/HP， 细菌培养(—)。

1.2 实验步骤和方法

1.2.1 样本收集、 处理和保存 手淫法收集精液标本后置离心机上1000rpm 离心10min，提取精浆并置于干燥试管中，-20℃冰箱内保存。使用时先在室温下解冻并确保样本均匀地充分解冻。 复温液化后取上清液使用试剂盒中提供的样本稀释液处理样本。

1.2.2 细胞因子IL-6 检测 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定精液中IL-6 表达水平。 使用两株识别不同部位的抗IL-6 单克隆抗体， 一株用以识别和结合待检标本中的IL-6， 另一株作为酶标抗体， 与结合于包被抗体的IL-6 的另一表位结合，并催化底物显色，根据标准品OD 值绘制标准曲线， 在标准曲线上查出待检标本中IL-6 的表达水平。

1.2.3 细胞因子IL-8 检测 采用ELISA 方法测定精液中IL-8 表达水平。 使用两株识别不同表位的抗IL-8 单克隆抗体，一株作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8 的另一表位结合， 并催化底物显色，根据标准品OD 值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本中IL-8 的表达水平。

1.3 结果分析和统计学方法 全部数据分析均采用SPSS11.5 软件完成。各数据用()表示，组间比较采用方差分析，P<0.05 认为有统计学意义。

2 结果

各组对象的年龄无统计学差异(P>0.05)。

各组研究对象精液中IL-6、IL-8 表达水平如表 1 所示。 Ⅱ型组、Ⅲa 和Ⅲb 型组精液中 IL-6 表达水平明显高于对照组，差别有统计学意义（P<0.01）；Ⅱ型组和Ⅲa 型组患者精液中IL-6 表达水平高于Ⅲb 型组，有统计学差异(P<0.05)。

统计学分析显示Ⅱ型组、 Ⅲa 和Ⅲb 型组精液中IL-8 表达水平明显高于对照组， 差别有统计学意义（P<0.01）；Ⅱ型组和Ⅲa 型组患者精液中IL-8表达水平高于Ⅲb 组，有统计学差异(P<0.05)。

除对照组外，各组精液中白细胞计数（WBC）、IL-6、IL-8 和 NIH-CPSI 进行相关性分析 （r 值）。NIH-CPSI 与白细胞计数无明显相关（r=-0.26,P>0.05），NIH-CPSI 评分与 IL-6 和 IL-8 表达水平呈正相关（r=0.429,P＜0.05）,各组 IL-6 和 IL-8 呈显著相关性（P＜0. 01）。

表1 各组间精液中细胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

表1 各组间精液中细胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

分组 N IL-6 IL-8Ⅱ型组Ⅲa 型组Ⅲb 型组对照组18 25 32 20 389.16±37.11 371.40±63.51 249.00±11.42 105.91±83.41 F=64.98 P=0.000 334.72±61.05 300.80±45.17 211.50±44.63 112.18±72.21 F=38.86 P=0.000

3 讨论

慢性前列腺炎(CP)是泌尿外科临床上最常见的前列腺疾病，它的特点是临床症状复杂多样，诊断步骤繁琐，且缺乏相对特异性的方法。 对该病的认识有许多困惑之处， 临床治疗效果难以有一个客观的评价标准[6]。 探索慢性前列腺炎的诊断标志物、研究慢性前列腺炎的发病机制，具有重要的临床意义。

IL-6 参与免疫调节免疫应答： 诱导B 细胞分化和产生抗体；诱导T 细胞表达IL-2 受体和产生IL-2；诱导T 细胞活化增殖和分化等。 IL-6 参与急性相蛋白反应,诱导多种急性相反应蛋白的合成和分泌。 IL-6 生物学功能广泛，可通过旁分泌、自分泌和内分泌3 种方式发挥作用。 Drannik 等[9]研究报告慢性前列腺炎患者的免疫应答中，IL-6 诱导T、B 细胞分化和增殖， 诱导神经生长因子（Nerve growth factor， NGF）和 IL-10 的表达，并且与它们协同作用，共同促进细胞和体液免疫应答。

IL-8 是一种趋化因子,在炎症刺激后由巨噬细胞、内皮细胞和其他细胞大量产生。 它是中性粒细胞的趋化因子，并能激活中性粒细胞的其他功能，如粘附和杀菌, 对活化的T 淋巴细胞亦有趋化活性。 Celik 等[10]在慢性阻塞性肺疾病的研究中发现，慢性阻塞性肺疾病患者血清和痰液中IL-8、TNF-a的表达水平明显高于正常人,且与慢性阻塞性肺气肿的类型和是否急性发作有关，进一步证明IL-8、TNF-a 参与了慢性炎症的发病及进展过程。

本研究中促炎性细胞因子IL-6，趋化因子 IL-8 含量在慢性前列腺炎（CP）中显著升高。 表明 IL-6 和 IL-8 在CP 的发生、发展中发挥重要作用，有可能成为CP诊断分型的参考指标之一。CP 患者精液中IL-6 水平、IL-8 水平和NIH-CPSI 疼痛症状评分之间呈正相关性(r=0.429，P＜0.01)，推测 IL-6 和 IL-8 可能参与患者疼痛症状的产生，IL-6 及IL-8 水平可能作为患者疗效评估的一个指标。 因此，精液可以部分替代前列腺液进行细胞因子的检测， 避免了病人前列腺按摩时引起的不适感和前列腺液标本量获取不足的问题。