探讨IL-34对慢性根尖炎中RANKL/OPG平衡的影响

王敏 徐丽 朱永娜 张晓东

[摘 要] 该文研究之目的：慢性根尖炎主要是以根尖炎性骨破坏为表现的口腔常见疾病，RANKL/OPG调节慢性根尖周病中的骨吸收。该文主要研究炎性因子IL-34对RANKL/OPG的平衡的影响，从而进一步探索IL-34在该疾病中的致病机理。之方法：实验组选用18组根尖周炎病例的肉芽组织，对照组选用正畸拔牙中的健康牙周组织8例。应用免疫组化检测IL-34、RANKL及OPG的表达情况，并进行数据测量及定量分析三者之间的相关性。之结果：在慢性根尖周炎中IL-34在根尖周炎和对照组的表达量分别为0.206±0.038和0.131±0.023，差异有统计学意义（P<0.05）。在根尖周炎组IL-34与RANKL呈负相关（r=-0.578，P=0.039）;IL-34与OPG呈正相关（r=0.778，P=0.000），差异均有统计学意义。之讨论：本次实验证明了IL-34与根尖周炎的发生有很大关系，但IL-34可能只是很多影响RANKL/OPG平衡的炎性因子的一种。

[关键词] IL-34;RANKL;OPG

[基金项目] 蚌埠医学院自然科学基金（BYKY17118）

[作者简介] 王 敏，就职于蚌埠医学院第二附属医院口腔科;徐 丽，就职于蚌埠医学院第一附属医院口腔科;朱永娜，张晓东，就职于蚌埠医学院第二附属医院口腔科。

[中图分类号] G642.0    [文献标识码] A    [文章编号] 1674-9324（2020）23-0113-02    [收稿日期] 2019-11-13

慢性根尖周炎是口腔临床上最为常见的一种疾病，临床表现为炎症性的骨吸收导致的根尖组织破坏[1]。骨吸收主要由破骨细胞负责。核因子κB受体活化因子配体RANKL是由成骨细胞、骨细胞、T或B淋巴细胞等分泌的膜结合配体，其与受体RANK结合后，促进破骨细胞的形成并产生骨吸收[2]。而OPG（骨保护素）是另外一种配体，它可以结合RANK受体，从而阻断了其与RANKL的结合，破骨细胞的产生被抑制了，从而压抑了炎性骨的破坏[3-4]。RANKL/OPG的平衡受炎症因子IL-34的调节。本课题组前期研究表明IL-34与慢性根尖周病的发生密切相关[5-7]，但是其在该病中的致病机理还不清楚。因此本课题旨在前期研究的基础上通过免疫组化研究慢性根尖周肉芽肿和慢性根尖周囊肿中三者的表达，揭示IL-34对慢性根尖周病中RANKL/OPG平衡的调节，从而进一步探索IL-34在该疾病中的致病机理，为慢性根尖周病的临床治疗提供一定的理论依据。

一、资料与方法

（一）临床资料

【实验组及对照组】

根据X线表现确定标本

收集2018年1月—2018年6月在蚌埠医学院第二附属医院口腔科就诊的病例，患者年龄均为成年，患者无其他口腔疾病和全身系统性疾病。由两名口腔影像学医生与主治大夫一起根据X线参考标准[8]确定慢性根尖炎病例，并收集其组织标本40例。

收集因正畸拔除健康牙时切除的牙周组织10例为正常对照组。

（二）方法

1.HE染色。及时将收集的标本（软组织）用去离子水仔细清洗。放于甲醛溶液中（4%）固定。一天后行石蜡包埋，连续切片后进行染色。在显微镜下观察结果，严格遵照相应标准，并与影像学资料进行对比，最终得出18例实验组，8例对照组。

2.免疫组化。严格按照SP免疫组化法，将实验组与对照组进行抗原修复。每张切片加入相应的IL-34、RANKL及OPG抗体，加入DAB显色液，苏木素复染后得到观察切片。在显微镜下观察，每张切片随机选择其中5个视野进行拍照，用图像软件进行数据处理分析。

3.数据处理。将所得到的数据使用SPSS20.0軟件进行分析，将所得到的结果计量资料以均数±标准差（x±s）表示，相关结果比较用t检验，相关性分析用Pearson法，P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

（一）HE染色结果

根尖炎中的肉芽组织HE染色明显可见大量炎性细胞浸润（包括GRA、LYN及Plasma cell等），很多微小的新生血管形成。因正畸而拔牙的健康牙周组织HE染色见大量纤维组织，炎性细胞较少。

（二）IL-34的表达

两组切片行免疫组化，后对根尖组（n=18）和对照组（n=9）进行IL-34表达测量，所得的两组结果进行独立样本t检验，结果参见表1，统计学分析所得（t=2.59，P=0.017）P<0.05，两者差异有统计学意义。

