实时荧光PCR检测百日咳杆菌与百日咳抗体的临床应用分析

赵丽静

【摘  要】目的：评价实时荧光PCR应用于百日咳杆菌与百日咳抗体检测的价值。方法：将2017年9月-2019年8月在我院确诊为百日咳的56例患儿作为研究对象，采集患儿咽拭子，进行百日咳杆菌实时荧光PCR检测，采集患儿血液标本进行百日咳抗体IgM实时荧光PCR检测，统计检测结果，以百日咳杆菌与百日咳抗体IgM均为阳性作为百日咳诊断标准，统计实时荧光PCR联合检测百日咳杆菌、百日咳抗体诊断百日咳的准确率。结果：56例患儿百日咳杆菌的阳性率为85.70%，百日咳抗体IgM的阳性率为75.00%。实时荧光PCR联合检测两者诊断百日咳的准确率为73.21%。结论：实时荧光PCR检测百日咳杆菌及百日咳抗体IgM对百日咳的临床诊断具有辅助价值。

【关键词】实时荧光PCR;百日咳杆菌;百日咳抗体;临床诊断

【中图分类号】R440;R516.6      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）08-0067-02

百日咳为感染百日咳杆菌而发生的一种急性呼吸道传染病，发病后的主要临床表现为阵发性痉挛性咳嗽，且伴有“鸡鸣”样吸气性吼声，病程较长，可持续2～3个月，故称为百日咳。长期观察发现，该疾病的潜伏期较长，传染性较强，延误诊治很容易造成小范围流行[1]。因此，实现该疾病的早期临床诊治具有必要性。为进一步提高该疾病的早期确诊率，本研究探讨实时荧光PCR检测百日咳杆菌和百日咳抗体在百日咳临床诊断中的应用价值，现汇报研究内容如下：

1. 资料与方法

1.1一般资料

研究对象为2017年9月-2019年8月在我院确诊为百日咳的56例患儿。百日咳临床诊断标准：有明显的咳嗽症状、持续时间至少2周且伴有以下症状中的一项：（1）呈痉挛性咳嗽;（2）伴有“鸡鸣”样吸气性吼声;（3）无明显诱因的咳嗽后呕吐。56例患儿中，男患儿26例，女患儿30例，年龄5个月～3岁（1.06±0.26）岁。其家长均事先对本研究知情，同意患儿参与研究。

1.2方法

1.2.1百日咳杆菌检测

具体检测过程为：使用棉拭子取患儿咽部分泌物，置于装有无菌生理盐水的试管中立即送检。检测仪器为荧光定量PCR扩增仪（罗氏），检测试剂盒购自中国中山大学达安基因股份有限公司，严格按照仪器及试剂盒的说明书进行检测操作。

百日咳杆菌结果判定：Ct值<38，且有扩增曲线判定为阳性，Ct值≥38或无扩增曲线判定为阴性。

1.2.2百日咳抗体检测

具体检测过程为：使用真空抽血管采集患儿静脉血3ml，待血液凝固后，将采血管置于血清离心机中，以4000r/min的速度离心10min，取上清液进行百日咳抗体IgM。检测试剂盒购自上海康郎生物科技有限公司，严格按照仪器及试剂的说明书进行检测操作。

百日咳抗体IgM结果判定：浓度<14U/ml判定为阴性，反之判定为阳性。

1.3观察指标

统计研究对象实时荧光PCR检测百日咳杆菌和百日咳抗体IgM的阳性率以及实时荧光PCR联合检测百日咳杆菌和百日咳抗体IgM诊断百日咳的准确率。

诊断准确率评价参考的金标准为一般资料中的百日咳临床诊断标准，反映的是联合检测百日咳杆菌和百日咳抗体IgM诊断百日咳与金标准方法的符合程度。

2. 结果

2.1 56例患儿的百日咳杆菌和百日咳抗体IgM的实时荧光PCR检测结果

2.2实时荧光PCR联合检测百日咳杆菌和百日咳抗体IgM诊断百日咳的准确率

经统计得出，56例百日咳患儿中，共41例患儿的实时荧光PCR联合检测百日咳杆菌和百日咳抗体IgM诊断结果与金标准诊断结果符合，诊断准确率为73.21%（41/56）。

3. 讨论

世界卫生组织（WHO）的数据统计结果显示，全球人群的百日咳发病率近年来有明显的上升趋势，不仅危害人群身心健康，同时也造成了较严重的医疗资源损失[2]。如何进一步提高该疾病的早期确诊率值得进行探索。早期，病原学检查被认为是诊断百日咳的及标准，但经长期实践应用也发现诸多局限性，如病原微生物的培养过程易受到多种因素的影响，可能出现假阳性、假阴性的结果，且检验周期较长，较易造成疾病的延误诊治。

实时荧光PCR检测为现阶段在我国较受关注的一种检验方法，经实践证实多多种病原微生物及抗體均具有较高的敏感性和特异性。本研究应用该方法检测百日咳杆菌和百日咳抗体，并分析联合检测两者对百日咳的诊断价值。结果显示纳入研究的百日咳患儿的百日咳杆菌阳性率和百日咳抗体IgM阳性率均高于70%，实时荧光PCR联合检测两者诊断百日咳的准确率为73.21%。根据上述研究结果得出，实时荧光PCR检测百日咳杆菌和百日咳抗体能够为疾病的临床诊断提供辅助价值。百日咳杆菌的致病机制主要为其本身能够合成一种特异性的毒素，实时荧光PCR检测能够检出该毒素，且能够对该毒素进行定量[3]。因此，对百日咳杆菌具有较高的敏感性和特异性。百日咳抗体IgM近年来已被多个课题研究发现在百日咳发病早期具有较高的检出率，且初次感染的患者多会在痉挛期出现该抗体。因此，近年来该抗体检测在百日咳临床诊断中的应用较广泛。本次研究中也发现，实时荧光PCR检测百日咳抗体IgM为阳性的患儿多处于疾病的痉挛期。

综上所述，实时荧光PCR检测百日咳杆菌和百日咳抗体在百日咳临床诊断中的应用，有利于实现百日咳的早期诊断，值得各大医院开展应用。

参考文献

[1] 李振，汪丙松，王昭俐，等.质谱法与聚合酶链式反应检测法检测百日咳鲍特菌[J].中国临床医生杂志，2020，48（01）：92-94.

[2] 王青，刘莹，袁林，等.实时荧光定量聚合酶链式反应检测百日咳鲍特菌的效能研究[J].中国全科医学，2019，22（23）：2815-2819.

[3] 吴丹遐，陈强，李岚，等.百日咳感染在儿童慢性咳嗽中的地位及其临床特征研究[J].中国当代儿科杂志，2019，21（01）：18-23.