蛴螬提取物对兔光损伤视网膜变性视网膜厚度的影响*

★ 吴大力 蒋鹏飞 彭俊 彭清华,4***（1.湖南中医药大学 长沙 410208；2.广西中医药大学第一附属医院 南宁 530023；3.中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室 长沙410208；4.湖南中医药大学第一附属医院 长沙 410007）

随着激光在眼科检查及治疗的广泛应用，由激光所致的医源性视网膜光损伤也越来越多，许多眼科疾病的发生与视网膜长期光照的积累效应有关［1-3］，如老年性黄斑变性。蛴螬在眼科应用较早，《晋书》中有此药治疗目疾的记载：“吴中书郎战冲，母王氏失明，婢取蛴螬蒸熟与食，王以为美，冲还知之，抱母恸哭，母目即开”。本实验探讨了蛴螬提取物对光损伤所致视网膜变性保护作用及最佳剂量。

1 材料

1.1 实验动物 选用30只健康实验性兔，均为雄性，体重 1.8～2.3 Kg。

1.2 主要实验药品、试剂及仪器 MoticB5光学显微镜，蛴螬提取物、Harris苏木素（湖南中医药大学病理实验室，批号：71020784）、ECL发光试剂盒（武汉赛维尔生物科技有限公司，批号：G2014）。

2 实验方法

2.1 分组方法 采用随机数字表法将30只实验性兔平均分为空白组、模型组、蛴螬低剂量组、蛴螬中剂量组、蛴螬高剂量组。

2.2 造模方法 采用自制光化学损伤装置对实验动物进行累计36 h光照［3］，实验动物不散瞳及麻醉，光照后送回暗环境中饲养。正常对照组不施行光照试验。

2.3 给药方法 A、B组每日以蒸馏水5 mL/Kg灌胃；C组按照成人日用量5倍剂量灌胃，为0.45 g/Kg，配成5 mL蛴螬提取物混悬液；D组按照成人日用量10倍剂量灌胃；E组按照成人日用量20倍剂量灌胃。每日灌胃1次，连续给药2周。

2.4 标本的制备 实验结束后，处死实验动物，摘除眼球，剥离激光斑部位视网膜，切片烘干备用。

2.5 指标测定 光镜下观察各组大鼠视网膜结构及厚度改变。

2.6 图像分析 用MoticB5光学显微镜10×40倍镜进行组织切片照相，用图形分析系统测量视网膜外核层连续5个视野的厚度。

2.7 统计学分析 统计学分析采用SPSS21.0进行正态性和方差齐性检验，及单因素方差分析（one way ANOVA）。P＜0.05表示差异具有显著性。

3 结果

3.1 HE染色光镜下病理形态学观察 A组：实验性兔视网膜结构层次分明。B组：视网膜层次结构模糊，分界不清，出现不规则淡染。C组：视网膜外核层胞核排列较疏松。D组：视网膜外核层增厚，视网膜外核层胞核排列较整齐密集。E组：视网膜外核层胞核排列较整齐，厚度有增加。见图1。

图1 各组实验性兔视网膜组织HE染色结果

3.2 各组间视网膜厚度比较 与空白组比较，其余各组视网膜厚度均不同程度变薄，差异有统计学意义（P＜0.05）；蛴螬低剂量组与模型组视网膜厚度比较，差异无显著性意义（P＞0.05），说明蛴螬低剂量组视网膜厚度无明显提高；蛴螬中、高剂量组与模型组相比，差异具有显著性意义（P＜0.05），说明蛴螬中、高剂量组视网膜厚度有明显增厚；蛴螬中剂量组与蛴螬低剂量组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

各组间视网膜厚度比较（ ，n=6） μm

4 讨论

眼底激光作为高能量的单色光，其对视网膜的灼伤属于眼外伤范畴，多导致视衣气阴受损，气虚血瘀。目珠脉道幽深细微，经络分布周密，气血纵横贯目，若激光灼伤目珠，气阴受损，脉络瘀滞，使神光发越受阻，视功能减退。目得阴血而能视，气脱者目不明，神光赖其真气真血真精之滋养，方能明视万物。益气则神光有所滋养，同时，气旺以促血行；活血化瘀则目珠脉道通畅，气血可以纵横贯目，神光方能有所发越。故治疗常以益气活血化瘀为主，辅以养阴利水。蛴螬在《神农本草经》中最早有记载：“主恶血血瘀痹气，破折血在胁下坚满痛，月闭，目中淫肤、青翳白膜”。

由于持续的光照，活性脂肪酸代谢和高氧消耗，视网膜光感受器细胞发生慢性氧化应激［4-5］，导致细胞内循环和降解减少，诱导炎症［6-7］。炎症是破坏细胞和组织内平衡的细胞反应，炎性受体通过识别或感知不同的病原体和损伤相关的分子模式来启动复杂的细胞级联反应，长期炎症在视网膜光损伤中扮演重要角色［8-10］。炎症反应诱导了视网膜细胞的凋亡，在持续的细胞凋亡中，视网膜厚度会逐渐变薄。

本实验发现模型组视网膜外核层厚度变薄，蛴螬中、高剂量治疗组与模型组相比，视网膜外核层厚度有所增加。表明视网膜光损伤后厚度会变薄，而蛴螬中、高剂量治疗组可以使视网膜厚度增加，提示蛴螬可对视网膜的损伤起到保护作用。