（三）IL-34与RANKL和OPG表达的关系

如表2所示，经Pearson相关检验，在根尖炎组中IL-34与RANKL的相关性分析结果有统计学意义（P<0.05），呈负相关。IL-34与OPG的相关性分析有统计学意义（P<0.05），呈正相关。

三、讨论

本次实验证实了IL-34与根尖周炎的发生发展有着很大的联系。IL-34的表达与RANKL表达呈负相关，与OPG的表达呈正相关。彭彬等[9]在2005年就在SD大鼠的根尖周炎中发现了RANKL，在牙髓暴露后的7天观察就发现破骨细胞样细胞和RANKL呈阳性的细胞。14天后随着炎性骨吸收进一步发生，破骨细胞和RANKL阳性细胞继续增多。但28天以后，骨吸收减弱，相对应的破骨细胞和RANKL阳性细胞较少，正好与此次实验结果不符。黄哲敏[ 10 ]在2015年发现，在类风湿性关节炎的患者中的血清中发现，IL-34与RANKL阳性细胞表达呈正相关。国外学者在2012年在大鼠的根尖周炎模型中发现，在根尖周炎发生后的第7和第8周，发现RANKL表达明显增加，OPG表达明显减少。其第7周，两者比值是正常的对照组的30倍。第8周，两者的比例是对照组的41倍[ 11 ]。Menezes R等[ 12 ]在2008年发现RANKL和OPG之间的比值大小，可以作为根尖周炎病变不同时期的标准。

本次實验的结果的异常原因可能显示影响RANKL/OPG平衡除了IL-34炎性因子外可能还有其他因子。另外和实验切片的选取，抗体的购买选择都有可能产生异常结果，未达到预期的实验目的。故下一步实验增加样本量，并且对样本的质量进行严格筛选，希望能找到除IL-34外其他能影响RANKL/OPG表达的炎性因子。

参考文献

[1]Koivisto T，Bowles WR，Rohrer M.Frequency and distribution of radiolucent jaw lesions：a retrospective analysis of 9723 cases[J].J Endod，2012，38（6）：729–732.

[2]Lerner U H.Inflammation-induced bone remodeling in periodontal disease and the influence of post-menopausal osteoporosis[J].Journal of Dental Research，2006，85（7）：596-607.

[3]Simonet W S，Lacey D L，Dunstan C R，et al.Osteoprotegerin：a novel secreted protein involved in the regulation of bone density[J].Cell，1997，89（2）：309-319.

[4]胡菊花，李倩，王艳青，等.白细胞介素-21和核因子κB受体活化因子配体在人根尖囊肿和肉芽肿中的表达及临床意义[J].华西口腔医学杂志，2015，3（3）：244-248.

[5]Zhang X，Peng B.Immunolocalization of receptor activator of NF kappa B ligand in rat periapical lesions.[J].J Endod，2005，31（8）：574-577.

[6]Menezes R，Garlet T P，Letra A，et al.Differential Patterns of Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand/Osteoprotegerin Expression in Human Periapical Granulomas：Possible Association with Progressive or Stable Nature of the Lesions[J].Journal of Endodontics，2008，34（8）：932-938.

The Effect of IL-34 on the Balance of RANKL/ OPG in Chronic Periapical Inflammation

WANG Mina，XU Lib，ZHU Yong-naa，ZHANG Xiao-donga

（a.Department of Stomatology，The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China;b.Department of Stomatology，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China）

Abstract：Objective：Chronic apical inflammation is mainly a common oral disease characterized by apical inflammatory bone destruction.RANKL/OPG regulates bone resorption in chronic periapical disease.In this paper，the effect of inflammatory factor IL-34 on the balance of RANKL/OPG is studied，so as to further explore the pathogenic mechanism of IL-34 in the disease.Methods：The granulation tissue of 18 groups of periapical periodontitis was selected in the experimental group，and 8 cases of healthy periodontal tissue in orthodontic extraction were selected in the control group.The expression of IL-34，RANKL and OPG was detected by immunohistochemistry，and the data were measured and quantitatively analyzed.Results：In chronic periapical periodontitis，the expression levels of IL-34 in periapical periodontitis and control group were 0.206 ±0.038 and 0.131 ±0.023 respectively，and the difference was statistically significant （P<0.05）.In periapical periodontitis group，IL-34 was negatively correlated with RANKL （r=-0.578，P=0.039），and IL-34 was positively correlated with OPG （r=0.778，P=0.000）.Discussion：This experiment proves that IL-34 has a great relationship with the occurrence of periapical periodontitis，but IL-34 may only be one of the many inflammatory factors that affect RANKL/OPG balance.

Key words：IL-34;RANKL;OPG