原因不明复发性流产患者外周血NK细胞亚群及细胞因子水平的研究

陈月婵

河南医学高等专科学校附属医院检验科，河南郑州 451191

自然流产主要指的是非人为目的造成的妊娠不足28周，且胎儿体质量低于1 kg的终止妊娠，自然流产者占总妊娠者的14.2%～19.9%[1]。复发性流产是自然流产的一种类型，主要指的是持续发生两次或两次以上的自然流产，发生率占1.5%～4.7%[2]。复发性流产的病因较为复杂；早期流产可能与以下因素相关：内分泌系统疾病、胚胎染色体异常、免疫系统疾病；晚期流产可能与以下因素相关：子宫畸形、子宫发育不良。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年2月至2019年2月本院收治的41例原因不明复发性流产患者作为实验组；另外，选取同期于本院进行检查的41例健康早孕者作为对照组。实验组纳入标准：(1)夫妻双方染色体均正常，(2)既往有自然流产史者，(3)对本研究知情同意；排除标准：(1)遗传性疾病患者，(2)合并严重自身免疫性疾病者。对照组纳入标准：(1)早孕反应正常者，(2)既往生育过足月健康胎儿者，(3)对本研究知情同意；排除标准：(1)有家族遗传病史者，(2)合并严重心、肝、肾功能障碍疾病者。实验组年龄为(33.8±1.9)岁，孕周为(10.8±2.2)周；对照组年龄为(32.3±2.1)岁，孕周为(11.2±2.3)周。

1.2方法 两组人群在检查前1天禁烟酒，保持充足的睡眠，低盐、低脂肪饮食；次日空腹抽取静脉血标本(8～10 mL)，离心处理，分离血清，置-80 ℃保存备用。采用流式细胞仪检测调节性T(Treg)细胞分泌的细胞因子[转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-10]和外周血NK细胞亚群(CD56+CD16-、CD56+CD16+、CD56-CD16+)水平；采用酶联免疫吸附法检测外周血辅助性T细胞(Th)相关的Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平)。将室温控制在24 ℃以下，标本检测在3 d内完成。

2 结 果

2.1两组间Treg分泌的TGF-β、IL-10水平比较 实验组Treg分泌的TGF-β、IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组外周血TGF-β、IL-10水平的比较

2.2两组间NK细胞亚群百分比的比较 实验组CD56+CD16-、CD56-CD16+亚群百分比显著低于对照组(P<0.05)；实验组CD56+CD16+亚群百分比显著高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组研究对象的NK细胞亚群百分比比较

2.3两组间Th1和Th2型细胞因子水平的比较 实验组IL-2、IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)；实验组IL-4、IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组研究对象的Th1型和Th2型细胞因子表达水平比较

3 讨 论

有学者认为，复发性流产的发生可能与以下因素密切相关：环境因素、心理因素、生活习惯不良、子宫营养不足等[3]。部分复发性流产患者的病因较为明确，但是仍然有50%左右的复发性流产患者病因尚不明确，因此，将其称为原因不明复发性流产[4]。国外的流行病学研究显示，随着自然流产发生次数的增加，孕妇再次发生胚胎丢失的概率也将增加[5-6]。原因不明复发性流产的发生将增加孕妇的心理压力，所导致的不良心理情绪作用于孕妇神经系统会影响内分泌系统的调节作用，导致神经递质释放过量反作用于机体系统，造成恶性循环，使得再次妊娠发生流产的概率提高20%左右[7]。

随着生殖免疫学的发展与进步，有学者研究认为原因不明复发性流产的发生与免疫因素密切相关[8]。母体在妊娠过程中，免疫调节机制发生巨大变化，免疫抑制作用也显著加强，但是免疫排斥反应却相应减弱；正常情况下，免疫抑制与免疫排斥反应保持平衡，如果平衡状态被打破，将导致母体的细胞免疫功能发生变化，母胎免疫失衡，出现自然流产情况。

有研究认为，原因不明复发性流产的免疫机制主要涉及以下几个方面，自身免疫，(2)外周血Treg细胞，(3)NK细胞亚群，(4)细胞因子等[9]。本研究显示，实验组CD56+CD16-百分比、CD56-CD16+百分比显著低于对照组，实验组CD56+CD16+百分比显著高于对照组。NK细胞亚群具有非特异性细胞毒性杀伤效应，NK细胞通过细胞介导的毒性反应以及激活杀伤细胞反应在机体内发挥细胞毒性作用，从而危害正常的妊娠过程。子宫NK细胞在妊娠早期通过分泌多种细胞因子参与到胎盘小血管的重塑中，从而保护正常妊娠。适当数量的CD56-CD16+细胞亚群能够有效抵御妊娠过程中的微生物感染作用；过多数量的CD56-CD16+将会对胎儿产生排斥反应，导致自然流产[10]。

Treg细胞是一种具有免疫调节功能的细胞群，可分泌TGF-β、IL-10，通过细胞间直接接触抑制自身T细胞的免疫性反应，促进抑制性细胞因子的分泌，有效维持机体内环境的稳定。近年来有关研究资料表明，Treg细胞在母胎免疫中起着关键作用。TGF-β、IL-10是参与免疫调节的细胞因子，Treg细胞通过释放上述两种细胞因子来起到维持机体免疫平衡作用[11]。IL-10可诱导滋养细胞，抑制Th1细胞，IL-10水平降低可能会诱发复发性流产。TGF-β有比较强的免疫抑制作用，通过抑制T细胞增殖，从而保护胚胎正常发育；TGF-β上调能够维持正常妊娠，而TGF-β下降则可能会诱发复发性流产[12]。本研究显示，实验组Treg分泌的TGF-β、IL-10水平显著低于对照组。

如果子宫NK细胞功能亢进，分泌过多IL-2、IFN-γ细胞因子，将导致母胎免疫失去平衡，继而发生自然流产事件[13]。IFN-γ通过损害滋养细胞发挥细胞毒性作用，IFN-γ与IL-2协同刺激细胞毒性T细胞的增殖，从而增强其抗病毒感染能力，导致胚胎发生排斥反应，最终发生自然流产事件[14-15]。IL-4可抑制淋巴因子激活杀伤细胞，降低IL-2受体表达，除此之外，能够促进人绒毛膜促性腺激素的合成，继而保护正常妊娠[16-17]。本研究显示，实验组IL-2、IFN-γ细胞因子水平显著高于对照组，实验组IL-4、IL-10等细胞因子水平显著低于对照组，表明Th1型细胞因子表达水平过高不利于正常妊娠，Th2型细胞因子水平过低不利于正常妊娠。

综上所述，外周血Treg细胞、NK细胞亚群及细胞因子水平可作为诊断原因不明复发性流产患者的重要参考指标。