HPLC法测定脑力宝丸中远志皂苷元含量

高 晗 李 哲

神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430

脑力宝丸由远志、地黄、五味子、菟丝子、地骨皮、茯苓、石菖蒲、川芎、维生素B1、维生素E组成，载于《部颁标准中药成方制剂第十四册》，为中西复方制剂，具有滋补肝肾、养心安神之功效[1]，主要用于肝肾阴虚所致的健忘失眠、烦躁梦多、潮热盗汗、神疲体倦等证。远志为君药之一，具有宁心安神之功效[2]。其主要活性成分——远志皂苷元，为远志总皂苷碱水解的产物。本实验以远志皂苷元为指标成分，建立脑力宝丸HPLC含量测定质量控制方法。

1.1 仪器 Agilent1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司),检测器G7115A 进样器G7129C；METTLER-ALC-210.4电子分析天平(上海梅特勒托利多仪器有限公司)。

1.2 试药 脑力宝丸，神威药业集团有限公司(批号：1101231、1101232、1101241)；远志皂苷元对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111572-200702，)；甲醇，色谱纯(Thermo Fisher)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择 取远志皂苷元对照品溶液，在200～400 nm范围内扫描，结果在210 nm处有最大吸收，故选择210 nm作为检测波长。

2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：ACCHROM xAqua -C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱；流动相：甲醇-0.05% H3PO4(70：30)；检测波长：210 nm；流速1.0 mL·min-1；柱温35 ℃，进样量10 μL；理论板数按远志皂苷元峰计算应不低于3500。

A 远志皂苷元对照品

2.3 对照品溶液的制备 精密称取远志皂苷元对照品(经减压干燥)7.5 mg，至25 mL量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，得每1 mL含0.3 mg的对照品储备液。精密吸取对照品储备液4 mL于10 mL量瓶中，流动相将其稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备 取脑力宝丸30丸，除掉包衣，研细，取约2.5 g，精密称定，加入50 mL甲醇，水浴加热回流30 min，滤过，甲醇洗涤滤渣3次，每次10 mL，合并滤液与洗液，减压蒸干，残渣加入10% 盐酸溶液50 mL，采用水浴加热回流1 h，放冷，滤过，滤渣用水洗涤至中性，连同滤纸置锥形瓶中，加入甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液放置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 专属性 制作缺少远志的阴性样品(取除远志外其余药材，按法定工艺进行制备)，采用供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液，并进行含量测定，结果显示，远志阴性对照溶液在与远志皂苷元对照品相同保留时间处未见明显色谱峰，证明该方法专属性良好。如图1所示。

2.6 线性关系考察 精密吸取远志皂苷元对照品储备液各2、3、4、6、10 mL于10 mL量瓶中，加流动相稀释得浓度分别为59.68、89.52、119.36、179.04、298.40 μg·mL-1的对照品溶液，分别以2.2所示色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，相应的对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=8.629x-45.925(r=0.9999)，结果表明，远志皂苷元在59.68～298.4 μg ·mL-1范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验 取同一对照品溶液，以2.2所示色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD=0.80%。

2.8 重现性试验 取同一批样品，6份，以2.4所示方法分别制备供试品溶液，以2.2所示色谱条件测定，测得远志皂苷元平均含量为每丸0.47 mg，RSD= 1.41%。

2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h进样，以2.2所示色谱条件测定远志皂苷元含量，结果RSD= 0.85%，说明供试品溶液在12h内可基本稳定。

2.10 回收率试验 取同一批已知含量的样品(远志皂苷元含量：每丸0.47 mg)6份，各1.25 g，采用加样回收法，精密加入一定量远志皂苷元对照品，照2.4所示方法和2.2所示色谱条件进行含量测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果统计

2.11 样品测定 按上述HPLC含量测定法，对3批脑力宝丸(批号：1101231、1101232、1101241)进行测定，并计算远志皂苷元含量，结果分别为每丸0.47 mg、0.48 mg、0.48 mg，RSD=1.21 %。

3 讨论

脑力宝丸标准中远志皂苷元含量测定方法采用薄层扫描法，得出的结果精密度较低、误差较大，笔者通过建立远志皂苷元HPLC含量测定方法，提高了测定结果的准确度，减小了测量误差。实验中分别考察了甲醇-水、乙腈-水-冰醋酸(40∶60∶0.2)[3]、甲醇-0.05%磷酸[4-5]3种不同的流动相体系，结果发现甲醇-0.05%磷酸(70∶30)作为流动相，远志皂苷元峰的峰形对称，达到分离度的要求，该方法操作简便、专属性强，可为脑力宝丸中远志皂苷元的含量测定方法。