液相色谱检测仪示差折光率检测器不确定度评定及影响因素

于飞 郭建亭

摘要：通过对液相色谱仪中示差折光率检测器的影响测量结果的各个不确定度分量分析，系统的了解示差折光检测器在日常检测过程中面临的问题，要注意的事项。研究结论为以后在液相色谱检定工作中提供经验和参考。

关键词：示差折光率检测器;不确定度;影响

中圖分类号：TB文献标识码：Adoi：10.19311/j.cnki.16723198.2020.23.079

示差折光率检测器是一种浓度型检测器，它是通过连续测定液相色谱柱流出液折射率的变化而对样品浓度进行检测的。理论上流动相所带样品浓度越高，示差折光率检测器的响应越大，用流动相溶解样品之后进入色谱仪的流动相和色谱仪本身的流动相之间折射率之差反映了样品在流动相中的浓度。因此，理论上前期处理后，在色谱检测仪中只要有浓度差异的样品都可以用示差折光率检测器进行分析检定。

这次用来作为例子的液相色谱折光率检测器在检测上主要用于糖类物质的分析。下面将主要分析影响示差折光率检测器的不确定因素以及该检测器不确定的评定。

1以最小检测浓度不确定度的评定为例分析影响检定的因素

1.1仪器与试剂

仪器：沃特世液相色谱仪（e2695型），示差折光率检测器（2414型），微量进样器（50μL）。

试剂：甲醇（色谱纯），甲醇中胆固醇溶液标准物质（200μg/ml，Urel=2.0，k=2），甲醇中胆固醇溶液标准物质（5μg/ml，Urel=5.0，k=2）。

1.2色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18 柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：甲醇;流量：1.0mL/min;柱温箱：35℃;检测池温度：40℃。

1.3检定方法

（1）检定之前，确保室内温度稳定。进行有效控温，确保检测器受温度的影响达到最小。

（2）以纯甲醇为流动相，流动相将参比池充满，在上述2的色谱条件下，稳定基线。

（3）经过约4个小时的平衡后，注入20μL的5μg/ml的胆固醇-甲醇标准溶液，记录下图谱，见图1。

（4）选择适当灵敏度，在原有色谱条件下，注入20μL的200μg/ml的胆固醇-甲醇标准溶液，记下相应胆固醇特征峰在14.980min上，见图2。

（5）在相应保留时间位置上，进一步确定最小检测浓度检定时胆固醇特征峰所在位置。

1.4最小检测浓度计算模型

由最小检测浓度计算模型看，最小检测浓度的不确定度与基线噪声、标准物质的浓度、标准物质的峰高、进样体积有关。

1.4.4进样体积引入的不确定度分量μrel（V）

根据校准证书中对微量进样器进行校准的结果为U=0.22μL，k=2，则微量进样器进样体积引入的相对不确定度为μrel（V）=0.55%。

1.4.5合成标准不确定度

1.5最小检测浓度检定时的扩展不确定度

2其他因素对示差折光率检测器检定的影响

2.1检定用标准物质带来的不确定度影响

原先JJG 705-2002用的丙三醇水溶液作为标准物质，因水的存在而造成的峰型差、检定工作中经常出现杂峰，检定中由流动相带来的不确定度增加。JJG 705-2014则改为了胆固醇-甲醇作为流动相，这种不确定的影响将大大减少。

对于经常从事色谱检定工作的检定员来说，还要注意使用胆固醇标准物质检定时，因为倒峰出现，相应的胆固醇特征峰响应值较低的问题。可以在后期的积分时进行处理，避免了增加重复性误差引入的不确定度。

2.2环境温度带来的不确定影响

因为示差折光率检测器是通过测量液相色谱柱流出液折射率的变化而对样品浓度进行检测的，液体的折射率受温度变化影响较大，基线平衡也因此受到温度的影响。所以检测器所处环境温度变化应控制在2℃以内。同时给予较长的平衡时间。柱温箱温度最好高于室温（5～10）℃。并将检测器放置弱风处。尽量减少环境条件给检定带来的不确定度影响。

2.3流动相以及参比池带来的不确定影响

为了尽量降低流动相中气泡对折射率造成影响，进而出现不必要的杂峰，流动相一定要混匀，而且要充分脱气;并且甲醇溶液做流动相时，应预先冲洗参比池，最后稳定的充满整个参比池，消除溶剂折射率的变化给检定增加不确定因素。

3结论

本文依据JJG705-2014 规程，以waters 2414型示差折光率检测器为例探讨了液相色谱仪的最小检测浓度检定中不确定度评定的几个分量来源以及计算，从另一方面分析了对检定结果会造成影响的其他不确定度项，尽量在日常工作中降低不必要的影响分量值。提高检定工作质量。

参考文献

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[2]何海红，何雅娟，王卫华.液相色谱仪示差折光率检测器的检定[J].化学分析计量，2015，（3）：9597.

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