六种单味药对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌效果研究

同小妮，林娜娜，张珊珊，张怡敏*

（陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046）

近年来，通过研究表明，金黄色葡萄球菌Sau在医院革兰阳性菌中检出率最高，它能够引起广泛地感染，如皮肤炎症、中毒性休克、肺炎、骨髓炎等一系列疾病且其耐药性随着抗生素的广泛使用随逐年上升趋势[1-2]，大肠埃希菌Eco引发的一系列腹泻、脑膜炎及败血型感染等也与之相关[3]。耐药细菌的出现会导致临床抑菌药物使用效果减弱，因此，临床迫切需要引入非抗生素治疗方法以及寻找具有新结构和新的作用机制的药物[4]。综上所述，对Sau和Eco进行抑菌的研究尤为重要。因此，为传播中医药文化发掘中草药抑菌及其自身优势，本实验前期通过大量资料搜集，找出了六种中草药，金银花、黄连、黄芩、连翘、五倍子、艾叶，通过体外抑菌的方法研究探讨其分别对两种细菌的抑菌效果。

1 实验材料

1.1 药材

黄芩、黄连、连翘、金银花、艾叶、五倍子各500克。

1.2 菌株

大肠埃希氏菌[ATCC25922]和金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]的标准二代斜面菌株

1.3 培养基

MH肉汤、MH琼脂、血培养基

1.4 溶剂和试剂

生理盐水、75%酒精

1.5 仪器

生物安全柜：BBS-SDC型、生化培养箱：LRH-250A

1.6 器材

移液枪、一次性pu管、试管架、、玻璃杯、无菌96孔聚乙烯U形微量板、0.5麦氏比浊管、平板、牛津杯（7.8*6*10 mm）、接种环、手套、口罩等。

2 方法及步骤

2.1 菌种活化

从4℃保存的Eco和Sau斜面菌株上分别取单个菌落接种于不同血培养基上扩增备用。

2.2 中药的制备

六味药分别加适量水煎煮浓缩成10～20ml，配成浓度为100 mg/ml的药液标记备用。

2.3 抑菌圈测定

分别取Eco和Sau接种于琼脂培养基上，并放置好牛津杯，在牛津杯中滴药液。在37℃培养24h，测出其抑菌圈值记录。

2.4 MIC测定

在96孔聚乙烯U形微量板中除第一列的其余孔内加入100μl肉汤培养液，在第一列孔内加入100μl药物，并依次进行二倍稀释，并将测定完成的菌液在每个孔内加入100μl。同时在96孔板中做肉汤培养液和纯菌作为实验对照组，观察生长变化得出其MIC值。

2.5 MBC测定

取最适的MIC孔前后共五个孔涂抹到琼脂培养基上做好标记，在37℃中培养24h，分别观察培养基上菌落生长情况记录结果。

3 数据记录

表1 MIC测定与牛津杯抑菌环实验结果

表2 MBC测定结果

4 讨 论

六种单味药对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均有不同程度的抑菌效果。在牛津杯抑菌实验中，对Sau的抑菌效果，五倍子最好，艾叶次之，其次黄连。对Eco的抑菌效果，艾叶最好，黄芩次之，其次五倍子。MIC和MBC实验结果，五倍子对Eco和Sau的最小抑菌和杀菌浓度都是最小。对于Eco最小抑菌浓度效果最好的是五倍子，最小杀菌浓度效果最好是艾叶，综合两种细菌的牛津杯抑菌实验、MIC和MBC实验分析，Sau中，牛津杯抑菌实验、MIC和MBC抑菌效果最好的单味药都是五倍子。由于对Eco的牛津杯抑菌实验、MIC和MBC的抑菌效果的单味药不一致，分别为艾叶、五倍子、艾叶。因此，需要对Eco的抑菌效果最好的艾叶和五倍子进行对比，由于艾叶牛津杯抑菌圈最大，且最小杀菌浓度最小。得到对Eco抑菌效果最好的是艾叶。综上，五倍子对Sau的抑菌效果最好，其次艾叶＞黄连＞黄芩＞金银花＞连翘。艾叶对Eco的抑菌效果最好，其次黄芩＞五倍子＞黄连＞金银花＞连翘。但单味药与复方制剂相比，存在药物效果不明显等问题，需要进一步扩大研究范围。