火神山医院146例新型冠状病毒肺炎康复者特异性IgM、IgG抗体定量检测与分析

张兵华，许朝晖，王 娟，李双双，郭 玮，雷 燕，郭永博，陈亚强，李照辉，王晓坤，谢晓燕

新型冠状病毒被世界卫生组织命名为2019新型冠状病毒(2019 noval coronavirus， 2019-nCoV)[1-2]，冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)等较严重的呼吸系统疾病。截止2020年3月15日，全国已累计确诊新型冠状病毒肺炎患者81 099例，累计死亡3218例，危害巨大。已有研究显示患者感染2019-nCoV后，约在7 d产生针对病毒的IgM抗体，约在14 d产生IgG抗体[3]，然而新型冠状病毒肺炎康复者体内IgM、IgG抗体水平及变化规律尚不清楚。近期我们对武汉火神山医院出院的146例新型冠状病毒肺炎患者的2019-nCoV特异性IgM、IgG抗体进行检测，分析了患者康复后短期内抗体水平产生规律，为新型冠状病毒肺炎的预防、干预和康复提供线索。

1 资料与方法

1.1血液标本来源 2020年2月10日—3月10日于武汉火神山医院感染三科住院的146 例新型冠状病毒肺炎患者，均符合国家卫生健康委办公厅、国家中医药管理局办公室2020年2月18日颁布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》[4]。出院前1天收集患者血液标本，将患者依据发病时间到标本采集时间分为A组20例、B组58例、C组46例、D组22例，发病时间分别为≤30 d、31～39 d、40～49 d、≥50 d。4组年龄、性别及临床分型比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 146例新型冠状病毒肺炎康复患者一般情况比较

1.2IgM、IgG抗体检测 采用化学发光法检测血清2019-nCoV特异性IgM、IgG抗体，样本IgM和IgG浓度<10.0 AU/ml时，为无反应性(阴性)，样本IgM和IgG浓度≥10.0 AU/ml时，为有反应性(阳性)。IgM、IgG抗体检测试剂盒及iFlash3000全自动化学发光免疫分析仪均购自深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司。

2 结果

2.1IgM、IgG抗体与发病时间的变化趋势 新型冠状病毒肺炎康复者血清IgM抗体浓度随发病时间延长呈下降趋势(图1)，而IgG抗体随发病时间延长呈上升趋势(图2)。

图1 146例新型冠状病毒肺炎康复者血清IgM浓度与发病时间散点图

图2 146例新型冠状病毒肺炎康复者血清IgG浓度与发病时间散点图

2.2IgM、IgG抗体浓度结果比较 B、C、D组IgG抗体浓度高于A组，且C、D组高于B组(P<0.05,P<0.01)，而4组IgM抗体浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。C、D组IgG抗体浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 4组新型冠状病毒肺炎康复者血清IgM、IgG抗体浓度比较

3 讨论

《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》提出，新型冠状病毒肺炎疑似病例具备病原学或血清学证据之一者即为确诊病例[5]，首次将2019-nCoV特异性IgM、IgG抗体作为确诊的依据之一。机体遭受病原体感染后，最早出现的抗体即为IgM，通常发病后1周内即可在血清中检测到特异性IgM抗体，其升高能够为呼吸道感染患者病原学诊断提供重要参考[6]，特异性IgM抗体产生最早，但浓度低、维持时间短、亲和力较低，而IgG抗体产生晚，但浓度高、维持时间长、亲和力高，血清IgG抗体阳性往往提示中后期感染或既往感染。有研究发现2019-nCoV IgG、IgM检测具有较好临床特异度和较高的检出敏感度，可以作为临床新型冠状病毒肺炎筛查和诊断的必要补充[7]。

检测IgM、IgG抗体不仅用于诊断，还可以动态监测2019-nCoV感染后人体IgM和IgG的浓度变化，明确其变化规律，对于明确治疗效果、评估患者状态及判断病情转归具有重要意义。本研究采用化学发光法对符合新型冠状病毒肺炎出院标准患者的IgM、IgG抗体进行检测，初步观察到新型冠状病毒肺炎康复患者IgM、IgG抗体的产生有以下几个特点：①IgM抗体浓度增高。本研究结果显示,与正常参考值相比，4组IgM抗体的水平显著升高，但组间比较差异无统计学意义；②IgM抗体浓度呈现随发病时间延长而逐渐下降趋势，但发病30 d后IgM抗体下降缓慢，1例患者在发病70 d时多次核酸检测阴性，已符合出院标准，但IgM抗体仍高达42.66 AU/ml，这与SARS患者明显不同，SARS患者在康复60 d时所有IgM抗体均转为阴性[8]；③IgG抗体浓度明显增高。本研究结果显示，B、C、D组血清IgG抗体浓度高于A组，且C、D组高于B组。提示发病30 d后IgG抗体浓度明显高于发病30 d内的抗体浓度，但有少量患者在发病30 d后IgG抗体浓度仍无明显增高；④IgG抗体浓度呈现随发病时间延长而逐渐增高的趋势。本研究结果显示，C、D组IgG抗体浓度比较差异无统计学意义。提示IgG抗体可能在发病40 d后达到峰值。

2019-nCoV属于β属的冠状病毒，经过病毒序列比对分析，推测2019-nCoV的自然宿主可能是蝙蝠等野生动物[9]，N蛋白包裹病毒基因组，可作为诊断抗原[10]，目前对其理化特性的认识多来自SARS冠状病毒(SARS-CoV)和MERS冠状病毒(MERS-CoV)。纳入本研究患者在行2019-nCoV特异性IgM、IgG抗体检测前，已经至少2次检测核酸阴性，但是患者IgM、IgG抗体浓度增高程度不一，应结合患者症状、血常规、炎症指标及IgM、IgG抗体浓度做综合判断：①当IgM抗体浓度明显增高，而IgG抗体阴性，需对核酸检测结果存疑，应复查核酸检测[11]；②当IgM抗体阴性、IgG抗体阳性，提示患者既往感染，体内病毒已经被清除[12]；③当IgM、IgG抗体浓度均增高，患者可能处于恢复期，也可能为核酸检测假阴性[11]，此时可计算IgG抗体浓度与IgM抗体浓度比值，若比值>5，考虑患者近期感染2019-nCoV，但病毒已被清除，目前处于恢复期，若比值<5，可能处于恢复期，也可能为核酸检测假阴性，应复查核酸检测，结合患者临床表现综合判断，这种方法是否符合患者实际情况尚需进一步研究证实。

本研究不足之处在于观察时间较短，未能明确2019-nCoV特异性IgM、IgG抗体转为阴性的时间，需延长时间做进一步观察。另外，我们收治的患者均为普通型及重型患者，缺乏轻型及危重型患者，可能对结果的判断产生选择性偏倚。最后，当2019-nCoV核酸阴性，IgM、IgG抗体浓度均增高时，IgG抗体浓度与IgM抗体浓度比值与病毒清除之间的关系尚需进一步研究。