HPLC法测定不同时期鲜枣中环磷酸腺苷含量变化的研究

苗潋涓，侯艳霞，宿炳林，郝瑞芳，常 宁，卢桂宾

(山西林业职业技术学院园艺系，山西 太原 030009)

环磷酸腺苷(cAMP)是在人体内广泛存在的一种具有生理活性的重要物质，是生命传递的“第二信使”，参与调节细胞的生理活动和新陈代谢。据报道，在目前所有测得的动植物样品中，cAMP含量在枣中是最高的。cAMP检测大多采用蛋白免疫结合法、高效液相色谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法等。本试验以鲜枣为研究对象，通过纤维素酶水解浸提，提取鲜枣样品中的活性成分cAMP，采用高效液相色谱法，测定不同品种鲜枣中cAMP的含量，同时检测不同成熟期鲜枣样品中cAMP含量的变化，为后期开发枣功能产品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料

鲜枣(包括木枣、壶瓶枣、板枣3种)，采自山西省农科院果树所国家枣种质资源圃。

1.1.2 试剂与仪器

试剂与仪器见第2页表1.

表1 试剂与仪器

1.2 方法

1.2.1 标准溶液配制

精确称取环磷酸腺苷标准品0.100 0 g，用纯水溶解并定容至100 mL，得到1.0 mg/mL的标准贮备液，保存于4 ℃，可稳定1个月。分别吸取cAMP贮备液0.1 mL，0.2 mL，0.5 mL，1.0 mL，1.5 mL，2.0 mL加到100 mL容量瓶内，配制成1.0 μg/mL，2.0 μg/mL，5.0 μg/mL，10 μg/mL，15 μg/mL，20 μg/mL浓度系列标准液，过0.45 μm有机系滤膜，备用待测。

1.2.2 样品预处理

将3种鲜枣切条干燥，粉碎机磨成粉末并过筛，枣粉备用。准确称取1.000 0 g枣粉，热水溶解后65 ℃温水浴1 h，取出后冷却到室温，柠檬酸调节pH为5.0.加入纤维素酶(1∶100)在45 ℃水浴45 min，然后超声20 min，取出后用50 mL离心管定容。4 ℃离心10 min，转速4 000 r/min，样液过0.45 μm有机系滤膜，装入进样瓶，备用待测。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

分别把装有1.0 μg/mL，2.0 μg/mL，5.0 μg/mL，10 μg/mL，15 μg/mL，20 μg/mL浓度系列标准液的样品瓶放入自动进样器，设置进样量为10 μL.峰面积为横坐标(X)，浓度为纵坐标(Y)，作标准曲线，结果见图1.

图1 环磷酸腺苷标准曲线

由图1可以看出，环磷酸腺苷在10.0 μg/mL～50.0 μg/mL浓度范围内，浓度和检测峰面积呈良好线性关系，线性方程为y=0.000 317 88x+0.254 771 30，相关系数为0.999 148 04.

2.2 分离度

研究发现，在本试验色谱条件下分析环磷酸腺苷保留时间是5.86 min，和cAMP标准品色谱图对比，确定测定样品含环磷酸腺苷。

环磷酸腺苷标准品、样品HPLC谱图见图2，图3.

图2 环磷酸腺苷标准品HPLC谱图

图3 环磷酸腺苷样品HPLC谱图

2.3 不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量

不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量见第15页图4.

由图4可以看出，不同品种不同生长时期鲜枣中cAMP含量差异较大。其中，木枣各时期cAMP含量均高于板枣和壶瓶枣。木枣在白熟期含量最高，可达到580.9 μg/g；板枣和壶瓶枣中cAMP含量相对较低，分别为135.83 μg/g和129.92 μg/g.

图4 不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量

3 结论

1) 从3个品种鲜枣中cAMP含量分析结果来看，不同品种不同生长期cAMP含量不同。其中，木枣含量最高，达到580.9 μg/g，尤其是白熟期含量较其它生长期更高。随着枣果的成熟，其cAMP含量呈下降趋势。

2) 木枣白熟期cAMP含量最高，是板枣和壶瓶枣含量的4倍左右；木枣白熟期cAMP含量是半红期的4倍左右，是全红期的9倍左右。

3) 本研究为不同地域枣果cAMP含量研究提供了理论依据，下一步可对不同地域环境不同时期枣果中cAMP含量进行深度研究。