彭 琦,程少鹏,陈辅萍
(商洛市中心医院a.呼吸内科;b.检验中心,陕西商洛 726000)
肺癌是我国发病率和死亡率均位居榜首的恶性肿瘤,其严重威胁人们的生命健康[1-2],其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占肺癌的80%以上,并且患者的5年生存率仅为15%[3-5]。由于NSCLC 的发病机理尚不明确,因此临床上缺乏针对此病的根本疗法。目前主要的治疗方法有放射性治疗、化学药物治疗和生物靶向治疗等,其虽有一定的临床疗效,但仍存在明显的局限性。因此,如何有效预测和治疗NSCLC 仍是摆在科研工作者面前的重要难题。
神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)是神经元和神经内分泌细胞中特有的酶[6]。已有文献报道其在NSCLC 中呈高表达[7-8],但是关于其在NSCLC 中的表达鲜有报道,本研究旨在分析NSCLC 患者肿瘤组织中NSE 的基因表达及其与患者临床特征的相关性,以期为NSCLC 的临床诊疗提供合理参考。
1.1 研究对象 选取2013年1月~2017年12月商洛市中心医院157 例NSCLC 患者为研究对象,其中男性94 例,女性63 例,平均年龄55.5±11.9 岁。入院时收集和整理研究对象完整的临床资料。本研究经由我院医学伦理委员会批准,并且患者均自愿参加且签署知情同意书。
1.2 仪器与试剂 荧光定量PCR仪(ABI公司,7900HT型),电化学发光仪(广州金程科学仪器有限公司,ECL-20 型),电化学发光法所用试剂均购自北京陆桥技术公司。TRIzol Reagent 购自美国Invitrogen公司,RNA 反转录试剂盒和RT-PCR 试剂盒均购自TAKARA 公司,PCR 引物的合成和设计由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。
1.3 方法 分别取50 ~100 mg 冻存的NSCLC 组织及其相应的癌旁正常组织,放入有液氮的研钵中研磨,加入TRIzol 试剂提取NSCLC 组织及其相应的癌旁组织中的总RNA,然后采用RNA 反转录试剂盒和RT-PCR 试剂盒将RNA 反转录为cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增。GAPDH作为内参基因。
本研究采用电化学发光法检测血清NSE 水平。抽取患者股静脉血2ml,于室温下静置1 h,3 000 r/min 离心15 min,取上清液,离心后2 h 加样检测,严格参照仪器和原装试剂的操作流程进行检测。另外,根据血清中NSE 的水平,分为低表达组(NSE<15.2 ng/ml)和高表达组(NSE>50.0ng/ml)。
1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0 统计软件进行数据分析,NSCLC 组织和对应癌旁正常组织中NSE 表达水平的差异采用配对t检验,计量资料以均数± 标准差(+s)表示,PCR 结果采用2-ΔΔCt法进行分析。以P<0.05 为差异具有统计学意义。
图1 患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE 的相对表达量
2.1 患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE的相对表达量 见图1。探究患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE 的相对表达量,结果显示NSE 在NSCLC 癌组织中的相对表达量显著高于相应癌旁正常组织,其差异具有统计学意义(P=0.0182)。
2.2 患者血清中NSE 表达水平与患者临床特征间的相关性 见表1。进一步探究NSE 表达水平与NSCLC 患者的临床特征间的相关性,结果显示NSE 表达水平与NSCLC 患者是否吸烟(P=0.002)、是否饮酒(P=0.032)、临床分期(P=0.001)、是否原位癌(P<0.001)、有无淋巴结(P<0.001)和远端转移显著相关(P=0.017)。
表1 患者血清中NSE 表达水平与患者临床 特征间的相关性[n(%)]
肺癌是我国第一大癌,其中NSCLC 占所有肺癌病例的85%左右。临床上绝大多数的NSCLC 患者在就诊时已错过了最佳手术时机,只能选择放化疗。近年来探索有效的肿瘤标志物用于NSCLC 的预测和治疗已成为科研工作者们关注的热点。肿瘤标志物作为肿瘤发生、发展过程中的特异性物质,其可在恶性肿瘤的鉴别诊断、临床分期、疗效评估以及预后判别中发挥重要的作用[9-10]。
本研究旨在分析NSCLC 患者肿瘤组织中NSE的基因表达及其与患者临床特征的相关性,以期为NSCLC 的临床预测和诊疗提供合理参考。结果显示NSE 在NSCLC 组织中的相对表达量显著高于相应癌旁正常组织,这就表明NSE 可作为NSCLC 的肿瘤标志物。另外NSE 表达水平与NSCLC 患者的吸烟和饮酒习惯有关,并且还与患者的临床分期、是否原位癌、有无淋巴结和远端转移显著相关。
综上所述,在NSCLC 患者中NSE 可作为其诊断的生物学指标,在临床实践中可考虑将NSE 作为NSCLC 早筛和诊疗的重要指标加以应用。