酉阳县一起感染性腹泻的病原学检验及结果分析

田维锋

[摘要]：目的通过一起腹泻事件的调查处理和实验室检验，迅速，准确检出病原体，为疫情处理提供科学依据。方法病人肛拭，剩余食品按照GB4789增菌，分离，通过形态，生化，血清学实验，噬菌体，PCR结合进行鉴定;药敏实验采用K一B法，生活饮用水采用GB/T5750.12-2006检验。结果病人肛拭23件，其中3，9，12，16号检出EIEC;生活饮用水6件总大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌均>1600MPN/100ml，未检出EIEC及其它致病菌;剩余食品9件未检出EIEC及其它致病菌。结论经流行病学调查，临床症状，实验室检验结果，确认为是一起由肠道侵袭性大肠埃希氏菌（以下简称EIEC）引起的感染性腹泻事件。

[中图分类号]R941.3 [文献标识码]A [文章编号]2107-2306（2020）04-297-02

2019-4-30，酉阳县疾控中心接到辖区一医院报告，该院陆续收到一批发热，恶心，呕吐，腹痛，腹泻的病人，我中心立即前往现场，开展流行病学调查，采样，实验室检验。后经流行病学调查，临床症状，实验室检验结果，确认为是一起由肠道侵袭性大肠埃希氏菌引起的感染性腹泻事件，本文仅从病原菌检验部分分析与同行交流。

1样品名称

病人肛拭23件，生活饮用水6件，剩余食品9件。

2检验依据

GB4789[1-8]，《霍乱防治手册》第六版[9]，GB/T5750.12-2006[10]

3检验项目

沙门氏菌，志贺氏菌，金黄色葡萄球菌，霍乱弧菌，致泻性大肠埃希氏菌，副溶血性弧菌，单核细胞增生李斯特氏菌，蜡样芽胞杆菌。

4检验仪器及试剂

沙门氏菌，李斯特氏菌，0157显色平板，弧菌显色平板，金黄色葡萄球菌显色平板来自郑州博赛公司，生产批号20181112;其它成品培养基均来自青岛海博技术有限公司，在有效期内使用;沙门氏菌属诊断血清，志贺氏菌属诊断血清，霍乱弧菌抗体A，B，C，霍乱弧菌0139群诊断血清生产批号20190101EPEC，EIEC，ETEC，0157诊断血清，生产批号20181201均来自宁波天润公司;五种致泻大肠埃希氏菌PCR试剂来自北京卓诚公司，生产批号20190301。肠杆菌科噬菌体（7滴法），大肠埃希氏菌分型噬菌体来自金羿噬菌体公司，生产批号20190108;VITEK2来自生物梅里埃公司，PCR仪型号AFD9600，生产厂家达安公司。

5检验步骤

5.1取各样品半固体直接划线分离于SS，DHL，沙门氏菌显色平板，Mac，EMB，SMAC，0157显色平板，PALCAM，李斯特显色平板，MYP，4号琼脂，TCBS，弧菌显色平板，血平板，经适宜条件培养后观察结果。生活饮用水检测总大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌且做上述致病菌检测。

5.2分别取各样品半固体Iml，加入到10mlBPW，TTB，SC，志贺菌增菌肉汤，7.5%氯化钠肉汤，APW，LB1，EC，改良EC肉汤，胰酪胨大豆多粘菌素肉汤。经适宜条件培养后，分别转种于上述分离平板，经适宜条件培养后，观察结果。

5.3PCR取各样品半固体Iml于10ml营养肉汤中，经37C6h后，取400微升按试剂说明书，进行操作。

5.4经观察，在3，9，12，16号样品在SS，DHL，Mac，EMB上有无色，半透明，中等大小的菌落生长;其余平板均未见可疑菌落生长。

5.5分别取上述可疑菌落进行纯培养，用VITEK2进行生化鉴定、手工生化、血清学实验、肠杆菌科噬菌体实验、Sh噬菌体原液/IRTD及PCR实验、大肠埃希氏菌分型噬菌体实验，药敏实验;结果见表1-5。

5.63，9，12.16号菌株与EPEC.EIECETEC，O157诊断血清均未凝集。

5.73，9，12，16号菌株经上机鉴定为大肠埃希氏菌，且赖AA-，动力-，PCR鉴定为EIEC且检出ipaH，CT值均小于30。

6检验结果

病人肛拭23件，其中3，9，12，16号检出EIEC;生活饮用水6件总大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌>1600MPN/100ml，未检出EIEC及其它致病菌;剩余食品9件未检出EIEC及其它致病菌。

讨论

1致泻性大肠埃希氏菌共分为5种即EPEC致病性大肠埃希氏菌，EIEC侵袭性，ETEC产肠毒素大肠埃希氏菌，EHEC出血性大肠埃希氏菌，EaggEC肠集聚性大肠埃希氏菌，统称DEC。EPEC主要引起幼儿发病，发热，粘液便，靠eae，bfp致病;EIEC引起类似痢疾症状，腹部剧痛，有粘液便，脓血便，靠ipaH致病;ETEC引起腹痛，腹泻，引起旅游者，类似霍乱症状，靠肠毒素LT，ST致病;EHEC是引起出血性肠炎，痉挛性疼痛，鲜血样粪便，依赖stxl，stx2致病;EaggEC引起腹痛腹泻，靠eagg，astA致病。现在国内每年发生的食物中毒中，无论中毒次数还是发病人数均以微生物为主，微生物中又以细菌性食物中毒为主。细菌性食物中毒或感染性腹泻中，致泻性大肠埃希氏菌占有重要地位。对于DEC的检测，国家标准现为生化反应+PCR，对于生化反应符合株检测相应毒力基因来确诊。笔者查阅多篇报道，发现几乎所有食物中毒株均能进行血清学定型。本次事件由EIEC引起。侵袭性致泻大肠埃希氏菌（EIEC）可通过污染的水和食物引起暴发或流行，也可因接触传播形成散发病例;成人、儿童均可发，临床表现与菌痢相似，主要为腹痛、腹泻、发热、脓血便等"2;EIEC未定型，是否与诊断血清种类较少，涵盖不够有关，值得进一步商讨;根据OAg，HAg.KAg来判定菌型更准确，尤其是OAg结合HAg会更准确。

2由于在EMB，Mac上，EIEC与志賀氏菌难以区分，均为无色，半透明，中等大小的菌落，区分二者可采用各种实验如酒石酸盐，醋酸盐，粘液酸，葡萄糖铵等，但区分大肠埃希氏菌与志贺氏菌以葡萄糖铵最好，大肠埃希氏菌葡萄糖铵+，志贺氏菌葡萄糖铵一。实验发现，4株菌株葡萄糖铵+见表1，经上机鉴定也为大肠埃希氏菌。我们在实验中采用何晓青的肠杆菌科噬菌体效果很好，可以省去常规生化鉴定。我们发现4株菌裂解模式一致见表2，均出现Sh原液裂解，IRTD不裂解见表3。Sh类似于ipaH，它作用于细菌细胞壁受体，可使志贺氏菌及EIEC裂解。可以采用三步法进行筛选，葡萄糖铵+;赖AA-，动力-（除0124动力+外）;选取Sh原液裂解，1RTD不裂解的菌株结合检出ipaH即可鉴定为EIEC。国家标准规定赖AA-，动力-（除0124动力+外），可以防止将普通大肠埃希氏菌误诊为EIEC。我们采用生化反应，噬菌体结果与PCR结果结合，可使结果更准确。